ДНК, выделение с протеиназой

Порядок работы. Подготовительные операции, Выделение протеиназ. Взвешивают 4... 5 г сырых семядолей или зерновок (навеска сухого материала около 1 г), помещают в ступку, добавляют немного кварцевого песку и тщательно растирают. Приливают 5 мл дистиллированной воды и продолжают растирание до получения мелкодисперсной гомогенной кашицы. Навеску количественно переносят в мерную колбу на 50 мл, ополаскивая пестик и ступку небольшими порциями воды. Объем жидкости в колбе доводят до 50 мл, суспензию перемешивают и оставляют настаиваться в течение 1 ч (периодически перемешивая) при 2... 5 С. [c.181]

Легочная протеиназа I и реннин. Очищенная протеиназа, выделенная из легкого быка, разрывает в цепи Б окисленного инсулина те же связи, что и пепсин [67]. Синтетические субстраты для легочной протеиназы до сих пор не найдены. [c.213]

В результате исследований, проведенных на второй ступени селекции, выделены два лучших мутанта — 1226 и 2193, обла-даюш,их повышенным стабильным уровнем биосинтеза протеиназы [24]. Первый из штаммов выделен после комбинированной обработки ЭИ (1 4000) в течение 30 мин. и УФ-лучами — 5000 эрг/мм , второй — под действием НЭМ. [c.150]

Рис. 3-35. Сравнение пространственной структуры эластазы (А) и химотрипсина (Б). У этих эволюционно родственных протеиназ одинаковы лишь те аминокислоты, которые расположены в выделенных цветом участках полипептидной цепи. Тем не менее конформации белков очень похожи. Обведены активные центры ферментов оба активных центра содержат активированный остаток серина (см. рис. 3-47). Молекула химотрипсина имеет несколько (более двух) концов цепи, поскольку она образована протеолитическим расщеплением химотрипсиногена, неактивного

ЗИМОГЕНЫ (проферменты) — неактивные предшественники ферментов, превращающиеся в активные ферменты в результате структурных изменений. 3. чаще всего встречаются среди протеиназ (пепсин, ренин, трипсин, химотрипсин и карбоксипептидаза А), гидролитически расщепляющих белковые вещества в пищеварительном тракте животных. Эти ферменты вырабатываются клетками слизистой желудка, кишечника или поджелудочной железой и выделяются в желудочно-кишечный тракт в виде 3. (пепсиногона, прореннина, трипсиногена, химотрип-синогена и прокарбоксипептидазы). Такой способ образования и выделения протеиназ является приспособлением, защищающим клетки и ткани организма от самопереваривания их ферментами, вырабатываемыми в этих клетках. [c.54]

При глубинном выращивании S. griseus выделяет значительно больше протеиназ в среде с низким содержанием азота. Это, по всей вероятности, связано со специфической реакцией стрептомицета на понижение содержания усвояемых форм азота в среде. Кроме того, выделение протеиназ зависит от источника азота. В присутствии в среде белка образование протеиназ наиболее низкое, в среде с пептидами — высокое, в средах, содержащих аминокислоты, — еще выше. [c.228]

Затем Туппи подверг окисленный окситоцин гидролизу кристаллической протеиназой, выделенной Линдерштрем-Лангом (1949) из ВасИ- [c.694]

Согласно современным представлениям, биосинтез инсулина осуществляется в 3-клетках панкреатических островков из своего предшественника проинсулина, впервые выделенного Д. Стайнером в 1966 г. В настоящее время не только выяснена первичная структура проинсулина, но и осуществлен его химический сгштез (см. рис. 1.14). Проинсулин представлен одной полипептидной цепью, содержащей 84 аминокислотных остатка он лишен биологической, т.е. гормональной, активности. Местом синтеза проинсулина считается фракция микросом 3-клеток панкреатических островков превращение неактивного проинсулина в активный инсулин (наиболее существенная часть синтеза) происходит при перемещен проинсулина от рибосом к секреторным гранулам путем частичного протеолиза (отщепление с С-конца полипептидной цепи пептида, содержащего 33 аминокислотных остатка и получившего наименование соединяющего пептида, или С-пепти-да). Длина и первичная структура С-пептида подвержена большим изменениям у разных видов животных, чем последовательность цепей А и В инсулина. Установлено, что исходным предшественником инсулина является препроинсулин, содержащий, помимо проинсулина, его так называемую лидерную, или сигнальную, последовательность на N-конце, состоящую из 23 остатков аминокислот при образовании молекулы проинсулина этот сигнальный пептид отщепляется специальной пептидазой. Далее молекула проинсулина также подвергается частичному протеолизу, и под действием трипсиноподобной протеиназы отщепляются по две основные аминокислоты с N- и С-конца пептида С—соответственно дипептиды Apr—Apr и Лиз— —Apr (см. рис. 1.14). Однако природа ферментов и тонкие механизмы этого важного биологического процесса—образование активной молекулы инсулина окончательно не выяснены. [c.268]

В настоящее время ингибиторы гидролитических ферментов выделены из растений (бобов сои, семян раиса, картофеля, ржи, пщеницы, гречихи, черной и обыкновенной фасоли, зеленых листьев некоторых трав) или синтезированы [127, 128, 137] при приеме отмечено регулирующее влияние на секрецию панкреатических ферментов у людей [139]. Однако в клинической практике основными остаются ингибиторы протеиназ, выделенные из животного сырья (контрикал, тразилол, ини-прол), либо синтетические (аминокаироновая кислота). Номенклатура препаратов на основе ингибиторов протеиназ приведена в таб. 4. [c.236]

Для разрушения пептидной части гликопротеинов широко применяется протеолиз, особенно часто под действием проназы (обычно из 81гер1от св5 г15тч), которая является набором мощных протеиназ, способных разрушать пептидные цепи, устойчивые к другим протеолитиче-ским ферментам. Часто употребляются также трипсин, химотрипсин, па-паин. Гидролизат, полученный после обработки протеиназами, подвергают фракционированию с применением диализа, гель-фильтрации и хроматографии (см., например, ), выделяя один или несколько низкомолекулярных гликопептидов, структуру которых устанавливают обычными методами и иногда подтверждают встречным синтезом. Впервые гидролиз гликопротеина трипсином был применен Нейбергером для выделения фрагмента овальбумина, содержащего узел связи олигосахаридной и пептидной части молекулы в дальнейшем для этой же цели использовали также химотрипсин, пепсин и другие фepмeнты " . . Протеолиз проназой очень широко применялся при выделении узловых фрагментов из 7-глобулина , тиреоглобулина фибриногена и особенно му- [c.571]

При обработке овальбумина различными протеиназами выделен ряд гликопептидов, который позволил установить последовательность аминокислот вблизи узловой гликопептидной связи С другой стороны, действием проназы получен гликопептид, содержаш,ий только аспарагиновую кислоту и неизменную олигосахаридиую цепь, полная структура которой была выяснена метилированием и периодатным окислением . На основании всех этих данных фрагмент структуры овальбумина вблизи гликопептидной связи может быть изображен следующим образом [c.576]

Протеиназы выспшх растений. Протеиназы, выделенные из растительных клеток, в больщинстве случаев относятся к сульфгидрильному типу, активируются цистеином, глутатионом и другими восстановителями. Оптимальная зона их действия находится при слабокислом, нейтральном и слабощелочном значениях pH и во многом зависит от природы субстрата. Типичный представитель — папаин из сока плодов дынного дерева ari a papaya). Папаин проявляет широкую субстратную специфичность — катализирует гидролиз пептидов, амидов, эфиров и тиоэфиров. Значительно реже встречаются растительные протеиназы, не активируемые восстановителями. Протеиназы насекомоядных растений, например росянки, имеют резко кислый оптимум pH (3—3,5). [c.370]

В качестве примеров можно привести определение кокарбоксилазы в крови при помощи протеиназы Asp. niger, расщепляющей ее с выделением тиашща. По количеству свободного тиамина рассчитывают количество фермента. [c.63]

Из отечественных щелочных протеиназ наиболее перспективным для производства СМС является протосубтилин ГЮХ. Ферлюнтный препарат получают при глубинном культивировании Вас. 5иЬ11Н5 штамм 12 на питательной среде, содержа-шей картофельный крахмал, кукурузную муку, кукурузный экстракт и минеральные соли. Препарат, выделенный из фильтрата культуральной жидкости путем осаждения этиловым спиртом, подвергают распылительной сушке. Грануляцию энзима осуществляют на японской установке, состоящей из экструдера и марумеризатора. [c.93]

Превращение триисиноген -> трипсин осуществляется проще, чем соответствующее превращение химотрипсиногена, поскольку здесь образуется только один продукт. Активация может катализироваться как самим трипсином, так и ферментом энтерокиназой, а также некоторыми протеиназами, выделенными из плесеней. При активации происходит отщепление от полипептидной цепи N-концевого гексапептида, как это схематически показано на фиг. 125. Важную роль в процессе активации играет ион кальция, специфически ускоряющий расщепление по определенной пептидной связи и одновременно тормозящий разрыв связей в других местах (при расщеплении [c.427]

Для мягчения (тендеризации) мясных продуктов раньше использовали животные ферменты (из поджелудочной железы), а в последнее время протеиназы растительного происхождения — папаин, бромелаин, фицин. Несмотря на то что протеиназы растений имеют ряд преимуществ, даже их препараты постепенно заменяются микробными. Это происходит по различным причинам. Например, в СССР источники для выделения растительных протеаз (дынное дерево, ананас или деревья рода Fi us) практически отсутствуют. [c.8]

Протеолитический фермент, выделенный из культуральной жидкости актиномицета Streptomy es griseus (препарат проназа), способен расщеплять 80—90% связей, имеющихся в молекулах белков, и обладает, несомненно, наиболее широкой специфичностью среди всех известных протеиназ. Он наиболее пригоден для процесса мягчения, и в последнее время его начали применять для тендеризации различных продуктов. В Институте биохимии Академии наук УССР мы разработали новый, очень простой способ производства препаратов типа проназы. Для мягчения, например, мясных продуктов достаточно брать 1—2 г препарата на литр раствора. Если порции сырого мяса продержать в таком растворе 15—20 мин при температуре 30°С, то оно после этого сварится в воде за 30—40 мин необработанное же мясо — за 2—2,5 ч. Ферментированный бифштекс может быть изжарен до [c.294]

Используются в медицине ингибиторы протеиназ, в частности плазмина и трипсина. Если плазминоген крови активируется слишком интенсивно и в ней возникает слишком много плазмина, то при этом сильнодействующий фермент разрушит и фибриноген, и другие факторы из системы свертывания крови. При этом свертываемость крови сильно снижается и это часто является причиной обескровливания больных. Синтетический ингибитор — е-аминокапроновая кислота — тормозит активацию плазминогена в плазмин, а при более высоких концентрациях — и действие плаз.мина, предотвращая этим опасные изменения. Так называемый фактор Кунитца и Нортропа (инипрол) тормозит действие трипсина и химотрипсина. Он представляет собой полипептид (М = 6000) и используется при избыточном выделении ферментов, которое встречается при острых панкреатитах (заболеваниях поджелудочной железы, вырабатывающей целый ряд ферментов). Ингибиторы подобного рода защищают организм от ферментной интоксикации. [c.321]

К другим важным протеиназам растений относятся бромелаин — фермент, найденный в плодах ананаса, а также фицин, выделенный из млечного сока различных видов Fi us. Оба этих фермента, подобно папаину, активируются восстановителями. [c.202]

Для выяснения положения амидных групп аспарагина и глутамина было проведено дополнительное ферментативное расщепление фракций А и В папаином и плесневой протеиназой. В выделенных пептидах положение амидных групп определялось по относительной ионофоретической подвижности пептидов и путем определения амидного азота [387, 389]. [c.134]

Работа Бергмана и сотрудников [47] увеличила наши сведения о специфичности протеиназ, но еще многое осталось сделать в отношении их очистки и выделения. Такие ферменты, как карбоксипептидаза, аминопептидаза и протамииаза особенно пригодны для структурных исследований. Можно надеяться, что доступность кристаллической карбоксипептидазы может открыть путь для строгой проверки однородности этого фермента и затем для экспериментальной оценки специфичности его субстрата, что позволит найти этому ферменту более широкое применение. [c.220]

Альтернативные методы скрининга космидных библиотек, описанные в гл. 3, предполагают селекцию космидных клонов с использованием феномена гомологичной рекомбинации in vivo. Остальные главы книги посвящены вопросам, связанным с экспрессией клонированных генов. Для многих белков млекопитающих удалось осуществить высокопродуктивную внутриклеточную экспрессию в Е. oli. Однако гетерологические белки, локализующиеся в цитоплазме, часто образуют трудно растворимые агрегаты, что значительно осложняет получение нативного продукта. В гл. 4 описаны эффективные способы выделения активных растворимых продуктов из нерастворимых белков цитоплазмы Е. соИ. Вероятность деградации специфическими бактериальными протеиназами многих эукариотических белков, синтезируемых в Е. oli, может быть существенно снижена, если их экспрессировать в виде гибридных белков. Такие составные белки, в которых бактериальный компонент обычно представлен -галактозидазой, можно использовать в качестве иммуногенов для получения антисыворотки и моноклональных антител к клонированному эукариотическому белковому домену. Эти вопросы >ассматриваются в двух главах — одна посвящена получению поликлональной антисыворотки, а другая — методам гибридной технологии. В последующих главах книги описаны современные эукариотические экспрессирующие системы в гл. 7 — дрожжевая, далее в трех главах — системы на основе культивируемых клеток млекопитающих и трансгенные животные. В частности, описана система экспрессии с использованием векторов, которые несут гены, обеспечивающие возможность их индуцибельной амплификации это позволяет снимать токсическое действие антибиотиков, введенных в культуральную среду. Клонированные в таком векторе гены также [c.8]

Смотреть страницы где упоминается термин ДНК, выделение с протеиназой: [c.221] [c.143] [c.54] [c.51] [c.238] [c.393] [c.577] [c.45] [c.76] [c.623] [c.137] [c.178] [c.426] [c.126] [c.148] [c.200] [c.279] [c.300] [c.332] [c.20] [c.24] [c.146] [c.109] [c.96]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология