Ультрацентрифугирование полисахаридов

Термин макромолекулы обычно применяется к молекулам с молекулярными весами более 10 000. Такие макромолекулы, как белки, полинуклеотиды и полисахариды, необходимы для жизни, их структуры осуществляют сложные функции. Макромолекулы типа синтетических высокополимеров являются основой многих синтетических волокон, пластиков и синтетического каучука. Соотнощение между физическими свойствами этих материалов и их молекулярным строением имеет огромнейшее значение. В этой главе будут рассмотрены белки и синтетические высокополимеры. Изучая такие свойства, как вязкость, ультрацентрифугирование, диффузия осмотическое давление и рассеяние света, можно получить информацию об их молекулярном весе, о распределении и форме распределения молекулярных весов. [c.601]

В виде неразделимых суспензий, таких, как вирусы, высокомолекулярные белки, нуклеиновые кислоты, полисахариды и т. п. Для выделения такого типа веществ из растворов метод ультрацентрифугирования имеет огромное значение, так как оно протекает при мягких условиях и низкой температуре. [c.193]

Молекулярную массу и форму молекул полисахаридов можно также определить с помощью метода ультрацентрифугирования. По скорости седиментации при ультрацентрифугировании рассчитывают значение молекулярной массы сравнивая поведение исследуемого образца и молекулярной модели, можно оценить форму молекулы. Этот метод применен [77] при изучении гиалуроновой кислоты. Ультрацентрифугирование не используют как способ очистки, но обычно применяют в качестве теста на гомогенность очищенного образца. [c.234]

Современные методы установления строения полисахаридов применимы лишь к индивидуальным веществам. Работа с неочищенными полисахаридными препаратами может привести к выводам о строении, весьма далеким от истины. В то же время не существует вполне строгих критериев индивидуальности выделенного полисахарида, так же как нет употребительных для всех случаев методов контроля за процессом выделения. Полисахарид обычно считается индивидуальным, если не менее двух разных способов очистки не изменяют его мономерный состав и физико-химические свойства (например, удельное вращение, молекулярный вес), а общепринятые аналитические методы не выявляют наличия примесей (гомогенность по данным хроматографии, электрофореза, ультрацентрифугирования). [c.488]

Индивидуальность полученных препаратов гликопротеинов контролируется чаще всего аналитическим ультрацентрифугированием (см., например, ), электрофорезом с подвижной границей или на носителях, хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе. Как и в случае полисахаридов, критерием однородности выделенного гликопротеина может служить неизменность его мономерного состава (моносахаридов и аминокислот) и физико-химических свойств при применении нескольких способов очистки. Для определения нативности выделенных веществ особое значение имеет контроль их биологической активности, в первую очередь иммунологических свойств. [c.567]

Степень полимеризации иолисахаридов ГМЦ в большинстве случаев находится в диапазоне 30—300. Для характеристики величины молекулярной массы широко используются химические методы, основанные на определении восстанавливающей способности полисахарида. Из физических методов находят применение вискозиметрия, осмометрия, светорассеяние, ультрацентрифугирование, определение скорости седиментации и др. [57,77,78]. Распространено определение молекулярных масс полисахаридов с помощью молекулярных сит — сефадексов, биогелей. [c.56]

Одна из сложностей работы с полисахаридами заключается в том, что не существует строгих критериев их гомогенности. Считается, что полисахарид индивидуален, если аналитические методы (хроматография, электрофорез, ультрацентрифугирование) не обнаруживают примесей, а различные способы очистки не меняют мономерный состав полисахарида и его физико-химические свойства. [c.467]

Распространенное мнение о том, что пектиновые вещества состоят в основном из полигалактуронана линейной структуры с примесями араби-нана и галактана, хотя и подкрепленное единичными случаями выделения арабинана и галактана из пектиновых фракций полисахаридов, является, по-видимому, слишком упрощенным. Доказано , что, как правило, пектовые кислоты представляют собой гетерополисахариды. В самое последнее время удалось показать , что из пектина коры пихты с помощью ультрацентрифугирования при pH 4 — метода, исключающего деструкцию, — можно действительно выделить гомополисахарид, построенный из D-галактуроновой кислоты. Другой полисахаридный компонент — собственно пектовая кислота — содержит кроме уроновой кислоты еще и нейтральные моносахариды галактозу, рамнозу и арабинозу, что доказано частичным кислотным гидролизом. [c.529]

Примером такого рода полисахаридов может служить гликоген из дрожжей (Sa haromy es erevisiae) При кислотном гидролизе его получена глюкоза с выходом 96% определение молекулярного веса ультрацентрифугированием дает значения порядка 2-10 . Результаты метилирования, периодатного окисления, частичного кислотного гидролиза и ферментативного гидролиза под действием а-амилазы и 3-амилазы указывают на высокоразветвленную структуру гликогена со средней длиной цепи 11 —13 остатков глюкозы внешние цепи содержат в среднем восемь остатков глюкозы. Близкие по строению полисахариды выделены из микроорганизмов самых различных классов. [c.545]

Из других методов применяют электрофорез, катионообменную хроматографию и хроматографию на полиамиде и других адсорбентах [57, 59, 62, 166, 275, 2891. Из некоторых результатов следует, что, по крайней мере, часть выделенных лигнин-полисахаридных комплексов может представлять собой липJь ассоциаты фрагментов лигнина и полисахаридов. По данным гель-проникающей хроматографии, ультрацентрифугирования и эбулиоскопических измерений молекулярная масса выделенных комплексов находится в интервале от 600 до 15 ООО [12, 57, 58, 59, 139, 2741. [c.137]

