Карбоксипептидаза выделение

КАРБОКСИПЕПТИДАЗА A БЫКА ВЫДЕЛЕНИЕ, [c.504]

Каждый из выделенных пептидов затем изучают в отдельности. Для исследования аминокислотной последовательности наиболее удобны небольшие пептиды, содержащие от четырех до шести аминокислотных остатков. Для них легко установить N- и С-концевые аминокислоты, а также, применив деградацию по Эдману или гидролиз карбоксипептидазой А, определить всю последовательность. Крупные фрагменты после определения концевых остатков и аминокислотного состава обычно расщепляют дополнительным гидролизом на более мелкие части. [c.84]

Пример 1. Очистка карбоксипептидазы А из скелетной мышцы крысы [Bo lwell, Meyer, 1981]. Выделенный из картофеля специфический белковый ингибитор карбоксипептидазы А присоединяли к Br N-активированной сефарозе 4В в концентрации 1 мг на [c.412]

Этот фермент может быть выделен из экстрактов поджелудочной железы в чистом виде [128], но до использования для определения последовательности аминокислот его рекомендуется инкубировать с диизопропилфторфосфатом, чтабы инактивировать возможные примеси химотрипсина, трипсина и субтилизина [122, 267, 300]. Основные свойства и специфич-кость действия карбоксипептидазы подробно рассмотрены в ряде работ [228 293]. В Других работах [114, 136, 226, 320] приводятся данные об использовании фермента для определения последовательности аминокислот в белках. Карбоксн-Пептйдаза специфична в отношении С-концевых аминокислот [c.232]

Первым ферментом, выделенным в чистом кристаллическом виде, была уреаза (Ж. Б. Сумнер, 1926 г.). Она была получена из одной разновидности фасоли экстрагированием водой и осаждением экстракта ацетоном. Затем были выделены в кристаллическом виде высаливанием из водных растворов сернокислым аммонием или сернокислым магнием при определенном pH пепсин и трипсин (И. X. Норсроп и М. Куниц, 1929 г.), а также и другие ферменты, в том числе желтый окислительный фермент, папаин, карбоксипептидаза, тирозиназа, каталаза и несколько дегидраз. [c.793]

Известные в настоящее время методы определения С-концевых остатков менее удовлетворительны. Для этого определения может быть использован фермент карбоксипептидаза (представляющий собой, по существу, группу сходных ферментов). Карбоксипептидаза действует только на свободные а-карбоксильные группы, подобно тому как лейцинаминопептидаза действует на свободные а-аминогруппы. Другой метод, разработанный Акабори, основан на полном гидразинолизе полипептида. Гидразин реагирует с каждой пептидной связью, превращая все аминокислоты (за исключением С-кон-цевой, карбоксил которой не участвует в образовании пептидной связи) в ацилгидразипы. С-концевую аминокислоту отделяют и идентифицируют хроматографически. Значительно реже используется метод, основанный на восстановлении С-концевой карбоксильной группы до спиртовой с помощью подходящих доноров гидрид-иона. При последующем полном гидролизе полипептида образуется аминоспирт, соответствующий С-концевой аминокислоте. Этот аминоспирт может быть выделен и идентифицирован. [c.88]

ЗИМОГЕНЫ (проферменты) — неактивные предшественники ферментов, превращающиеся в активные ферменты в результате структурных изменений. 3. чаще всего встречаются среди протеиназ (пепсин, ренин, трипсин, химотрипсин и карбоксипептидаза А), гидролитически расщепляющих белковые вещества в пищеварительном тракте животных. Эти ферменты вырабатываются клетками слизистой желудка, кишечника или поджелудочной железой и выделяются в желудочно-кишечный тракт в виде 3. (пепсиногона, прореннина, трипсиногена, химотрип-синогена и прокарбоксипептидазы). Такой способ образования и выделения протеиназ является приспособлением, защищающим клетки и ткани организма от самопереваривания их ферментами, вырабатываемыми в этих клетках. [c.54]

Описанные выше исследования проведены на довольно сложных смесях пластеин-активных гидролизатов. Впервые образование пластеинов из фракции гидролизата пластеинов, выделенной электрофорезом, описано Виртаненом [2378], выход пластеина составил 44%. Виланд и сотр. [2530] и Детерманн и сотр. [591, 592] выделили гомогенные пластеин-активные пептиды из пептона Витте, заложив тем самым основы для детального изучения пластеиновой реакции. Сведения, необходимые для развертывания синтетических исследований в этой области, получены после установления строения этих пептидов. Ферментативными методами (гидролизом аминопептидазой или карбоксипептидазой, а также частичным гидролизом химотрипсином) было показано, что пластеин-активные пептиды имеют следующее строение [c.394]

Трипсин количественно гидролизовал связь Аг -УаР, а химотрипсин — связь Туг -Уа1 . Карбоксипептидаза отщепила только С-концевой остаток фенилаланина, а лейцинаминопептидаза (свободная от пролидазы) — первые пять аминокислот. В пользу ь-конфигурации пролина говорил как общий план синтеза, так и легкое расщепление связи Рго-РЬе. Конфигурация остатка гистидина в положении 6 установлена путем гидролиза химотрипсином, разделения образовавшейся смеси противоточным распределением, выделения С-концевого тетрапептида Н-Уа1-Н15-Рго-Р11е-ОН и его кислотного гидролиза. Пространственные препятствия, обусловленные наличием остатка валина (ср. [2253]), являлись причиной того, что гидролиз проходил до конца лишь в жестких условиях (64 час, 105° или 24 час, 115°К вследствие чего свободные аминокислоты подвергались частичной рацемизации. Степень рацемизации определена сравнением со смесью эквимолярного количества аминокислот, составляющих данный пептид. Как оказалось, присутствующий в смеси гистидин в условиях гидролиза рацемизуется на 8—10%. Путем разложения оксидазой ь-аминокислот установлено, что с учетом этого количества рацемата весь гистидин присутствует в ь-фор-ме. Таким образом, доказано, что синтетический пептид является а11-ь-соединением. [c.404]

Карбоксипептидаза практически нерастворима в воде и в разведенных солевых растворах. Перед использованием суспензию фермента промывают 3 или 4 раза ледяной водой. При приготовлении раствора этого фермента для определения концевых групп можно рекомендовать следующий метод [3] смешивают около 0,25 мл водной суспензии фермента с 6 мл 2М раствора хлористого натрия и постепенно доводят pH раствора до 10,0, добавляя 0,01 н. К аОН из. микробюретки. Как только фермент растворится, добавляют 0,6 мл М буферного раствора фосфата натрия pH 8,0 при этом устанавливается значение pH около 8,3. Неактивный белок, который выпадает в осадок, если оставить раствор на 2 час при 4°, отделяют центрифугированием на холоду. Концентрацию выделенного фермента можно определить спектрофотометрически на основании следующих данных [c.187]

Строение ангиотензинов I и II было установлено следующим путем. Сначала определяли их аминокислотный состав, затем полипептидные цепи этих гормонов подвергали ферментативному расщеплению действием карбоксипептидазы и химотрипсина (рис. 3). Строение пептидов, образовавшихся в результате ферментативного гидролиза, удалось установить их частичным гидролизом и ступенчатым расщеплением с помощью фенилизотиоцианата [1365, 2135, 2138]. Независимо от Скеггса Пеи -ан-гиотензин I был выделен Бампусом и сотр. [438, 440], а также Пэйджем и Бампусом [1673, 1674], причем препарат, полученный этими исследователями из частично очищенного ангиотензиногена свиньи [853], оказался идентичным Пеи -ангиотензину I, изолированному из плазмы лошади [442]. [c.37]

Самым доступным источником ЛАП служат почки свиньи [172]. Молекулярная масса этого фермента больше молекулярной массы карбоксипептидазы и составляет 200 000 [172, 173]. Описан также препарат из хрусталика быка [174, 175]. Детальное изучение ЛАП затруднено неустойчивостью фермента при выделении, присутствием сопутствующих эндопептидаз [17 , 177] и существоваштем множественных молекулярных форм [173, 178]. Ионы Мп + и Mg + стабилизируют и активируют белок, вследствие чего выделение обычно проводят в присутствии одного из этих металлов, чаще всего Mg2+. Зависимость степени активации ЛАП от концентрации Мп2+ [170] хорошо описывается кривой связывания при п=1 (число катионов на молекулу) и /Са=3,3-10 М . На основании этих данных и ингибирующего действия цитрата и ЭДТА ЛАП была недавно отнесена к Mg (Мп)-активируемым или Mg (Мп)-содержащим металлоферментам, хотя данные о наличии в ней этих металлов отсутствуют. [c.555]

Работа Бергмана и сотрудников [47] увеличила наши сведения о специфичности протеиназ, но еще многое осталось сделать в отношении их очистки и выделения. Такие ферменты, как карбоксипептидаза, аминопептидаза и протамииаза особенно пригодны для структурных исследований. Можно надеяться, что доступность кристаллической карбоксипептидазы может открыть путь для строгой проверки однородности этого фермента и затем для экспериментальной оценки специфичности его субстрата, что позволит найти этому ферменту более широкое применение. [c.220]

Кристаллическая карбоксипептидаза А, выделенная из поджелудочной железы, представляет собой одиночную полипептидную цепь, построенную из 310 аминокислотных остатков и имеющую мол. в. 34 300. N-Koh-цевая последовательность карбоксипептидазы Asp—Ser—Thr. С-Концевой аминокислотой является аспарагин рН-Оптимум для карбоксипен-тидазы А из поджелудочной железы 7,3. Молекула карбоксипептидазы А содержит один атом цинка, необходимый для проявления каталитической активности фермента. Удаление цинка с помощью комплексо-образующих средств приводит к потере протеолитической активности . Специфическими ингибиторами карбоксипептидазы А являются ароматические и гетероциклические кислоты [c.303]

В ЭТОМ фрагменте углеводная цепь присоединена к остатку аспарагиновой кислоты. Связь Туг — Asp, входящая в состав недеградированного белка, количественно расщепляется проназой-Р. Однако смесь гликопептидов, образующаяся при расщеплении белка папаином [19J, содержит связь Туг — Asp, устойчивую к действию проназы-Р [12]. Выделение гликопептидов из яичного альбумина иллюстрирует упомянутые трудности. Обработка белка проназой-Р или последовательно пепсином и трипсином вместе с химо-трипсином дает продукты, которые еще содержат различные, но относительно большие количества лейцина и меньшие количества серина и треонина. Эти аминокислоты можно удалить действием карбоксипептидазы, однако только после предварительного замещения свободной аминогруппы карбобензоксирадикалом [12, 20]. Аналогичные проблемы возникают при получении гликопептидов из других белков и, по-видимому, могут быть решены аналогичным путем. [c.241]

Трапезникова С. С., Пасхина Т. С. Выделение, очистка и свойства карбоксипептидаз (кининаз) из сыворотки крови человека и кролика, — Биохимия , 1968, т. 33, с. 1012—1022. [c.374]

Кислые слизистые выделения, азот- и фосфорсодержащие продукты распада стимулируют работу сидячих желёзок, которые начинают выделять кислоты (муравьиную, бензойную), а также протеазы и ряд других гидролаз. Довольно подробно изучена протеолитическая активность секрета у мухоловки. Большая часть протеаз из ее секрета относится к тиоловым протеазам, среди них — карбоксипептидаза, хитинолитическая активность. Кроме протеаз в секрете обнаружены кислая фосфатаза и эстераза, а у некоторых видов насекомоядных — рибонуклеаза, липаза, а также пероксидаза. [c.281]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология