Инсулин, активность биологическая определение

Б. X, сформировалась как самостоятельная область во 2-й пол. 20 а на стыке биохимии и орг, химии, на основе традиционной химии прир. соединений. Ее развитие связано с именами Л. Полинга (открытие а-спирали как одного из главньп элементов пространста структуры полипептидной цепи в белках), А. Тодда (выяснение хим. строения нуклеотидов и первый синтез динуклеотида), Ф. Сенгера (разработка метода определения аминокислотной последовательности в белках и расшифровка с его помощью структуры инсулина), Дю Виньо (хим. синтез биологически активного гормона окситоцина), Д, Бартона и В. Прелога (конформационный анализ), Р. Вудворда (полный хим. синтез мн. сложных прир. соединений, в т.ч. резерпина, хлорофилла, витамина В] ) и др. крупных ученых. [c.288]

Число белков, химическое строение которых полностью рас-шифровано растет с каждым годом. При сопоставлении полученных результатов обнаружились два чрезвычайно интересных факта прежде всего оказалось, что хотя у разных представителей животного мира строение определенного гормона очень сходно, однако все же существуют четкие видовые отличия. Так, например, инсулин, выделенный из организма кита и свиньи, совершенно тождествен, в то время как в инсулине лошади одна из 51 аминокислот заменена на другую. С другой стороны выяснилось, что носителем биологической активности может быть не вся белковая молекула, а определенная часть ее. Так, в растительном ферменте — папаине, построенном из 180 аминокислотных остатков, можно [c.335]

Гормоны относятся к биологически активным веществам, определяющим в известной степени состояние физиологических функций целостного организма, макро- и микроструктуру органов и тканей и скорость протекания биохимических процессов. Таким образом, гормоны —вещества органической природы, вырабатывающиеся в специализированных клетках желез внутренней секреции, поступающие в кровь и оказывающие регулирующее влияние на обмен веществ и физиологические функции. В это определение необходимо внести соответствующие коррективы в связи с обнаружением типичных гормонов млекопитающих у одноклеточных (например, инсулин у микроорганизмов) или возможностью синтеза гормонов соматическими клетками в культуре ткани (например, лимфоцитами под действием факторов роста). [c.248]

Кролики могут быть использованы повторно для определения биологической активности не ранее чем через 2 нед после окончания предшествующего опыта. Продолжительность использования кроликов в опытах по определению биологической активности инсулина не должна превышать 5 мес. [c.178]

Определение биологической активности инсулина [c.296]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ИНСУЛИНА [c.176]

Пример при определении биологической активности инсулина для инъекций с предполагаемой активностью 40 ЕД в 1 мл получили следующие величины снижения концентрации сахара в крови в процентах (У). [c.177]

Количественное определение. Активность инсулина для инъекций определяют биологическим методом (стр. 934). Найденная активность должна составлять не менее 90% и не более 110% от обозначенной на этикетке. [c.372]

Теоретически, повторяя этот процесс многократно, можно отщеплять поочередно все остатки первоначальной белковой молекулы, установив тем самым их взаимное расположение в макромолекуле. Практически, однако, ввиду сложности задачи она была полностью решена только для некоторых белков сравнительно несложного строения, как, например, инсулин. При этом выяснилось, что в размещении остатков аминокислот по цепи макромолекулы у биологически активных белков отсутствует та регулярность которая нередко встречается у других полимеров. В то же время у каждого вида белка наблюдается строго определенная последовательность аминокислотных звеньев. У белка шелка и коллагена обнаруживается известная регулярность. [c.330]

Переработаны методы определения биологической активности инсулина и оценки длительности эффекта препаратов инсулина пролонгированного действия. Во всех методах предусмотрено обязательное сопоставление активности испытуемого и стандартного препаратов и статистическая обработка получаемых данных. [c.16]

Г. Свойства проинсулина и С-пептида. Длина про-инсулинов колеблется от 78 до 86 аминокислот, причем эти различия обусловлены длиной С-пептида. Проинсулин имеет ту же растворимость и изоэлек-трическую точку, что и инсулин. Он также образует гексамеры с кристаллами цинка и реагирует с антисывороткой к инсулину. Биологическая активность лроинсулина составляет менее 5% биологической активности инсулина. Отсюда следует, что большая часть активного центра инсулина в молекуле предшественника замаскирована. Некоторая часть проинсулина секретируется вместе с инсулином, а в определенных ситуациях (опухоль из островковых клеток) он высвобождается в больших количествах, чем в норме. Поскольку период полужизни проинсулина в плазме значительно выше, чем у инсулина, и при этом проинсулин дает сильную перекрестную реакцию с антисывороткой к инсулину, уровень инсулина , определяемый радиоиммунологическим методом, в некоторых случаях может превышать содержание биологически активного гормона. [c.251]

Количественное определение. К суспензии добавляют 0,1 н. раствор соляной кислоты из расчета 0,2 мл кислоты на 1 мл суспензии, встряхивают и оставляют стоять 1 час для полного растворения осадка и разрушения комплекса. Затем проводят определение биологической активности инсулина (стр. 934). Найденная активность должна быть не менее 90% и не более 110% от обозначенной на этикетке. [c.571]

В период между 1944 н 1954 гг. развивались аналитические исследования по выделению, очистке и определению строения пептидов с высокой биологической активностью, а также методические разработки в области синтеза, например в 1950 г. был разработан метод смешанных ангидридов (Виланд, Буассона, Воган). Эти успехи сделали возможным химический синтез природных пептидов, обладающих биологической активностью. В 1953 г. дю Виньо удалось синтезировать первый пептидный гормон — окситоцин. Эта работа была удостоена Нобелевской премии за 1955 г. В следующие годы наступило бурное развитие синтетической пептидной химии, было предложено несколько новых защитных групп, эффективные методы кои-деисаш1и и иовые методические варианты, такие, как разработаниь й Меррифилдом в 1962 г. пептидный синтез иа полимерных носителях. Химический синтез инсулина и рибонуклеазы ознаменовал переход к белковому синтезу. [c.100]

Определение биологической активности инсулина проводят на здоровых кроликах весом 2,5—3,5 кг. Животных весом 1,8—2,3 кг выдерживают 14 дней, в течение которых они получают овес, сено или свежую траву, корнеплоды, комбинированные корма и воду в неограниченном количестве. По истечении этого срока определяют чувствительность кроликов к инсулину. Для этого кроликам дважды с интервалом 7—8 дней после 18-часового голодания вводят подкожно раствор стандартного препарата инсулина из расчета 0,4 ЕД на 1 кг веса и определяют величину снижения концентрации сахара крови в процентах. Кровь для исследования берут из краевой вены уха животных до введения инсулина и через 1 и 2 /2 часа после инъекции инсулина (для расчета берут среднюю концентрацию сахара из двух определений после введения инсулина). Из опытов исключают животных с исходной концентрацией сахара крови ниже 75 мг% и выше 120 мг%, а также реагирующих на указанную дозу инсулина судорогами или дающих снижение концентрации сахара крови менее 15% по отношению к исходной концентрации. Определение биологической активности инсулина производят не ранее чем через 7—8 дней после испытания на чувствительность. [c.935]

Синтез такой природной структуры, как молекула инсулина, выдвигает перед исследователями двойную задачу. Во-первых, требуется синтезировать две аминокислотные последовательности в 21 и 30 аминокислотных остатков. При современном уровне развития химии пептидов это можно осуществить с достаточно хорошим выходом. Другая сторона вопроса более сложна. Молекула инсулина содержит 6 остатков цистеина, которые в нативном белке определенным образом скомбинированы и образуют 3 дисульфидных мостика, причем один из них дает внутренний цикл в цепи А (остатки 6 и 11). При рекомбинации теоретически возможно 16 вариантов замыкания дисульфидных мостиков (рис. 26) но, повидимому, лишь единственная комбинация приводит к биологически активной молекуле. Это ставит жесткое условие найти разные типы защит для различных сульфгидрильных групп с тем, чтобы иметь возможность осуществить ступенчатое направленное замыкание определенных пар ЗН-групп. [c.166]

Содержание сахара (глюкозы) в крови при определении биологической активности инсулина чаще всего проводят феррициа-нидным (метод Хагедорна — Йенсена) или глюкозооксидазным методом, однако возможно применение и других методов. Рекомендуется использование готовых наборов реактивов и автоматизированных приемов, в частности автоматических аппаратов для определения сахара (глюкозы) в крови. [c.178]

Выяснение их строения облегчалось в значительной мере благодаря тому, что строение самого инсулина уже было установлено. При определении стрепогениновой активности выделенных пептидов оказалось, что активность H-Ser-His-Leu-Val-Glu-OH (фрагмент 9—13 цепи В инсулина) составляет 85 единиц/мг, H-Ser-His-Leu-Val-Glu-Ala-Leu-OH (фрагмент 9—15 цепи В инсулина) — 98 единиц/мг и H-Leu-Val- ys-Gly-Glu-Arg-ОН (фрагмент 17—22 цепи В инсулина) в окисленной форме — 200 единиц/мг. Другие пептиды, также обладающие стрепогениновой активностью, были выделены позднее из гидролизатов, полученных ферментативным расщеплением казеина [123, 124, 827, 1557], рибонуклеазы [1539] и гемоглобина [1155]. Довольно высокая стрепогениновая активность была обнаружена у биологически активных пептидов окситоцина и вазопрессина [2584], а также у нескольких фрагментов окситоцина [2587] (ср. табл. 14). [c.348]

Определение биологической активности инсулина проводят на здоровых кроликах массой 2,5—3,5 кг. Животных массой 1,8—2,3 кг предварительно не менее 14 сут содержат в условиях вивария, где они получают овес, сено или свежую траву, корнеплоды, комбинированный корм и воду. По истечении этого срока определяют чувствительность кроликов к инсулину. Для этого кроликам дважды с интервалом 7—8 сут после 18 ч голодания вводят подкожно раствор стандартного образца инсулина из расчета 0,5 ЕД на 1 кг массы тела животного и определяют величину снижения концентрации сахара в крови в процентах. Кровь для исследования берут из краевой вены уха животных до введения инсулина и через 1,5 и 2,5 ч после его введения (для расчета берут среднюю концентрацию сахара в крови из двух определений после введения инсулина). Кровь берут в условиях, не допускающих чрезмерного волнения кроликов. Из опытов исключают животных с исходной концентрацией сахара в крови ниже и выще пределов, установленных для используемого метода определения содержания сахара в крови (ниже 75 мг % и выше 120 мг % для феррицианидного метода, [c.176]

Метод определения биологической активности Определение биологической активности инсулина проводят на здоровых кроликах массой 2,5—3,5 кг. Животных массой 1,8— 2,3 кг предварительно не менее 14 сут содержат в условиях вивария, где они получают овес, сено или свежую траву, корнеплоды, комбинированный корм и воду. По истечении этого срока определяют чувствительность кроликов к инсулину. Для этого кроликам дважды с интервалом 7—8 сут после 18 ч голодания вводят подкожно раствор стандартного образца инсулина из расчета 0,5 ЕД на 1 кг массы тела животного и определяют величину снижения концентрации сахара в крови в процентах. Кровь для исследования берут из краевой вены уха животных до введения инсулина и через 1,5 и 2,5 ч после его введения (для расчета берут среднюю концентрацию сахара в крови из двух определений после введения инсулина). Кровь берут в условиях, не допускающих чрезмерного волнения кроликов. Из опытов исключают животных с исходной концентрацией сахара в крови ниже и выше пределов, установленных для используемого метода определения содержания сахара в крови (ниже 75 мг % и выше 120 мг % для феррици-анидного метода, ниже 52 мг % и выше 94 мг % для глюкозоок-сидазного метода), а также тех животных, которые реагируют на введение инсулина судорогами или у которых снижение концентрации сахара в крови составляет менее 15 % по отношению к исходной концентрации. Определение биологической активности инсулина проводят не ранее, чем через 7—8 сут после испытания на чувствительность. [c.297]

Успешное определение /[инокислот-ной последовательности в цепях инсулина способствовало интенсивному изучению взаимосвязи между структурой инсулинов, выделенных из различных видов, и их биологической активностью, связанной с регуляцией об1 ена глюкозы. Для биологической активности инсулина [c.153]

Ацетилирование-свободных аминогрупп инсулина не влияет на биологическую активность ацетилирование фенольной гидроксильной группы тирозиновых остатков приводит к обратимому снижению активности [757, 1907]. Этерификация свободных карбоксильных групп инсулина сопровождается инактивацией гормона, но после гидролиза сложноэфирных групп активность восстанавливается. В определенных условиях с формальдегидом реагируют только амино- и гуанидиногруппы инсулина при такой модификации молекулы инсулина гормональная активность сохраняется. Иодирование тирозиновых остатков приводит к обратимой инактивации [757, 1907]. [c.472]

Отдельными опытами на небольшом числе белков обнаружено, что для обеспечения максимальной биологической активности важное значение имеют определенные группы, входящие в состав аминокислот. Например, для проявления полной активности таких ферментов, как трансаминаза, фосфокиназа, деги-драза янтарной кислоты и многие другие, необходимо присутствие сульфгидрильных групп для инсулина требуется наличие дисульфидных и фенольных групп, а для лактогенного. гормона передней доли гипофиза — наличие свободных аминогрупп. [c.265]

Какой-либо биологической активности С-пептида не обнаружено. Эта молекула обладает иными антигенными свойствами, чем инсулин и проинсулин, поэтому иммунологическое определение С-пептида позволяет отличить эндогенносекретируемый инсулин от вводимого гормона и дает возможность судить о количестве эндогенного инсулина в тех случаях, когда его прямое определение оказывается невозможным из-за наличия инсулиновых антител. С-пептиды представителей различных видов характеризуются высокой частотой аминокислотных замен, что подтверждает положение о вероятном отсутствии биологической активности у этого фрагмента. [c.252]

Используя метод М. Волдана, К- Экшлагер определ активность чистого инсулина в различных сериях пре) рата и пришел к заключению, что результаты поля] графического определения совпадают с результата биологической оценки щ пределах случайных он бок. [c.184]

Приборы с открытым контуром не имеют этого ограничения. Они, однако, дороги, требуют постоянного ношения пациентом и, подобно любым другим механическим приборам, могут выходить из строя. С уществует также проблема агрегации инсулина, что приводит к потере его биологической активности и закупорке внутренних каналов прибора [30]. Как и в обычной инсулиновой терапии, в терапии с использованием открытой системы от пациента требуется частое определение глюкозы, чтобы удержать гликемию на должном уровне, поскольку дозы инсулина зависят от диеты и физической нагрузки. К достоинствам обоих терапевтических методов относятся [c.318]

Кроме того, значительные совпадения первичной структуры характерны для белков, выполняющих сходные биологические функции. Это показано, например, для семейства ферментов, ускоряющих реакции дегидрирования разнообразных субстрактов, а также для многих гидролаз, у которых последовательность аминокислотных остатков вблизи активного центра крайне близка и стандартна. Особенно высоким структурным подобием отличаются белки, выполняющие у разных видов одну и ту же функцию, что наглядно выявляется при сопоставлении первичных структур инсулина (табл. 8), а также цитохро-мов, гистонов, гипофизарных гормонов и других белков. У цитохромов, выделенных из синезеленых, красных и бурых водорослей, первичные структуры совпадают на 48—67%. Таким образом, видовая специфичность первичной структуры гомологичных белков сводится к ограниченному числу аминокислотных замен в полипептидной цепи в строго определенных положениях. [c.64]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология