Солевой раствор для ГКН-буфера

В 1971 г. Ф. Сенгер и Г. Николсон предложили жидкостно-мозаичную модель биомембран, согласно которой мембраны представляют собой жидкокристаллические структуры, в которых белки могут быть не только на поверхности мембран, но и пронизывать их насквозь. В этом случае основой мембраны является липидный бислой, в котором углеводородные цепи фосфолипидов находятся в жидкокристаллическом состоянии, и с этим бислоем связаны белки двух типов периферические и интегральнь1е. Первые - гидрофильные, связаны с мембранами водородными и ионными связями и могут быть легко отделены от липидов при промывании буфером, солевым раствором или при центрифугировании. Вторые белки - гидрофобные, находятся внутри мембраны и могут быть выделены только после разрушения липидного слоя детергентом (процесс солюбилизации мембран), например, додецилсульфатом натрия, ЭДТА, тритоном и др. Интегральные белки, как правило, амфипатические, т.е. своей гидрофобной частью они взаимодействуют с жирными кислотами, а гидрофильной частью - с клеточным содержимым. Интегральные белки часто являются гликопротеидами, которые синтезируются в аппарате Гольджи, глико-зилируются в мембране и содержат много гидрофобных АК и до 50% спиральных участков. Эти белки перемещаются внутри липидного бислоя со скоростью, сравнимой с перемещением в среде, имеющей вязкость жидкого масла ( море липидов с плавающими айсбергами белков ). [c.107]

Буфер для отмывания компонентов реакции — ИХН, содержащий 0,05 % твина-20. В качестве отмывочного буфера можно также использовать фосфатно-солевой раствор с 0,05 % твина-20. [c.78]

В случае культур, выращенных на твердой среде, нет необходимости использовать центрифугу или другие средства для сбора клеток, поскольку в этих культурах клетки находятся уже в сконцентрированном состоянии. Вместо этого на поверхность агара пипеткой наливают небольшое количество стерильного солевого раствора или буфера и суспендируют в нем выросшие колонии с помощью стерильного стеклянного шпателя. Таким способом можно получить большое количество клеток с поверхности агаровых сред в чашках Петри, в больших плоских культуральных матрасах (бутылях типа РУ) и в больших плоских чашках (покрытых крышками из пирекса). Особенно следует избегать центрифугирования при получении большого количества патогенных или [c.362]

Влияние различных концентраций солей на растворимость белков показано ниже, где л — ионная сила фосфатного буфера при pH 7,4 и температуре 0°, G — количество растворенного мышечного глобулина, выраженное в миллиграммах азота на 1 л солевого раствора [39] [c.114]

На колонки с нитроцеллюлозой обычным образом наносят нуклеиновые кислоты в 0,01 М 7 /)ис-буфере (pH 7,3), содержащем 0,5 М КС1. (Концентрация КС1 в этих растворах может быть несколько выше или ниже.) После нанесения образца колонку промывают ио крайней мере двумя объемами солевого раствора для удаления неадсорбировавшегося материала. Адсорбированные нитроцеллюлозой нуклеиновые кислоты элюируют с колонки 0,01 М т /)ис-буфером с pH 7,3 или дистиллированной водой. Выход нуклеиновых кислот составляет от 80 до 100%. [c.126]

В табл. 5 приведены данные по сорбции различных катионов из солевых растворов (не содержащих буфера) на Н-форме КРФ-Юп. В работах [1, 2] приведен порядок расположения катионов, характеризующий их селективное поглощение фосфорнокислыми смолами [c.48]

Такой порядок в основном является характерным для ионообменной сорбции на больщинстве катионитов. Сорбционный ряд, полученный на смоле КРФ-Юп при сорбции из 0,1 н. солевых растворов (не содержащих буфера), имеет необычный вид (см. табл. 5) [c.48]

В. Солевой раствор для ГКН-буфера [c.282]

Чтобы приготовить солевой раствор ГКН-буфера, используемого для растворения полиэтиленгликоля, в 1 л дистиллированной воды растворяют [c.282]