Методы аыделения полисахаридов аесьма разнообразны. К ним относятся экстракция (водой, щелочами, разбавленными кислотами), осаждение (спиртом, сульфатом аммония, бромидами цетилтриметиламмония и цетилпиридиния), хроматография (ионообменная, гельфильтрация), ультрафильтрация и ультрацентрифугирование. [c.467]

Таким образом, индивидуальными полисахаридами приходится считать такие, которые не удается разделить современными методами. Практически препараты полисахаридов считаются чистыми, если при применении ряда методов в них обнаруживается лишь один компонент (один пик элюции при хроматографировании, один пик на седиментограмме при ультрацентрифугировании, а также на электрофореграмме при электрофорезе) и, кроме того, если попытки дальнейшей очистки препарата разными методами не изменяют его мономерного состава и свойств (растворимости, вязкости, удельного вращения и и т. д.). [c.57]

Молекулярная масса гиалуроновой кислоты, полученной из различных источииков, составляет (2,0—2,8) 10 . Данные светорассеяния показали, что молекула гиалуроновой кислоты образует спираль с радиусом 150—400 нм. Ее комплексы с протеинами, выделенные ультрацентрифугированием или электродиализом, имеют молекулярную массу порядка (8—10)-10 . Эти комплексы сильно гидратированы. Содержание протеина в комплексе достигает 20—30%. Он может быть отделен от полисахарида на ДЭАЭ-сефадексе или разрушением полисахарида гиалуронидазой. По иммунологическому и электрофоретическому поведению протеиновый компонент комплекса близок к а-глобулинам и содержит, по-в идимому, примеси р- и у-глобулинов, однако он отличается от глобулинов плазмы крови. О комплексах гиалуроновой кислоты с альбуминами см. [70]. [c.88]

Размеры некоторых вирусов столь велики, а их седимента-ционные константы имеют столь высокие значения (от 150 S и, по крайней мере, до 275—350 S), что седиментация даже при относительно слабых гравитационных полях заканчивается довольно быстро. Например, при ускорении, равном 60 000 X ё, в течение 1 часа был получен вирус папилломы кролика 99,9%-ной чистоты [285]. Белки с размерами молекул, не превышающими размеры молекул гемоглобина, удается сконцентрировать в небольшом пространстве на дне пробирки в течение примерно 4 час. при относительной центробежной силе, соответствующей 100 000 — 200000X5 [21]- В благоприятных случаях можно достигнуть значительного разделения двух белков, седиментационные константы которых различаются в 2—3 раза. Для веществ, которые по скорости оседания мало отличаются друг от друга, может оказаться необходимым многократное ультрацентрифугирование однако следует помнить о том, что если можно изменить соотношение обоих компонентов, то часто увеличивается возможность успешного их разделения с помощью какого-либо иного метода, например химического фракционирования. Методы ультрацентрифугирования полезно применять для удаления смол, гликогена или других полисахаридов, которые часто имеют тенденцию соосаждаться с белками и затрудняют их кристаллизацию. [c.67]

Кислые полисахариды могут присутствовать в неочищенном препарате липополисахарида, полученном экстракцией смесью вода — фенол. В этом случае на стадии ультрацентрифугирования они вместе с нуклеиновой кислотой остаются в супернатанте. Разделение кислых полисахаридов и нуклеиновых кислот основано на том, что в отличие от комплекса с нуклеиновыми кислотами комплекс цетавлона с кислыми полисахаридами растворим в 0,3 М растворе хлористого натрия. Оба названных комплекса растворяются в 1 М растворе хлористого натрия [12]. Супернатант, содержащий кислые полисахариды и нуклеиновую кислоту, растворяют в таком количестве 0,5 М раствора хлористого натрия, чтобы получился 2%-ный раствор. К этому раствору добавляют 2%-ный водный раствор цетавлона до прекращения выпадения осадка. Осадок комплекса цетавлона с нуклеиновыми кислотами отделяют центрифугированием. При разбавлении супернатанта водой осаждается комплекс цетавлона с кислыми полисахаридами. Этот осадок растворяют в 1 М растворе хлористого натрия (1 г влажного осадка на 100 мл раствора), диализуют 72 ч против воды и содержащий кислые полисахариды раствор лиофилизуют. Модифицированная методика, сходная с приведенной выше, была использована [13] для выделения и очистки кислых полисахаридов из Serratia mar es ens. С помощью этой же самой методики из капсул Е. oli были получены антигены, представляющие собой кислые полисахариды [14]. [c.129]

В связи с развитием ряда биохимических методов исследования большое значение также приобрели целлюлозиониты (стр. 255) они имеют низкую степень замещения (на 4—8 остатков глюкозы обычно вводят одну ионогенную группу) и при надобности могут быть использованы в виде ткани или бумаги. Так как макромолекулы их практически полностью выпрямлены и не связаны между собой в трехмерной сетке, диффузия крупных частиц к ионогенным группам полимера происходит значительно быстрее, чем у обычных ионитов. Это позволяет применять повышенные скорости фильтрации при хроматографическом выделении, разделении и очистке таких природных полимеров, как белки, нуклеиновые кислоты и полисахариды на колоннах. Подобные методы, несмотря на свою простоту, превосходят по эффективности электрофорез и ультрацентрифугирование они могут быть использованы в клинической практике для обнаруживания патологических изменений в организме. [c.450]

Буддеке и Шуберт [24] получили из аорты человека хондроитин-6-суль-фат-белковый комплекс, который по данным колоночной хроматографии, электрофореза и аналитического ультрацентрифугирования состоял из однородных макромолекул. Он содержал около 20% белка неколлагеновой природы. Даже после обработки 0,2 н. едким натром при 37° в течение 5 час 4—5% полипептида оставались присоединенными к хондроитинсульфату. Авторы интерпретировали полученные результаты как указание на ковалентную связь между белком и полисахаридом. [c.31]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология