Изменение флуоресценции вещества при его переходе в раствор

Изменение флуоресценции вещества ири его переходе в раствор [c.45]

Как уже было сказано, основной вклад в явление флуоресценции белков вносит триптофан, который, как и другие хромофоры, имеет строго определенную Vax- Последняя смещается при изменении полярности раствора. Если замечено, что Vax смещена (относительно Vax свободной аминокислоты в воде) в сторону более коротких длин волн без изменения полярности окружающего белок раствора, это свидетельствует, что триптофан (а также соседние остатки аминокислот) находится в неполярном окружении или переходит в него в результате конформационных изменений молекулы белка. Вывод о конформационных перестройках молекулы белка делается и тогда, когда квантовый выход флуоресценции падает под влиянием вещества, [c.119]

Кислотно-основные индикаторы. Эта группа наиболее многочисленна в руководстве [1] описано 40 реагентов с изменением цвета флуоресценции в пределах pH = О 13, в монографии 17] — более 60 для области pH = О ч- 14 (приводимые разными авторами области перехода одного и того же вещества не всегда совпадают, и различия иногда достигают 1—2 единиц pH). Области перехода некоторых индикаторов, выпускаемых Союзреактивом 116], представлены в табл. 21. При выборе индикатора кроме pH его перехода следует учитывать возможность гасящего действия компонентов растворов и их окраску во избежаний реабсорбции излучения индикатора она не должна быть дополнительной к цвету флуоресценций. [c.283]

Предполагая, что излучение квантов возбужденной молекулой и ее безызлучательные переходы—два конкурирующих процесса, С. И. Вавилов получил следующую формулу, характеризующую изменение выхода флуоресценции растворов при тушении посторонними веществами [c.29]

БолыЬинство акридинов и акридонов флуоресцирует. При ионизации некоторых веществ наблюдается заметное изменение флуоресценции, и такие вещества можно успешно применить в качестве индикаторов в ацидиметрии, если титрование ведется в мутном растворе и применение обычных индикаторов затруднено. Для этой же цели используются иногда бензофлавин, акридин и акридиновый оранжевый [299] переход окраски этих соединений соответственно происходит примерно при pH 1, pH б и pH 9. [c.423]

A HgO A Og - СЫН А НО AH Og hl - А НО). Так как таутомеризация является мономолекулярный процессом, то в этом случае можно применить уравнение (28.49). Таким образом, по изменению (р можно судить о колебаниях в составе или структуре светочувствительного комплекса, которые влияют на константы скорости, kf и k . Константа скорости процесса флуоресценции, остается практически неизменной, пока нет значительных изменений интенсивности полосы поглощения, так как и флуоресценция, и поглощение определяются вероятностью перехода между основным и возбужденным состоянием. Можно, конечно, принять во внимание возможность тушения флуоресценции путем соударения с посторонними молекулами (введя бимолекулярные члены в знаменатель уравнения (28.49)), так как последнее часто наблюдается у флуоресцирующих газов и растворов. Однако кажется более правдоподобным, что изменения флуоресценции, связанные с фотосинтезом, обусловливаются изменениями внутри хлорофиллового комплекса, а не образованием или исчезновением новых кинетически независимых тушащих веществ. В т. I отмечалось, что естественное время жизни возбужденного состояния молекулы хлорофилла есть величина порядка 8 10 сек. низкий выход флуоресценции in vivo (порядка 0,1%) указывает, что действительное время жизни в этом случае в 100 раз короче, т. е. равно приблизительно 8 10" о. Чтобы при этих условиях могло произойти заметное тушение флуоресценции путем кинетических соударений с посторонними молекулами, последние должны присутствовать в концентрациях, достаточно высоких для того, чтобы интервалы между столкновениями не были длиннее 10"i° сек. Это требует концентраций порядка, по крайней мере, 0,01 и, возможно, даже 0,1 моль л. Кажется невероятным, чтобы такие высокие концентрации свободно движущихся молекул продуктов реакции -могли действительно возникать и исчезать во время фотосинтеза. [c.501]

В результате поисков новых флуоресцентных индикаторов был тсинтезирован кальцеин (XXV) [56 (72)]. Этот реактив, являющийся продуктом конденсации флуоресцеина, формальдегида и иминодиуксусной кислоты, применяют преимущественно для титрования ионов кальция в сильнощелочном растворе. Точку эквивалентности вначале устанавливали по изменению окраски раствора от зелено-желтой к коричневой [56 (72)]. Одновременно с изменением окраски происходит изменение флуоресценции [56 (72), 57 (103)], причем, как оказалось, в случае чистого вещества (называемого также флуорексоном [58 (47)]) изменение флуоресценции бывает гораздо более резким, чем переход окраски [58 (54)]. В нейтральном растворе, в котором (Отсутствуют металлы, флуорексон флуоресцирует почти так же, как и обычный незамещенный флуоресцеин, однако, в противоположность. послед-, нему, флуоресценция флуорексона исчезает при добавлении в раствор едкого кали, если концентрация последнего превышает 0,025 М. [c.72]

В результате ионизации сложных органических молекул положение электронных уровней их основного и возбужденного состояний изменяется, поэтому энергия возбуждения молекул и их ионов становится разной. В соответствии с этим если при изменении pH среды меняется степень ионизации вещества, то цзменяются и спектры поглощения и флуоресценции их растворов. Например, при переходе от pH 7 к pH 4 граница поглощения раствора слабого основания акридина смещается к красному концу спектра на 35 ммк изменение такого же порядка наблюдается при этом и в положении максимума флуоресценции. Поэтому раствор недиссоциированного акридина флуоресцирует фиолетовым светом (максимум около 425 ммк), а его ионы — сине-зеленым (максимум около 475 ммк). В растворах хинина недиссоциированное основание совсем не флуоресцирует, у его одноосновного катиона свечение фиолетовое, у двухосновного— голубое. Подобные же изменения имеют место и при ионизации слабых кислот яркое зеленое свечение аниона флуоресцеина наблюдается лишь в щелочной среде [14]. Изменение цвета флуоресценции при ионизации находит практическое применение при использовании флуоресцентных индикаторов некоторые из них, входящие в набор ИРЕА, приведены в табл. П-1. В отличие от цветных индикаторов флуоресцентные позволяют титровать многие окрашенные и мутные растворы, в которых изменения окраски цветных индикаторов трудно различимы [14]. В связи с влиянием диссоциации на интенсивность флуоресценции флуориметрирование веществ, обладающих кислотно-основными свойствами, необходимо выполнять при заданном постоянном значении pH среды. [c.43]

Концентрационное тушение. По достижении порг говой концентрации ее дальнейшее увеличение соироволедается постепенным уменьшением выхода флуоресценции, приводящим к ослаблению свечения. Основная причина этого явления — уменьшение среднего расстояния между молекулами, благодаря которому повышается число межмолекулярных взаимодействий. При этом возрастает передача энергии от возбужденных молекул вещества к невозбужденным часть этих переходов не сопровождается излучением и ведет к снижению выхода и тушению флуоресценции раствора. В некоторых (в особенности водных) растворах к этому явлению добавляется возможность изменения степени диссоциации определяемого вещества и образования слабо или совсем не флуоресцирующих ассоциированных молекул (димеров). Вследствие этого уменьшается число флуоресцирующих мономеров, а их взаимодействия с ассоциированными димерами также увеличивают безизлучательный обмен энергии возбуждения. Разбавление растворов до концентрации ниже пороговой восстанавливает первоначальную флуоресценцию. Возрастание концентрации может сопровождаться и образованием золей и осадков, при экстракционных процессах— пленок на поверхности раздела фаз, изменяющих яркость флуоресценции раствора такие изменения обычно необратимы. [c.46]

При химическом взаимодействии примеси с молекулой органического вещества имеет место воздействие примеси на невозбужденную молекулу. Это взаимодействие может привести к тушению люминесценции и относится к гашению первого рода. Однако взаимодействие примеси с реагентом, способным люминес-цировать, может привести и к иным эффектам кроме тушения к изменению цвета флуоресценции, к сдвигу спектра поглощения и изменению интенсивности флуоресценции (к ее уменьшению или даже увеличению) из-за изменения количества поглощенного света. В последнем случае изменение интенсивности флуоресценции раствора может и не сопровождаться изменением выхода флуоресценции. Наконец, в присутствии примесей, в результате химического их взаимодействия с нефлуоресцирующей органической молекулой может возникнуть флуоресценция. На этом явлении возникновения флуоресценции у нефлуоресцирующих веществ в результате их химических взаимодействий с катионами основано большинство аналитических реакций. Например, возникновение флуоресценции у ряда диоксиазо- и диоксиазометиновых соединений в результате образования внутрикомплексных соединений с катионами использовано для люминесцентного определения алюминия, галлия, магния, цинка и других элементов, возникновение флуоресценции флуоресцина, который при окислении переходит во флуоресцеин, использовано М. А. Константиновой-Шлезингер " для люминесцентного определения кислорода. Флуоресценцию многих других органических веществ кислород сильно гасит " . [c.32]