Рассмотренный только что для обычной сефарозы, этот вариант элюции, естественно, находит применение и при использовании гидрофобизированной агарозы. В качестве примера процитируем недавно опубликованную работу по мягкой очистке HMG-белка из ядер печени на колонке со-аминобутилагарозы. Этот белок растворим в растворе сульфата аммония вплоть до концентрации, достигающей 70% от насыщения. Сначала такой концентрацией СА в нейтральном 0,01 М трис-буфере высаливали из экстракта ядер большое количество балластного белка. Затем надосадочную жидкость, содержащую около 40 мг белка, вносили на колонку размером 2 X X 30 см, уравновешенную тем же раствором СА. Элюцию вели снижающимся линейным градиентом концентрации СА в том же буфере (500 мл) со скоростью 20 мл/ч, т. е. примерно 7 мл/см -ч. Низкая скорость элюции характерна для всех опытов такого рода ввиду повышенной вязкости концентрированных солевых растворов и соответствующего снижения скорости диффузии макромолекул. Около 30% белка не садилось на колонку и удалялось при первоначальной промывке. В ходе элюции выходило четыре пика, в первом из которых методом электрофореза идентифицировали HMG-белок [ onner. omings, 1981]. [c.181]

Очпстку обменипка от остатков сорбированных веществ осуществляют промывкой его крепким (2 М) солевым раствором, а если необходимо, то еще и щелочью допустимой для данного обменника концентра1 ии. Затем следует обильная промывка водой и уравновешивание исходным буфером. [c.295]

Соответствующие условия могут быть достигнуты и при добавлении к гомогенатам фосфатного, ацетатного и боратного буферов, а также растворов гидроокиси, гидрокарбоната и карбоната натрия [261—263]. Для уменьшения перехода органической фазы в водную и повышения степени экстракции 1,4-бенздиазепинов водную фазу насыщают солевым раствором. Например, при экстракции диазепама, нордиазепама, оксазепама, лоразепама и хлоразепата плазму крови насыщают КС1 [264], сульфатом натрия или сульфатом аммония [2591. [c.220]

Чеппелл [BJ 90, 225 (1964)] описывает метод определения концентрации растворенного в любом солевом растворе кислорода с использованием кислородного электрода. Он дает следующие значения концентрации Oj в насыщенном воздухом буфере (pH 7,2), содержащем 80 мМ КС1 15 мМ Р, и 20 мМ триэтаноламин [c.477]

Методика проведения ИФА в лунках планшета. Первый этап ИФА — сорбция соответствующего разведения АТ или АГ (в концентрации 10 — 20 мкг/мл) в карбонатно-бикарбонатном буфере (в объеме 0,1 мл) на твердую фазу в течение 1 - 2 ч при 37 °С и 10 — 12 ч при 4 °С (сенсибилизация). Затем отмывают лунки (для удаления несорбированного на носителе АТ или АГ) водопроводной водой, отмывочным буфером с 0,05 % твина-20 в течение 5 мин (два раза) при комнатной температуре. После этого вносят в каждую лунку (твердую фазу) по 0,1 мл 1%-го раствора БСА (бычьего сывороточного альбумина) на КББ и инкубируют в течение I ч при 37 °С для закрытия участков поверхности лунок, оставшихся свободными после сенсибилизации. Лунку отмывают от несвязанного БСА и вносят исследуемый материал (АГ или АТ) по 0,1 мл в разведениях на фосфатно-солевом растворе (pH 7,2) с 0,05 % твина-20. Каждое разведение материала вводят в две лунки и помещают в термостат на 1 — 3 ч при 37 °С. Отмывают непрореагировавшие в иммунной реакции АГ или АТ и вносят по 0,1 мл коньюгированных АТ против исследуемого АГ или АТ в рабочем разведении на фосфатно-солевом растворе с 0,05 % твина-20. Затем их инкубируют в течение 2 ч при 37 °С. Несвязанный конъюгат трижды отмывают буфером. [c.79]

Бренстед, исследуя каталитическую активность частично ионизированных кислот в солевых растворах, установил, что имеется два различных вида влияния при каталитическом действии инертных солей. Первое, называемое первичный солевой эффект , выражается в увеличении каталитической активности иона водорода. Второе, известное под названием вторичный солевой эффект , проявляется в виде изменения константы ионизации кислоты. В то время, как повышение каталитической активности иона водорода происходит непрерывно с изменением концентраций соли, константа ионизации повышается до макси-Л1альной величины и затем уменьшается. Таким образом в результате добавления электролита могут меняться не только активность и реакционная способность, но вследствие влияния, оказываемого на степень диссоциации, может также измениться концентрация ионов Н+и 0Н . Первичный солевой эффект -был признан прямым кинетическим эффектом. Вторичный кинетический Солевой эффект [73, 76, 77] зависит не только от электрического типа, силы и концентрации кислоты, но также от количеств, в которых присутствуют компоненты, составляющие буфер. Вторичный солевой эффект всегда сопровождается первичным эффектом. Добавление нейтральной соли того же аниона изменяет ионную силу среды и таким образом изменяет скорость реакции при данной концентрации. Линейный характер солевого эффекта более резко выражен в концентрированном растворе (90% в 3N Na l), и изменение каталитической эффек- [c.225]

Состав системы растворителей на колонке с сефадексом G-25 можно изменить таким образом, что некоторые компоненты станут нерастворимыми и благодаря этому задержатся на колонке, в то время как растворимые компоненты будут элюироваться. Подобное явление имеет место, например, при дифференцировании по В. Эпштейну и М. Тану [152] так называемых эуглобулинов и псевдоглобулинов сыворотки человека. Если образец сыворотки в 1М поваренной соли поместить на колонку с G-25, уравновешенную предварительно очень разбавленным буфером, и элюировать тем же самым буфером, то вначале белки отделяются от соли. Хорошо растворимые в разбавленном растворе соли псевдоглобулины (главная часть белков сыворотки) элюируются с колонки гораздо раньше, чем Na l. Однако эуглобулины, отделившись от соли, становятся нерастворимыми. При дальнейшем элюировании они вновь растворяются в солевом растворе и так далее. В итоге они выходят с колонки вместе с фронтом поваренной соли. Порат [153] развил этот принцип дальше. Вначале в колонке с сефадексом G-100 создают возрастающий градиент концентрации соли (сверху вниз). Если теперь на колонку нанести смесь белков и элюировать водой, то компоненты смеси будут мигрировать быстрее, чем будет изменяться градиент соли. Таким образом, белки в соответствии с их растворимостью в солевых растворах выпадают в осадок в разных местах колонки, вновь растворяются по мере сдвига градиента и так далее. Таким путем (т. е. зонным осаждением) можно разделить белки одинаковых размеров, но с различной растворимостью. [c.200]

После загрузки образца колонка промывалась солевым раствором в фосфатном буфере, а затем фосфатцитратным буфером Макилвайна (pH 3,8), содержащим 500 мкг/мл цитохрома с. Интерферон элюировался в градиенте pH, начало наложения градиента указано стрелкой. Около 80% активности интерферона собрано в двух пиках, / — пропускание 2 — содержание [c.115]

Прилипание иодированного белка к рибосомам весьма специфично н целиком определяется присутствием в нем гаптенноп дпнитрофенильной группы. Прилипший радиоактивный белок не отмывается ни буфером, ни солевым раствором, по е-динитро-фениллизипом [c.506]

Буферные солевые растворы. Для приготовления колонок с МАК и работы с ними использовали 0,1 0,2 0,4 и 1,2 М растворы Na l, приготовленные на 0,05 М фосфатном буфере с pH 6,7. [c.114]

М фосфатный буфер с pH 6.7, содержащий 0,4 М Na l (0,4 М забуференный солевой раствор) [c.117]

Кизельгур, покрытый метилированным альбумином (МАК), также приготавливают по методу Манделя и Херши [2] В качестве второго слоя в колонке используется промытый и покрытый белком кизельгур (МАК). МАК приготавливают следующим образом. Суспензию 20 г кизельгура в 100 мл забуференного 0,1 Ж солевого раствора кипятят для удаления воздуха и охлаждают. К этой суспензии добавляют 5 мл МА, перемешивают и добавляют еще 20 мл забуференного солевого раствора . Забуференные солевые растворы представляют собой 0,05 М натрий-фосфатный буфер с pH 6,7, содержащий различные количества Na l pH растворов, в которые добавлена соль, будет несколько ниже, чем 6,7, однако их используют в таком виде, не доводя pH точно до 6,7. Забуференные солевые растворы хранят на холоду. [c.122]

В качестве примера здесь описано приготовление колонки, содержа-я(ей 30. мл суспензии МАК. В хроматографическую колонку с внутренним диаметром 30 мм сначала номеш,ают бумажный порошок и затем добавляют примерпо 20 мл 0,1 М раствора забуференной соли. Для того чтобы жидо ость не вытекала из колонки, ее нижнюю часть перед добавлением жидкости закрывают пробкой. Смесь тщательно суспендируют стеклянной палочкой и пробку вынимают после вытекания жидкости на дне колонки образуется ровный слой (2—4 мм) бумажного порошка. Затем колонку вновь закрывают снизу пробкой и пипеткой с большим выходным отверстием на слой целлюлозы медленно наливают 30 мл суспензии МАК. После этого пробку вынимают и МАК уплотняют в колонке под давлением воздуха. Для того чтобы колонка пе подсохла, подачу воздуха прекращают в тот момент, когда над слоем МАК почти не останется буферного раствора. Затем на слой МАК наливают прокипяченную суспензию 2 з кизельгура в 0,05 М натрий-фосфатном буфере и уплотняют ее точно так >iie. Слой кизельгура предохраняет слой МАК от повреждений. Колонку промывают забуферепным солевым раствором (из расчета 10 объемов раствора на один объем МАК). Обычно колонки промывают забуферепным [c.123]

Образцы ДНК и растворители. Высокополимерные очищенные препараты ДНК, выделенные из бактериофагов или вирусов фенольным методом [10] или из микроорганизмов и тканей методами Мармура [И], Gan-то и Миуры [12] или Томаса и сотр. [13], растворяют в соответствующем буфере. В примерах, которые здесь рассматриваются, используется стандартный солевой нитратный буфер SSG следующего состава 0,15 М Na l, [c.185]

Полисткрольные микропланшеты. В ряде экспериментов показаны различия в эффективности связывания белков разными типами полистирольных микропланшетов в идентичных (не всегца оптимальных) условиях. Для этой цели использовали двухстадийный метод определения связывания IgG. На первом этапе IgG кролика (Dakopats) растворяли в солевом фосфатном буфере (СФБ) при pH 8,2 (или другом заданном pH). Аликвоты по [c.60]

Этанол в сочетании с 1 объемом 5%-иого твииа 80 и 1 объемом фосфатного буфера ДМСО или гомогенизация в ДМСО с 9 объемами 5%-ного твина 80 в солевом растворе ДМСО [c.278]

ЗФР — забуференный фосфатами солевой раствор, НСА — асыщенный раствор сульфата аммония, буфер с низкой ионной силой 5 мМ фосфат натрия, pH 5,8 (готовят 10-кратный исходный раствор и разводят его по мере необходимости). [c.224]

Смотреть страницы где упоминается термин Солевой раствор для ГКН-буфера: [c.177] [c.181] [c.228] [c.234] [c.283] [c.284] [c.388] [c.436] [c.445] [c.482] [c.78] [c.148] [c.218] [c.278] [c.259] [c.117] [c.117] [c.124] [c.432] [c.51] [c.113] [c.115] [c.74] [c.65]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология