Сывороточный альбумин диссоциация

Правда, в белке имеются различные кислые и основные группы, но формула (V. 5) остается приближенно правильной, если отнести значения Ка Кв наиболее сильным группам. Для полного определения молярного содержания различных ионо генных групп в белке и их констант диссоциации измеряют ход поглощения Н+ - и 0Н - ионов в широком интервале pH (примерно, pH 2—12), прибавляя к белковому раствору различные количества кислоты или щелочи и измеряя равновесное pH водородным или стеклянным электродом. При помощи этих кривых титрования белков определяют также максимальную емкость поглощения кислот и оснований, т. е. максимальное число зарядов на белковой молекуле. Например, для сывороточного альбумина человека при pH = 2 эта величина составляет 7]о = 100 элементарных зарядов на молекулу белка. [c.114]

И поэтому он больше, чем радиус, который описывал бы макромолекулу гипотетического незаряженного сывороточного альбумина, имеюш,его конформацию хаотического клубка. Однако дополнительное разворачивание молекулы, обусловленное электростатическим отталкиванием, не будет таким сильным, как наблюдаемое для большинства полиэлектролитов, рассмотренных в разделе 27, потому что в полностью заряженной макромолекуле сывороточного альбумина примерно на 600 мономерных звеньев приходится только 100 зарядов, причем остальные звенья неспособны в кислом растворе нести заряд. Мы можем только догадываться о действительной картине влияния электростатических сил. На рис. 140 было показано, что в отсутствие соли при степени диссоциации /в в случае полиметакриловой кислоты Rq изменяется от величины, приблизительно равной 100 А (недиссоциированная кислота), до 300 А, но в данном полимере боковые цепи расположены ближе друг к другу, чем боковые цепи у полипептидной молекулы. Поэтому влияние электростатического отталкивания, вероятно, по крайней мере вдвое больше. Следовательно, гипотетическая незаряженная макромолекула сывороточного альбумина в конформации хаотического клубка будет, вероятно, иметь величину Ra несколько большую 55 А и, конечно, меньшую ПО А. [c.588]

Однако диссоциация в области pH более щелочных, чем 4,6, аномальна, потому что она происходит при уменьшении суммарного заряда (изоэлектрическая точка находится при рН = =5,2). Возможные объяснения этой аномалии, по существу, те же, что приведенные на стр. 587. Они учитывают отсутствие симметрии относительно изоэлектрической точки, которое наблюдается для стабильности компактной конформации сывороточного альбумина. [c.591]

В ЭТОЙ таблице представлены также характеристические значения теплоты и энтропии ионизации для диссоциации фенольных групп. В случае сывороточного альбумина и здесь наблюдаются большие-отклонения от ожидаемых результатов. [c.633]

Как будет показано ниже, сывороточный альбумин претерпевает изменение конформации при значениях pH, соответствующих титрованию фенольных групп. Изменение происходит в направлении более развернутой конформации, при которой степень диссоциации всех кислотных групп увеличивается. Если это изменение (при постоянном г) заметно зависит от температуры, то наблюдаемые величины Д5 и частично связаны с влиянием температуры на конформацию, что может служить еще одним возможным объяснением аномальных значений этих функций, данных в табл. 41. Экспериментальное исследование влияния температуры на изменение конформации еще не было проведено. [c.634]

Наряду с сефадексом для гельфильтрации успешно применяются другие материалы, такие как агар и синтетические гидрофильные полимеры, например, полиакриламидные гели — биогели, а также гидрофобные полимеры, набухающие в органических растворителях и используемые для фракционирования гидрофобных полимеров. Весьма удачным для белковой физико-химии оказалось использование агара. Пористость агарового геля зависит от концентрации агара. С уменьшением его концентрации в геле доступность внутренних частей зерен для макромолекул увеличивается. На низкоконцентрированных гелях (2,5—5%) имеется возможность разделять белки с молекулярным весом вплоть до миллионов [25]. Так, гемоцианины, тироглобулин, у-глобу-лин человека, сывороточный альбумин, а- и р-лактоглобулин обладают существенно различными скоростями перемещения на колонке из агара. Стандартизация метода гельфильтрации позволяет его использовать не только для фракционирования белков, но и для определения молекулярного веса в весьма простом хроматографическом эксперименте. Интересной областью приложения гельфильтрации на сефадексе явилось определение молекулярного веса мономерных форм белков, способных к ассоциации. Как известно, полная диссоциация подобных комплексов наблюдается при столь низких концентрациях растворов, когда использование [c.204]

Сывороточные белки. Ряд явлений взаимодействия между сывороточным альбумином и глобулином еще не объяснен, но, повидимому, часть молекул глобулина диссоциирует в концентрированных сыворотках под действием сывороточного альбумина, причем степень диссоциации зависит от [c.541]

Диссоциация может быть вызвана простым разбавлением или добавлением таких веществ, как мочевина или солянокислый гуанидин. Такой протамин, как клупеин, может расщеплять сывороточный альбумин, как показано на рис. 142 [72]. [c.540]

Здесь следует сказать несколько слов о разбавленных растворах ферментов. Хорошо известно, что очень разбавленные ферментные растворы быстро теряют активность, но эту потерю можно предотвратить, если добавить в раствор относительно большое количество другого белка, чаще всего бычьего сывороточного альбумина (БСА). При процедурах по очистке обычно не добавляют сопутствующего белка, поэтому очень разбавленные растворы следует концентрировать как можно скорее (см. разд. 1.4). Но для измерения ферментативной активности желательно, чтобы конечная концентрация фермента в ходе анализа была очень низкой — до 1 мкг-мл . Это может вызвать быструю инактивацию фермента даже разведение образца непосредственно перед анализом иногда приводит к потерям. В этих случаях добавление БСА как стабилизатора оправданно и должно всегда использоваться. Характер действия БСА не ясен и, вероятно, включает различные эффекты. Крайняя степень разведения белка может привести к диссоциации субъединиц, которые либо не обладают активностью, либо, даже если они полностью сохраняют активность, становятся нестабильными и быстро денатурируют. Возможно, что БСА взаимодействует непосредственно с разбавленным белком, снижая вероятность его диссоциации или стабилизируя субъединицы. Кроме того, небольшое количество белка, присутствующего в растворе, может адсорбироваться на стенках контейнера, особенно если он стеклянный. 1 мкг белка может быть полностью связан на 5 см стенки контейнера, но в присутствии 1 мг БСА 1 мкг адсорбированного белка практически полностью будет представлен БСА, и поэтому лишь небольшое количество фермента будет потеряно из раствора. Для разбавления белковых растворов перед анализом следует использовать подходящий буфер, содержащий БСА в концентрации до 10 мг-мл , а в самой анализируемой смеси концентрация БСА должна составлять по крайней мере 0,1 мг мл . [c.255]

Изоэлектрическая точка большинства растворимых в воде белков (сывороточных, яичного альбумина и др.) лежит в слабокислой зоне, т. е. многие белки обладают характером амфотерных соединений, у которых степень диссоциации карбоксильных групп несколько превышает степень диссоциации основных групп. [c.22]

Компактная конформация сывороточного альбумина несколько более устойчива в щелочной области относительно изоэлектрической точки, чем в кислой. Прежде чем молекула развернется, ее заряд в растворе с ионной силой 0,05 может достигнуть —40. Согласно уравнению (26-30), этот случай соответствует величине lFg,=32 ООО кал/моль. Причина большей устойчивости по отношению к действию отрицательных зарядов неизвестна. Возможно это артефакт, являющийся результатом применения уравнения (26-30) для вычисления Wf,. Может быть заряды расположены так, что W быстрее возрастает с ростом заряда в кислой области, чем в щелочной. Другая возможность заключается в том, что процесс разворачивания первоначально связан не со всей макромолекулой, а только с ее частью. В этом случае разворачивание начнется, когда любой такой части цепи превысит энергию внутренних связей, и тогда нет никакой необходимости связывать процесс с величиной 17е1 целой макромолекулы. Наконец, следует иметь в виду, что сама энергия связей, обусловливающих устойчивость компактной структуры, может зависеть от pH. Это будет справедливо, например, если заметный вклад в величину свободной энергии компактной структуры дают водородные связи, в образовании которых принимают участие способные к диссоциации боковые группы. [c.587]

В качестве примера применения уравнения (29-38) можно привести график зависимости 2,303 Я дрН1д 1Т)]т от г для случая диссоциации молекул бычьего сывороточного альбумина с образованием иона водорода (рис. [c.619]

Несмотря на то, что при введении в белок или отщеплении от него какой-либо группы следует ожидать лишь незначительного изменения молекулярного веса белка, вторичные процессы могут привести к димеризации, агрегации или диссоциации. Выше уже были описаны некоторые примеры, а именно 1) влияние малонилирования или образования меркаптида на сывороточный альбумин и 2) этерификация инсулина, в результате которой происходят диссоциация и вторичная агрегация. Следует отметить также полимеризацию относительно нерастворимой, но в значительной степени дезаминированной фракции А яичного альбумина. Кроме того, измерениями осмотического давления [118] было показано, что обработка сывороточного и яичного альбуминов формальдегидом ведет к появлению межмолекулярных поперечных связей. Тот факт, что для белковых производных почти не проводились измерения формы молекул, также следует подчеркнуть особо, поскольку изменение асимметрии является [c.344]

Быстро оседающая компонента (максимум Л) представляет собой недиссоцнирующий белок медленно оседающая колпонента (максиму Б) — продукт диссоциации (й и ДГ Я 1/8 М для сывороточного альбумина). Смещения для самого клупеина вычтены из ординат КТ ивой. В) емя— мин. после ) аз-вития полной скорости. Расстояние от шкалы в см. [c.539]

Быстро оседающая компонента (максимум А) представляет собой недиссоциирующий белок медленно оседающая коупонента (максимум Б) —продукт диссоциации (з и ЛГ 1/8 Ж для сывороточного альбумина). Смещения для оамого клупеина вычтены из ординат кривой. В емя —Юи мин. после I аз-вития полной скорости. Расстояние от шкалы 6 см. [c.539]

Рис. 5. Аффинная хроматография с конкурентным зональным элюированием для системы с бивалентным связыванием. Зоны (100 мкл) мономера [ ]IgA (бивалентное связывание) наносми на фосфорилхолин-сефарозу с высокой плотностью лиганда (7X25 мм, [Ь]=5-10-5 моль/л), уравновешенную МаСЬ натрийфосфатным буфером (содержащим 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина) фосфорилхолин имел следующие концентрации (моль/л) 7 — 0 2—1 10- 5 —2,5-10-6 4 — 5,010- 5 — 7,5-10- 5—1,0-10-5. Элюирование осуществляли при комнатной температуре буфером, содержащим указанное количество растворенного конкурентного фосфорилхолина. В правом верхнем углу по данным элюирования построена зависимость 1/(К—Уо) от концентрации фосфорилхолина. Константы диссоциации /Сь и /Сп рассчитаны с помощью этого графика с использованием уравнения (5) и приведены в табл. I [9].

Справочник химика 21

Химия и химическая технология