Антитела поликлональные и моноклональны

В разделе изложены методы иммунизации животных и гибридизации клеток для получения поликлональных и моноклональных антител, методы получения препаративных количеств антител и их очистки, способы введения ферментных меток в антитела и антигены для использования в иммуноферментном анализе, способы введения радио-изотопных меток в антитела для радиоиммунного анализа, методы изучения антигенных свойств ферментов [c.307]

Рис. 19. Схема получения гибридных поликлональных и моноклональных антител, специфичных

В иммуноферментном анализе используются поли- и моноклональные антитела как по отдельности, так и вместе. Относительная легкость получения поликлональных антител из антисывороток иммунизированных животных в ряде случаев дает возможность пренебречь их гетерогенностью. Однако разработка метода получения моноклональных антител — продуктов гибридных клеток — дала им огромные преимущества в иммунохимическом анализе в связи с уникальными свойствами, выгодно отличающими их от антисывороток. Использование моноклональных антител в иммуноферментном анализе дает возможность работать с практически неограниченным источником антител, однородных по молекулярным и иммунологическим свойствам. С их появлением открылись новые возможности для структурного изучения антигенов. Это связано с тем, что моноклональные антитела, продуцируемые гибридомами, связываются со специфическим участком на поверхности белковой молекулы — антигенной детерминантой и могут быть использованы в качестве селективных зондов на определенные структурные участки. [c.306]

А — сэндвич >-анализ с поликлональными антителами стадия 1 — инкубация антигена с иммобилизованными антителами с последующей отмывкой несвязавшихся компонентов стадия II — добавление меченных ферментом антител, инкубация и отмывка несвязавшихся компонентов стадия III — детекция ферментативной активности Б — сэндвич>-ана-лиз с моноклональными антителами стадия 1 — инкубация антигена с моноклональными иммобилизованными антителами и конъюгатом антител с ферментом с последующей отмывкой всех несвязавшихся компо- [c.119]

Таблица 7. Сопоставление свойств моноклональных антител и поликлональных антисывороток (М. О Наге, 1984)

ИС - неочищенная сыворотка крови МАТ - моноклональные антитела ПАТ - поликлональные антитела [c.301]

Очистка антигена. Цитозольную фракцию из мозга свиньи (с. 379) пропускают через колонку с иммуносорбентом (1x2 см) в фосфатном буфере (pH 7,4) и колонку промывают тем же буфером. Элюцию проводят 2 М глициновым буфером (pH 2,8), фракции нейтрализуют 2 М трис-НС1 буфером, pH 8,6 Определяют концентрацию белка, цАМФ-связывающую активность (с. 331) она не должна быть ниже 12 нмоль/мг. Проверяют чистоту полученного препарата регуляторной субъединицы (м. м.=56 ООО Да) методом электрофореза (с. 119). Таким же способом, имея моноклональные или поликлональные антитела к соответствующим антигенам, можно получить гомогенные препараты этих антигенов. [c.325]

По-видимому, предела чувствительности метода электропереноса с последующим ИФА достигнуть еще не удалось. Весьма вероятно, что доступную на сегодняшний день чувствительность в ближайшем будущем удастся заметно повысить за счет улучшения качества конъюгатов и использования более чувствительных субстратов. Применение нашей методики позволяет в системе [БСА — антитела против БСА] регистрировать антитела при их концентрации в растворе 10 нг/мл, а антиген-—в количестве 10 нг на 0,5-сантиметровую полоску. При этом мы используем кроличьи поликлональные антитела. Применение моноклональных антител для обнаружения антигенов патогенных паразитов позволяет повысить чувствительность обнаружения до 50 пкг. Полагают, что предел чувствительности обнаружения антигенов на блоте с помощью ИФА может достигать 10—20 пкг. Не исключено, что применение более чувствительной системы фермент—субстрат позволит выйти за рамки названных ограничений чувствительности метода. [c.351]

В сыворотке иммунизированных животных всегда накапливаются продукты, секретируемые многими клонами В-лимфоцитов. Сывороточные антитела при любых схемах иммунизации представляют собой смесь молекул антител, гетерогенных по специфичности, аффинности и классовой принадлежности, вследствие чего имеется неизбежная перекрестная реактивность иммунных сывороток с разными антигенами. Перекрестная реактивность делает трудным или невозможным идентификацию уникальных антигенов. Моноклональные антитела, в отличие от поликлональных, являются продуктами потомков всего лишь одной В-клетки, и поэтому препараты моноклональных антител имеют особые свойства, вытекающие из небывалой степени биохимической гомогенности моноклональные антитела высокоспецифичны. Они направлены против одной и той же антигенной детерминанты моноклональные антитела стабильны как эталоны в отношении специфичности и аффинности (прочности связи с антигеном). Исследователь может целенаправленно подобрать моноклон, вырабатывающий антитела только нужного сорта , т. е. класса, подкласса, специфичности, аффинитета. [c.309]

Для скрининга могут использоваться моноклональные антитела или поликлональная антисыворотка. [c.174]

Для скрининга можно использовать моноклональные антитела или поликлональную сыворотку. [c.188]

Реагенты этой товарной позиции представлены либо на подложке, либо в форме препаратов и содержат более одной составляющей. Например, они могут содержать примеси из двух или более реагентов или единичных реагентов, растворенных в растворах, кроме воды. Они могут также быть представлены в форме бумаги, пластиков или других материалов (используемых в качестве подложки или основы), пропитанных или покрытых одним или более диагностических или лабораторных реагентов, таких как лакмусовая, pH или pole-finding бумага (бумага для определения полярности) или предварительно покрытые иммуно-контрольные пластинки. Реагенты этой товарной позиции могут также быть упакованы в виде наборов, состоящих из нескольких компонентов, даже если один или более компонентов являются отдельными химически определенными соединениями группы 28 или группы 29, синтетическим красящим веществом товарной позиции 3204 или любым другим веществом, которое будучи представленным отдельно классифицируется в другой товарной позиции. Примерами таких наборов являются такие, которые используются для контроля глюкозы в крови, кетонов в моче и т.п., или такие, которые основаны на ферментах. Однако диагностические наборы, имеющие основные свойства продуктов товарной позиции 3002 или 3006 (например, основанные на моноклональных или поликлональных антителах), исключаются из этой товарной позиции. [c.391]

Особенностью таких клеток является их способность размножаться и продуцировать антитела в искусственных условиях вне организма. С помощью специальных методой клонирования можно выделить одну гибридную клетку, которая, размножаясь, будет секретировать в неограниченных количествах антитела только одного вида — моноклональные антитела. Подчеркнем, что моноклональные антитела гомогенны как по специфичности, так и по физи-ко-химическим свойствам. Вопросы, связанные с получением поликлональных и моноклональных антител для иммунохимического анализа, подробно рассмотрены в гл. 5, 6. [c.12]

Метод может быть использован для вычисления констант связывания как поликлональных, так и моноклональных антител. [c.163]

Используя специфические связывающие свойства антител, исследователь может выбирать между двумя различными формами реагента, приготовленного на их основе это обычные поликлональные антисыворотки (или иммуноглобулиновые фракции, полученные из сыворотки) и моноклональные антитела (МКА). Препараты и тех, и других получают различными путями с различной целью выбор между ними осуществляется зачастую не произвольно, а в большой степени зависит от соответствия специфических свойств антител требованиям теста. [c.21]

Специфичность моноклональных антител. Основным свойством, на котором основано применение моноклональных антител в иммуноанализе, является высокая специфичность взаимодействия. Поликлональные антисыворотки часто имеют высокую перекрестную реактивность, что делает затруднительным и даже невозможным [c.170]

Использование моноклональных антител, направленных к двум различным антигенным детерминантам на антигене ( сэндвич -мо-дификация иммуноанализа), позволяет сократить время анализа. При употреблений поликлональных антисывороток иммуноанализ [c.171]

В этой ситуации очень большое значение имеют хорошие теоретические и методические руководства. Настоящая книга (которая выходит в двух томах) относится к категории именно таких руководств. Она написана коллективом сотрудников отдела иммунологии медицинского колледжа Университета г, Бирмингем при участии сотрудников отдела клеточной иммунологии Оксфордского университета (Англия), Особенно ценным представляется то обстоятельство, что в книге обобщен собственный экспериментальный опыт авторов, и поэтому она представляет собой последовательное изложение основных методов получения поликлональных и моноклональных антител, характеристики антигенов и качественной и количественной оценки реакций антиген — антитело. [c.5]

Альтернативные методы скрининга космидных библиотек, описанные в гл. 3, предполагают селекцию космидных клонов с использованием феномена гомологичной рекомбинации in vivo. Остальные главы книги посвящены вопросам, связанным с экспрессией клонированных генов. Для многих белков млекопитающих удалось осуществить высокопродуктивную внутриклеточную экспрессию в Е. oli. Однако гетерологические белки, локализующиеся в цитоплазме, часто образуют трудно растворимые агрегаты, что значительно осложняет получение нативного продукта. В гл. 4 описаны эффективные способы выделения активных растворимых продуктов из нерастворимых белков цитоплазмы Е. соИ. Вероятность деградации специфическими бактериальными протеиназами многих эукариотических белков, синтезируемых в Е. oli, может быть существенно снижена, если их экспрессировать в виде гибридных белков. Такие составные белки, в которых бактериальный компонент обычно представлен -галактозидазой, можно использовать в качестве иммуногенов для получения антисыворотки и моноклональных антител к клонированному эукариотическому белковому домену. Эти вопросы >ассматриваются в двух главах — одна посвящена получению поликлональной антисыворотки, а другая — методам гибридной технологии. В последующих главах книги описаны современные эукариотические экспрессирующие системы в гл. 7 — дрожжевая, далее в трех главах — системы на основе культивируемых клеток млекопитающих и трансгенные животные. В частности, описана система экспрессии с использованием векторов, которые несут гены, обеспечивающие возможность их индуцибельной амплификации это позволяет снимать токсическое действие антибиотиков, введенных в культуральную среду. Клонированные в таком векторе гены также [c.8]

Свойства поликлональных антисывороток и моноклональных антител [c.21]

Основной принцип ELISA — специфическое связывание первого антитела с мишенью. Если молекула-мишень представляет собой белок, то его очищенный препарат обычно используют для получения антител, при помощи которых затем и выявляют данную мишень. Антитела, которые образуются в сыворотке (антисыворотке) крови иммунизированного животного (обычно кролика), связываются с разными антигенными детерминантами (эпитопами) моле-кулы-мишени. Такую смесь антител называют поликлональным препаратом. Использование поликлональных антител имеет два недостатка, существенных для некоторых методов диагностики 1) содержание отдельных антител в поликлональном препарате может варьировать от одной партии к другой 2) поликлональные антитела нельзя применять, если необходимо различить две сходные мишени, т. е. когда патогенная (мишень) и непатогенная (не-мишень) формы различаются единственной детерминантой. Однако эти проблемы вполне разрешимы, поскольку сейчас научились получать препараты антител, выработанных к одной антигенной детерминанте, т. е. препараты моноклональных антител. [c.184]

В медицине моноклональные антитела применяют прежде всего для диагностики различных заболеваний. Такие бактериальные заболевания, как кокковые, паразитарные инфекции, малярия, а также грибки хламидии, при помощи мкАТ диагносцируются гораздо точнее, чем другими, традиционными методами. В вирусологии использование мкАТ дало возможность разработать условия антигенного анализа вирусов гораздо более информативного, чем при использовании поликлональных антител. Этот метод позволил получить уникальную информацию об антигенных детерминантах ДНК- и РНК-содержащих вирусов и их изменчивости. В частности, были идентифицированы антигенные детерминанты вирусов гриппа, полиомиелита, гепатита А и др. [c.495]

Поликлональные или моноклональные, либо их комбинация в качестве первых и вторых антител [c.28]

При ТОЛЬКО что описанной процедуре исходные антитела (анти-Х) продуцируются всей иммунной системой кролика. Следовательно, эти антитела поликлональны, ибо их вырабатывают лимфоциты, обладающие разной степенью специфичности по отношению к X. Моноклональные антитела, вырабатываемые-клетками-потомками одного лимфоцита, можно получить соответствующим скринингом, отобрав лимфоциты желательной специфичности. Получение моноклональных антител обещает сильно увеличить специфичность иммуноцитохимических методов идентификации нейроактивных веществ в нейронах. Кроме того, этот общий метод можно приспособить для еще более тонких измерений, таких как визуализация специфической РНК, в которой закодирован синтез определенного пептида или белка (см. гл. 4). [c.221]

Как и следует ожидать от системы, работающей по принципу клональной селекции, даже одиночная антигенная детерминанта будет, как правило, активировать много различных клонов с поверхностными рецепторами, обладающими разным сродством к данной детерминанте. Напрнмер, даже сравнительно простая структура ДНФ-группы обеспечивает возможность многих различных взаимодействий, н, когда эта группа связана с белком-носителем, она обычно стимулирует выработку сотен различных видов антител к ДНФ, каждый нз которых является продетом отдельного клона В-клеток. Такой ответ называют поликлональным. Когда реагируют лишь несколько клонов, ответ называют олигоклональным, а когда весь ответ сводится к реакции лишь одного клона В- нли Т-клеток, его называют моноклональным. Ответы на большинство антигенов поликлональны. [c.14]

Эффективность аффинной хроматофафии зависит преимущественно от выбора лиганда или акцептора, который определяет природу вьщеляемого мембранного белка. Существенным фактором в этом случае является сродство лиганда к рецептору, и поэтому самыми эффективными лигандами оказываются специфические блокаторы или антагонисты нейрорецепторных белков. Иногда для вьщеления конкретного белка используют две или три ступени аффинной хроматофафии на разных сорбентах и с разньаш лигандами. Получили широкое распространение методы иммуноаффинной хроматографии, в которых в качестве лиганда используется поликлональные или моноклональные антитела, полученные к компонентам рецептора. [c.268]

Клоны с иммобилизованными антителами к -галактозидазе можно приготовить, как это описано в разд. 5.4, или использовать коммерческие препараты. Возможность повторного использования колонки зависит от свойств антител (моноклональных или поликлональных) и жесткости элюирующих растворов. Колонки с поликлональными антителами (полученные, как здесь описано) могут быть использованы более 20 раз без значительного уменьшения их связывающей способности. Колонка, содержащая 5 мг аффинноочищенных поликлональных антител к -галактозидазе, обычно связывает по меньшей мере 1 мг гибридного белка. [c.157]

Наиболее простой способ снятия неспецифического фонового излучения состоит в использовании твердофазных вариантов метода. В качестве твердой фазы берут пблистирольные пробирки, микропланшеты, полиакриламидные шарики. Иммобилизация антител (моноклональных или поликлональных) на полистироле осуществляется методом нековалентной физической адсорбции, а в случае полиакриламидных частиц — ковалентным связыванием. Различие в способах иммобилизации обусловливает некоторые различия в свойствах иммобилизованных антител. Из. всех перечисленных носителей полиакриламидные шарики, как правило, обеспечивают. повышенную стабильность и иммунореактивность иммобилизованных антител, более быструю кинетику специфического взаимодействия, что улучшает точность анализа и его воспроизводимость. [c.142]

Получение моноклональных антител к полипептидному продукту генетически охарактеризованной открытой рамки считывания (ОРС) открывает широкие возможности для иммунохи-мического и функционального анализа такого продукта. Этот метод сложнее, чем описанный в предыдущей главе метод получения поликлональных антител к продукту ОРС, и должен рассматриваться скорее как дополнительный, а не альтернативный подход. Общая схема получения и использования моноклональных антител приведена на рис. 6.1. Мы настоятельно рекомендуем каждому исследователю получать и поликлональные, и моноклональные антитела. Основные преимущества моноклональных антител, а именно возможность получения их в неограниченном масштабе и высокая специфичность, очень существенны в том случае, когда возникает необходимость в углубленном исследовании продукта ОРС, а не просто в его выявлении. Наличие моноклональных антител облегчает количественный анализ продукта ОРС и часто дает возможность быстро получать его в биологически активной форме. Специфичность моноклональных антител также может быть использована для тонкого картирования их участков связывания (эпитопы) па молекуле полипептида — продукта ОРС эта информация дополняется данными о способности антител усиливать или подавлять биологическую активность продукта ОРС. [c.171]

Моноклональные антитела могут эффективно использоваться в иммунопреципитации и в иммуноцитохимических методах. На ранних этапах наших исследований при использовании и того, и другого метода мы сталкивались с трудностями из-за повышенного фонового сигнала, который отсутствовал при использовании поликлональных антител. Нам удалось преодолеть эти затруднения в табл. 6.7 и 6.9 приводятся соответствующие методики, которые, как мы обнаружили, во многих случаях хорошо работают. [c.196]

Иммунологические методы пгароко используются для идентификации мембранных компонентов, их локализации, оценки количества, выделения. Это методы получения поликлональных и моноклональных антител к компонентам мембран, иммуно-блоттинг (электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата на рия с перенесением разделенных белков на нитроцеллюлозные фильтры для последуюп] его выявления с по- [c.202]

В очень редких случаях может наблюдаться перекрестная реактивность моноклональных антител по отношению к неродственным антигенам. Это связано со сходным пространственным распределением зарядов, полярности и гидрофобности на отдельных участках таких молекул. Подобная ситуация реализуется, например, при взаимодействии эндорфинов и алкалоидов с одними и теми же клеточными рецепторами. Однако по отношению к моноклональным антителам перекрестная реактивность подобного рода наблюдается крайне редко. Размеры структур, распознаваемых моноклональными антителами, меньше, и распознаются они точнее, чем структуры, распознаваемые смесью поликлональных антител. Учитывая то, что антигенсвязывающий центр антител имеет полицентровую структуру, необходимо помнить, что направленность моноклональных антител к одному эпитопу и высокая специфичность не исключает возможности их перекрестной реактивности с эпитопами схожей химической структуры, хотя при этом обычно наблюдается различие констант связывания. [c.170]

Поликлональная антисыворотка может содержать до 10 ООО различных типов молекул IgG. Напротив, все молекулы моноклональных антител должны быть идентичными. Моноклональные антитела предпочтительнее в методах конкурентного иммуноанализа, поскольку в этом случае можно утверждать, что меченый или связанный с твердой фазой антиген и определяемое вещество конкурируют за один и тот же центр связывания. Моноклональные антитела очень хорошо работают в сандвич -анализе, поскольку, как правило, хорошо известна специфичность их эпитопов. Такие антитела легко получать в больших количествах и с высокой степенью чистоты. Большинство нативных антител бивалентны, и все они моноспецифичны. Недавно с помощью гибридных гибридсяк и методов генной инженерии получены новые типы антител. Антитела MOiyT быть мечены или связанными с твердой фазой с помощью пассивной адсорбции или за счет ковалентных связей. [c.10]

Поликлональные антитела, применявшиеся ранее в тестах на беременность, неизменно давали перекрестные реакции с LH, имеющимся в моче любой женщины, поэтому с помо1Цью этих тестов можно было надежно определять только высокие концентрации h G. Кроме того, аффинность специфичность поликлональных аятисывороток и содержание специфических антител в них изменялись от партии к партии в широких пределах. Развитие гибридомной технологии получения моноклональных антител [6 ] позволило решить проблемы, связанные со специфичностью и непостоянством свойств антисывороток. На базе моноклональных антител появилась возможность создания высокочувствительных тестов с использованием не только кон урентных, но и прямых сандвич -методов. [c.94]

Я надеюсь, что предлагаемое читателю двухтомное руководство будет полезно как желающим овладеть технологией получения поликлональных или моноклональных антител, так и более широкому кругу ученых, студентов и лаборантов, нуждающихся в методическом руководстве по использованию антител. Как это принято в серии Методы , главы, расска- [c.6]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология