Трипсин ацилирование

Образующийся промежуточный продукт называется ацилированным ферментом. Если бы реакция остановилась на этом, трипсин или химотрипсин представляли собой не катализатор, а реагент. Суть катализа заключается в том, что катализатор обеспечивает более легкий (и, следовательно, более быстрый) путь реакции, но в конце реакции возвращается в исходное состояние. Фермент восстанавливается на второй стадии процесса с участием молекулы воды [c.319]

Что представляет собой ацилированный фермент при разрыве белковой цепи трипсином [c.343]

Полная обработка данной схемы приводит к довольно сложным выражениям для кинетических параметров кат и /Ст(каж) ферментативной реакции. Однако на практике рН-зависимость ферментативных реакций, протекающих по трехстадийному механизму, имеет более простой вид. Как правило, ряд протонированных или депротонированных состояний фермента или не обладают способностью связывать субстрат, или не вступают в реакции ацилирования или деацилирования, что приводит к упрощениям соответствующих схем рН-зависимости. Например, в реакциях гидролиза специфических субстратов, катализируемых а-химотрипсином и трипсином, схема (10.11) упрощается [c.222]

Другой весьма специфичный тип белок-белкового взаимодействия представлен ингибированием трипсина маленьким белковым ингибитором из поджелудочной железы быка. Последний белок состоит из 58 аминокислотных остатков, образующих весьма компактную структуру, содержащую три дисульфидных связи. Вследствие такой компактности белок не очень чувствителен к протеолитической атаке. Боковой радикал Lys-15, однако, полностью экспонирован и представляет собой участок взаимодействия с трипсином, а также его ингибирования. Обычный каталитический механизм действия сериновых протеиназ , представителем которых является трипсин, предполагает образование нековалентного комплекса, за которым следует ацилирование Ser-195 фермента карбонильной группой лизина или аргинина и высвобождение первого продукта реакции. Завершает процесс деацилирование ацилфермента. [c.563]

Таким образом, на стадии ацилирования специфичность трипсина определяе"- -ся как гидрофобными взаимодействиями боковой цепи субстрата с ферментом, так и наличием заряда, причем последнее увеличивает скорость ацилирования в [c.179]

Модификация лизина или аргинина может ограничить действие трипсина. Ацилирование е-амнногрупп остатков лизина при нейтральных pH действием малеинового или цитраконового ангидрида делает модифицированный остаток лизина устойчивым к трипсину, сводя протеолиз к расщеплению по остаткам яргииина. [c.180]

Гидролиз метилового эфира N-бeнзoил-L-aлaнинa, катализируемый трипсином, протекает по трехстадийному механизму, причем для этой реакции скорость-лимитирующей стадией является ацилирование. На основании данных рН-зависимости реакции гидролиза (табл. 19) вычислить значения рК ионогенных групп свободного фермента и кинетически существенны промежуточных соединений фермента и предложить схему рН-завиоимости ре-акций [c.235]

Трипсин стабилизируется также ацнлированием [246]. Поскольку молекула трипсина содержит 13 лизиновых остатков и только 2 аргининовых остатка [128], которые образуют потенциально способные гидролизоваться при аутолизе связи, лри ацилировании -аминогрупп лизиновых остатков связи, в которых участвуют эти остатки, становятся устойчивыми к гидролизу. Таким образом, ацилирование уменьшает количество чувствительных к гидролизу связей и тем самым повышает гидролитическую устойчивость фермента. [c.180]

А между атомом углерода карбонильной группы-15 псевдосубстрата и остатком5ег-195фермента. Обычным субстратам химотрипсина и трипсина, в которых осуществляется несколько выгодных контактов, для достижения стадии ацилирования необходима энергия активации от 5 до 4- 15 ккал/моль. Однако при образовании комплекса трипсин — ингибитор оптимизируются многочисленные другие взаимодействия, и величина ЛС оказывается равной —18 ккал/моль, несмотря на напряженность С—О -аддукта (табл. 5.6). Таким образом, различие энергий стабилизации можно объяснить различием контактирующих областей в комплексах, которые трипсин образует с ингибитором и с обычными субстратами [7491. [c.281]

Так, у эстераз и эстеролитически активных протеиназ определено наличие в активном центре функционального остатка Сер, который подвергается ацилированию на промежуточной стадии процесса. Активный серил фигурирует в псевдохолинэсте-разе, фосфоглюкомутазе, в химотрипсине и трипсине и в ряде других ферментов. На рис. 6.7 изображена схема связывания субстрата ацетилхо-лина ацетилхолинэстеразой (АХЭ) и схема ингибирования ее активности при высокой концентрации субстрата [32]. В эсте-разный участок АХЭ входят нуклеофильная группа V и смежная с ней диссоциирующая кислотная Рис. 6.9. Схема действия креатинкиназы. группа НХ. Ацильный ос- Переходное состояние, [c.375]

Введение заместителей в боковые цели лизина или аргинина препятствует гидролизу трипсином по остаткам модифицированных аминокислот и позволяет расщеплять белки избирательно только по остаткам аргинина или лизина соответственно. Особенно часто используется модификация остатков лизина с последующим гидролизом белка по остаткам аргинина. В качестве модифицирующих агентов применяются ангидриды дикарбоновых кислот. В результате реакции ацилирования происходит замена положительного заряда остатка лизина на отрицательный заряд полу амида дикарбоио-вой кислоты [c.43]

Симпсон с сотр. [12] с успехом применял АцИ при исследовании карбоксипептидазы А. При действии АцИ ацилировалось примерно 4 из 19 остатков тирозина, 2 из них деацилировались с более высокой скоростью. В присутствии р-фенилпропианата подавлялось ацилирование двух остатков из четырех. Уксусным ангидридом ацилируются 6—7 остатков тирозина, а иод модифицирует 6 остатков. Таким образом, АцИ является наименее реакционноспособным реагентом. В трипсине АцИ ацилирует6,7 из 10 остатков тирозина. Эта величина близка 6,0 — числу остатков, взаимодействующих с ЦФ [30] и способных ионизоваться с высокой скоростью [6]. Оксигруппа остатков серина и сульфгидрильная группа цистеина лишь частично модифицируется этим реагентом. [c.353]

Тщательное исследование рН-функций оказалось весьма ценным при изучении механизма действия гидролаз. Возможность изолировать индивидуальные кинетические стадии с помощью методов остановленного потока, стационарной кинетики и релаксационной техники позволила получить вполне четкие результаты. Наиболее определенные данные при использовании некоторых субстратов были получены для трипсина и химотрипсина [2,3]. Именно с помощью такого подхода впервые было уста-йовлено участие остатков гистидина в механизме действия химотрипсина на стадиях ацилирования и деацилирования. Некоторые данные стационарной кинетики привели к полезным выводам о механизме действия негидролитических ферментов. Можно думать, что этот метод анализа механизмов ферментативных реакций будет быстро развиваться. Группа Альберти [4] провела очень тщательное измерение величин р/С и энтальпии ионизации связывающих группировок фумаразы. Данные о [c.217]

Мы постулируем трехстадийный механизм для реакций, катализируемых фицином, подобный механизму, предполагаемому для действия трипсина и химотрипсина. Первая стадия является стадией быстрой адсорбции, вторая стадия—ацилированием —SH-группы (вместо ОН-группы, имеющейся у других (Ьермен-тов) и третья стадия — гидролизом соединения ацил-фермент (тиоловый эфир). [c.333]

В случае примеров образования гидроксамовой кислоты, приведенных выше, эффективность обменной реакции зависит от относительной нуклеофильной силы НгО и NH20H и от концентрации последнего соединения. Гидроксиламин является более сильным нуклеофильным замещающим реагентом, но он присутствует в сравнительно низкой концентрации, поэтому его образованию способствует более устойчивая связь между ацил-фермен-том и субстратом. Мы. показали, что стабильность ацилирован-ного фермента характеризуется величиной и что при сравнении реакций трипсина и фицина на папанне скорость гидролиза соединений ацил-фермент в случае первого фермента, в десять раз больше, чем скорость гидролиза в случае последнего. [c.334]

Имидазольная группировка входит в активные центры таких ферментов, как холинэстераза, рибонуклеаза, трипсин, хи-мотрипсин и др. Особенной способностью к присоединениям обладает атом N3 имидазольной группировки, что приводит к ее ацилированию и фосфорилированию с образованием неустойчивых Ы-ацил- и Ы-фосфорилпроизводных в качестве промежуточных веществ при ферментативных превращениях. Однако несомненно, что строение активного центра в целом непосредственно связано с вторичной и третичной структурой бел- [c.217]

До сих пор эфирная связь установлена только в фосфопротеидах [18]. Однако известно, что 0-ацетилированные белки отщепляют уксусную кислоту под действием панкреаса [19]. На модельных опытах показано, что эфиры ацилированных аминокислот расщепляются трипсином [20]. Известна лабильность эфиров N-ацилированных оксиаминокислот [21 ]. Ацил легко переходит с атома азота на атом кислорода. Реакция эта обратима. Л. Т. Соловьев [22], а затем Денюэль и Казаль [23] нашли, что при кислотном гидролизе скорость отщепления оксиаминокислот больше, чем остальных аминокислот, и авторы также объясняют этот факт образованием эфирной связи [c.332]

Изучение белков начинают с выделения и очистки единственного лишенного основной группы пептида, который получают в результате ферментативного расщепления ацилированного белка непсином, химотрипсином или термолизином (но не трипсином) — см. фиг. 9. Из всех пептидов только этот концевой пептид не садится на колонку дауэкс-50 при кислых значениях pH (см. ниже). Его состав, включая и природу концевой ацильной группы, определяют, сочетая аминокислотный анализ, гидразинолиз и фтординитробензольный метод. [c.69]

Исследования, проведенные в широком диапазоне pH показали, что смена лимитирующей скорость стадии - довольно частое явление. Так, при гидролизе тг-нитрофениловых эфиров ациламинокислот трипсином [2 131 и панкреатическим калликреином Г23401 в кислых pH лимитирует общую скорость стадия деацилирования, а при рН>4.4-4,8 стадия ацилирования. В случае лейкоцитарной эластазы [23171 и папаина [23411 наоборот - в кислых pH медленной стадией является ацилирование, а при увеличении основности среды такой стадией становится деацилирование фермента. [c.220]

При высоком pH активный центр химотрипсина несет отрицательный заряд, а при низком — нулевой. Можно ожидать, что оснбвная форма активного центра при высоком pH будет стабилизироваться положительным поверхностным зарядом и дестабилизироваться — отрицательным. Как видно из табл. 5.2, это предположение подтверждается экспериментально. Превращение 14 положительно заряженных остатков лизина в отрицательно заряженные карбоксилат-ионы при взаимодействии химотрипсина с янтарным ангидридом приводит к тому, что р/Са группы, степень ионизации которой определяет рН-зависимость са1 для гидролиза метилового эфира ацетилтриптофана, увеличивается от 7,0 до 8,0. И наоборот, превращение 13 отрицательно заряженных карбоксильных групп в положительно заряженные амины понижает р/Са до 6,1. Аналогичным образом ацилирование поверхностных аминогрупп трипсина уксусным ангидридом приводит к увеличению рКл свободного фермента на 0,2 единицы. [c.176]

Смотреть страницы где упоминается термин Трипсин ацилирование: [c.253] [c.198] [c.336] [c.270] [c.42] [c.250] [c.244] [c.250] [c.257] [c.265] [c.268] [c.175] [c.129] [c.107] [c.201] [c.159] [c.20] [c.86] [c.201] [c.82] [c.426] [c.186] [c.187] [c.176]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология