Метод Нго распределение антигена

Меченые антитела могут использоваться для изучения распределения антигенов в срезах тканей с помощью как светового, так и электронного микроскопа. При работе по общепринятому сэндвич-методу на срез наносят немеченые специфические антитела, отмывают их избыток, а затем добавляют антитело против иммуноглобулина (обычно несущее флуоресцентную [c.330]

Дан исторический обзор методов, применявшихся до сих пор для изучения распределения антигенов в теле первым, поставившим эту задачу, был И. И. Мечников. [c.47]

Один метод локализации со специфической физиологической активностью был позаимствован нз ПЭМ. Этот метод меток поверхности клетки, который, будучи применен к образцам для РЭМ, приводит к образованию на поверхности клетки морфологически различаемых или аналитически идентифицируемых структур. Такие методики в сочетании с растровой электронной микроскопией высокого разрешения позволяют изучать природу, распределение и динамические свойства антигенных и рецепторных состояний на поверхности клеткн. Методы нанесения меток на поверхность клетки в общем случае достаточно сложны и включают процедуры иммунохимической и биохимической очистки. Подробные ссылки на них можно найти в работах [359—361], но сущность методик состоит в следующем. Для крепления антител в определенных антигенных состояниях на поверхности клетки используются стандартные иммунологические процедуры. Хитрость состоит в том, чтобы модифицировать антитела таким образом, чтобы они также несли морфологически различимую метку, такую, как латексные шарики или сферы из двуокиси кремния, распознаваемый вирус, как, например, вирус табачной мозаики, или один из Т-четных фагов, как показано на рис. 11.18, илн белковая молекула известных размеров, как ферритин или гемоцианин. В работе [362] (рис. 11.19) использовались гранулы золота, которые имеют большой коэффициент вторичной электронной эмиссии. Одна часть антитела имеет средство для специфичного антигенного закрепления на поверхности клетки, в то время как другая часть несет морфологически различимые структуры. В настоящее время иммунологические методы достигли такого уровня, когда они не могут быть использованы для изучения как качественных, так и количественных характеристик поверхности клетки [363, 364]. [c.244]

ЮТ 5 МИН в этаноле, регидратируют ЗФР, меняя его два или три раза, и заключают в глицерин, забуференный фосфатами. Фиксация препаратов предотвращает какие бы то ни было изменения в распределении меченых молекул на клеточной мембране. Такие изменения могли бы произойти во время микроскопического исследования, если бы клетки оставались нефиксированными при комнатной температуре. Наш собственный опыт показал, что этот метод весьма удобен для подсчета редко встречающихся клеток, например клеток, связывающих антиген. В этом случае важно не посчитать одну и ту же клетку дважды и такой оплошности легко избежать, если мазок приготовлен штрихами. [c.176]

Иммунофлуоресцентные методы широко используются для обнаружения аутоантител и антител к тканевым и клеточным антигенам (рис. 29.8). Хотя эти методы технически более сложны, чем описанные выше, они имеют явное преимущество в тех случаях, когда требуется определить число видов антител. Используя срезы тканей (содержащих большое число антигенов), на одном предметном стекле можно выявить антитела к нескольким разным антигенам, установив при этом их внутритканевое (клеточное) или внутриклеточное распределение. [c.530]

Для разделения клеток и клеточных частиц используется модифицированный метод противоточного распределения, основанный на распределении частиц между жидкой фазой и поверхностью раздела двух фаз. В этом случае клетки и клеточные частицы распределяются не между двумя жидкими фазами, как это имеет место при обычном противоточном распределении, а между одной фазой и границей раздела двух фаз. Эти фазы обычно представляют собой смесь растворимых в воде полимеров, таких, как декстроза или полиэти-ленгликоль. Метод применяется для разделения различных штаммов бактерий, водорослей и вирусов, для отделения интактных клеточных органелл от разрушенных и для вьщеления различных частиц из комплексов антиген—антитело. [c.80]

Этот метод можно приспособить также для определения характера распределения антигенов в ходе биохимического фракционирования. Такой вариант ELISA получил название анализ распределения антигенов . И наконец, система a-ELISA может быть использована в непрямом конкурентном иммунологическом анализе для количественного определения малых количеств антигена. [c.210]

Распределение белка и полисахарида или липополисахарида между фенолом и водой было применено для расщепления и разделения специфических осадков полисахаридных антигенов с антителами [40]. В принципе осадок диспергируют в воде и прибавляют при перемешивании равный объем жидкого фенола. После разделения фаз центрифугированием водный слой содержит свободный от антител полисахаридный антиген, который можно выделить и проанализировать. Метод позволяет очищать полисахаридные анти1 ены путем избирательного осаждения антителами [32, 40], т. е. фракционировать полисахаридные антигены по их серологической специфичности. Хоман и Лене 41] очистили препараты гепарина, содержащие белки, использовав смесь фенола с водой. Из водной фазы, которая оказалась свободной от белка, был выделен очищенный гепарин. [c.330]

Носителями в данном случае чаще всего служат ацетат целлюлозы [26] и гели агарозы [4]. Разрешающая способность таких систем очень низка из-за чрезмерного диффузионного размывания зон. Применение в качестве носителя крахмального или полиакриламидного геля значительно повышает разрешающую способность прежде всего благодаря молекулярно-ситовому эффекту. Иммуноэлектрофорез [56] является одной из разновидностей зонного электрофореза при постоянном значении pH после разделения белки диффундируют навстречу специфическим антителам и их взаимодействие приводит к образованию дуг иммунопреципитации. Полуколичественную оценку каждого антигенного компонента можно выполнить методом электроиммунодиффузии [57]. После разделения методом зонного электрофореза антигенные белки электрофоретически мигрируют в направлении, перпендикулярном прежнему пути, в гель, содержащий равномерно распределенные антитела. Высота образующихся пиков преципитации является мерой относительной концентрации белков в смеси. [c.120]

Ген, ответственный за цветовую слепоту (дальтонизм), был локализован в Х-хромосоме в 1911 году. Особенности наследования генов, сцепленных с Х-хромосомой, позволили отнести к этой группе сцепления более чем 100 локусов. Хромосомная локализация аутосомных генов была впервые проведена в 1968 году. Определено расположение локуса, кодирующего антигены групп крови Даффи, которые, подобно антигенам группы ABO и другим антигенам крови, находятся на поверхности эритроцитов. Сравнение наследования изучаемого гена с распределением аберрантной хромосомы 1 показало, что он локализован в этой хромосоме. С тех пор на основании анализа родословных определены группы сцепления для 70 генов человека. Картирование многих из этих генов стало возможным после того, как было показано их сцепление с другими генами, локализацию которых удалось установить методами генетики соматических клеток. Примером этого служит картирование гена резус-фактора, впервые открытого в 1939 году. В 1971 г. изучение родословных показало, что ген Rh сегрегирует сцепленно с геном РЕРС, кодирующим пептидазу С. Годом позже при изучении соматических клеток ген РЕРС был локализован в хромосоме 1. Таким образом, стала известной группа сцепления и для гена Rh, кодирующего резус-фактор. В настоящее время картировано около 500 аутосомных генов, причем 100 из них картировано за последние 12 месяцев. Подавляющее большинство этих генов локализовано методами генетики соматических клеток. [c.294]

Для общей характеристики такой популяции антител по аффинности взаимодействия с антигеном используют некоторое среднее знйчение аффинности Ко для л-го числа субпопуляций (методы расчета Ко приведены ниже). Как правило, истинная форма распределения антител по значениям констаит взаимодействия неиз- [c.38]

Полученные результаты представлены на рис. 4.18 видно распределение ферритина (чфные точки) на наружной поверхности мембраны. От двух до восьми точек образуют кластеры, заключенные на рисунке в кружки. Каждый кластер соответствует одному антигену Rhp(D), а каждая точка — одному козьему антителу, прореагировавшему с человеческим IgG, который связан с этим антигеном. Рис. 4.18 показывает, что поверхностный антиген RHq D) распределен по наружной поверхности мембраны случайным образом. Это согласуется с данными, полученными методом замораживания—травления как видно из рис. 4.17, белковые частицы распределены по внутренней поверхности скола мембраны A holeplasma laidlawii нерегулярно. [c.228]

На рис. 2.2, А показано распределение пиков антигенов взрослой особи S histosoma mansoni, полученное методом двумерного ИЭФ с помощью полиспецифической антисыворотки, при этом может быть проконтролирована чистота отдельных антигенных компонентов. Рис. 2.3 иллюстрирует, каким образом чистота иммуногена может быть проверена с помощью метода Ухтерлони и ракетного ИЭФ. [c.56]

IV. Распределение препаратов на пластине. Для количественного определения антигенов и антител в лунки той же пластины необходимо. внести контрольные антитела известной специфичности и стандартные антигены. Таким образам, при оценке чистоты фракции сывороточных белков методом ИЭФ реагирующие друг с другом контрольные сыворотку и антисыворотку следует расположить в верхней части пластины, а исследуемые антигены чередовать со стандартными. Примеси легко определить по расположению дуг преципитации, а для -подтверждения инородности каких-либо молекул используют соответствующие специфические сыворотки. Аналогично и при исследовании антисывороток для контроля используют сыворотки с известной специфичностью. [c.221]

Когда лимфоциты от генетически различных особей растут вместе в смешанной культуре лимфоцитов (СКЛ), то обычно наблюдается пролиферация. Отвечающие клетки — это подкласс Т-лимфоцитов. Их активируют антигенные детерминанты стимулирующих клеток. Эти детерминанты находятся под контролем генов главного комплекса гистосовместимости. Как правило, ставят СКЛ, дающие однонаправленные ответы (при этом отвечающие клетки активируются специальным набором стимулирующих клеток). При заданной комбинации отвечающих и стимулирующих клеток на выраженность ответа влияют несколько факторов. Наиболее важный из них — различная стимулирующая и отвечающая способность клеток. Эта способность значительно варьирует от опыта к опыту. В связи с этим метод оценки должен быть достаточно грубым для того, чтобы привести результаты всех опытов в соответствие с законом нормального распределения (см. Thorsby, Piazza, 1975, и указанную там литературу). Приведенные ниже примеры иллюстрируют такой метод. [c.461]

При обследовании больных с подтвержденной системной волчанкой было установлено, что наблюдаемые изменения значений в тестах GORDIA N и ORDIA NP коррелируют с результатами метода Фарра в ходе ремиссии или обострения заболевания (Karsh et al., 1982). Примеры приведены в табл. 13-5 с дополнительными данными относительно распределения специфических антител по классам иммуноглобулинов. Во время обострения заболевания у больных 1 и 2 наблюдалось резкое возрастание содержания антител к нуклеопротеиновым антигенам обоих типов преимущественно за счет наработки IgG. Для больного 3 обострение болезни было связано с резким ростом содержания IgM, специфичных как к ДНК, так и к ДНП,. в то время как содержание IgG, специфичных к ДНК, оставалось практически на неизменно высоком уровне. В ходе частичной ремиссии у больного 4 снижение общего содержания антител против ДНК и ДНП происходило главным образом за счет класса IgM. [c.208]

И ТОЙ же плате. Характерно, что собственно в методе ELISA, используемом для определения антиген-специфических антител в условиях, когда антиген добавляется в избытке и непосредственно не тестируется, различия между платами и лунками, обнаруживаемые при проведении анализа распределения антигена, не выявляются. Причина этого заключается в том, что методе ELISA вариации во взаимодействии белков с пластиком, иначе говоря количества адсорбированных антиглобулинов, представляют собой лишь второстепенный фактор. [c.241]

Для определения специфических антител нами предложен вариант метода ELISA, в котором каждый образец сыворотки тестируется с помощью представительного набора антигенов в течение относительно непродолжительных периодов инкубации (15 мин). При этом надежность лабораторной диагностики обеспечивается благодаря тому, что существует возможность интерпретировать наблюдаемый профиль распределения интенсивности специфических и перекрестных взаимодействий. Выводы, сделанные на основании таких результатов, представляются более достоверными, чем в случае использования. единичных антигенных препаратов. Предложенная методика позволяет двум лаборантам за день проанализировать до 700 образцов-сыворотки. [c.383]

Для уточнения вопроса о месте раскалывания мембран экстраклеточные и цитоплазматические поверхности плазмалеммы эритроцитов метились фибриллярным антигеном или ферритином. Исследование гидрофильных поверхностей таких меченых мембран, обнажающихся после возгонки льда, а также рельефов комплементарных поверхностей (обнажающихся при их раскалывании) позволило сделать вывод, что раскалывание плазмалеммы эритроцитов на внешнюю и цитоплазматическую половины осуществляется по их центральной гидрофобной области. Таким образом, этот метод позволяет изучить рельеф внутренней поверхности мембран, что недостижимо при использовании других методов. Этот метод показал, что как на поверхности, так и в толще клеточных мембран располагаются многочисленные глобулы (до 3000 на 1 мкм ), их распределение зависит от физиологической активности клетки и условий внешней среды. (Они почти полностью отсутствуют в метаболически инертных мембранах, таких как миелин.) Диаметр этих частиц около 10 нм. По всей вероятности, они имеют белковую природу. [c.96]

Антигены поверхности клетки. Иммунофлюоресцентный анализ клеточной поверхности — расширяющаяся область применения ПЦМ. Обычно используется метод непрямой иммунофлюоресценции как более чувствительный, исследования проводят на цитометрах, имеющих лазерное возбуждение. Окрашивают, как правило, живые клетки, которые затем могут быть фиксированы этанолом или пара- 1ормальдегидом. Анализ получающихся гистограмм распределения клеток по интенсивности флюоресценции требует тщательности и опыта работы, так как субпопуляции положительных и отрицательных по исследуемому антигену клеток имеют широкие, чаще всего заметно перекрывающиеся гистограммы, форма которых в общем случае заранее не известна. Должен быть определен также уровень неспецифического окрашивания с помощью антисыворотки на отсутствующие в исследовании антигены [15, 16]. [c.141]

Белок антител, специфически связанных с антигеном внутри клетки, не отличается но проницаемости для электронов от белков самой клетки, и потому с помощью электронного микроскопа его выявить нельзя. Одиако разработаны методы конъюгации антител с ферритином — низкомолекулярным белком, содержащим большое количество железа. Такие-копъюгированные с ферритином антитела можно использовать в качестве красителя при электронной микроскопии. Шалла и Амици [1547] применяли этот метод при изучении распределения белка ВТМ в клетках листьев томатов. Ои дает гораздо более высокое разрешение но сравнению с методом флуоресцирующих аптител и позволяет обнаруживать единичные вирусные-частицы (фото 83). [c.380]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология