Осаждение белков

АЗОТ ОСТАТОЧНЫЙ — азот веществ, остающихся в крови или в экстрактах тканей человека после осаждения белков. Повышение содержания А. о. в крови наблюдается при заболеваниях почек, печени, злокачественных опухолях, туберкулезе и т. д. А. о. определяют методами химического анализа крови. [c.10]

Растворение и осаждение белков, денатурация белков, цветные реакции белков и др. [c.167]

Осаждение белков из растворов. При добавлении к водным растворам белков концентрированных растворов минеральных солей (например, сернокислого аммония) белки осаждаются высаливаются). Осаждение их происходит и при добавлении органических растворителей (спирта, ацетона). Во всех этих случаях белки не изменяют своих свойств и при разбавлении водой вновь переходят в раствор. [c.296]

Другие реагенты — соли тяжелых металлов (сернокислая медь, уксуснокислый свинец), а также кислоты (азотная, уксусная, трихлоруксусная, пикриновая) вызывают необратимое осаждение белков под их воздействием происходит значительное изменение свойств денатурация) белков, и они после осаждения теряют способность растворяться в воде и в разбавленных солевых растворах. [c.296]

Наибольшую склонность к осаждению белки проявляют в изоэлектрической точке. Высаливание и свертывание различных белков достигается при определенных для каждого из них значениях pH. [c.296]

Опыт 153. Осаждение белка танином [c.140]

Под влиянием высокой и низкой температуры, при действии высококонцентрированных кислот и щелочей, дубильных веществ, лучистой энергии, ультразвука, механического воздействия, высокого давления происходит специфическое необратимое осаждение белков, которое называется денатурацией. [c.369]

Добавление каких из указанных веществ вызывает обратимое осаждение белков [c.667]

Удобен следующий прием медленного добавления сульфата аммония при изоэлектрическом высаливании белков в забуференный рас твор белка опускают целлофановый мешочек с твердым сульфатом аммония, электролит диффундирует через мембрану и вызывает осаждение белка. Осадок белка, содержащий неорганическую соль, диали-зуют (дистиллированная вода) сульфат аммония удаляется и белок переходит в раствор. Для переосаждения используют описанный выше прием. Кристаллизации белка можно достичь после подходящего числа повторений этого процесса. Другой удобный метод переосаждения и иногда кристаллизации — добавление этилового спирта к раствору белка в изоэлектрической точке и охлаждение. [c.689]

Определение проводят после осаждения белков щелочным раствором цинка [c.19]

Ввиду того что сернокислый цинк и щ елочь частично ингибируют глюкозооксидазу, для построения стандартного графика к 0,1 мл раствора глюкозы приливают хлористый натрий, сернокислый цинк и едкий натр в тех же количествах, которые использовались для осаждения белков крови. После центрифугирования отбирают из стандартных проб по 1 мл раствора и добавляют по 3 мл рабочего реактива. Стандартный график строят для каждой серии определений. [c.20]

Осаждение белков гидратом окиси цинка в щелочной среде. [c.22]

Для определения глюкозо-6-фосфата энзиматическим методом при осаждении белков используют 0,5 н. раствор хлорной кислоты. Из безбелкового раствора хлорную кислоту удаляют в виде перхлората калия (с. 29). Надосадочную жидкость используют для определения глюкозо-б-фосфата (с. 40). [c.66]

В связи с этим при построении калибровочного графика для определения белка по Лоури в растворитель для стандартного белка необходимо включать все компоненты, содержащиеся в анализируемых пробах. В некоторых случаях целесообразно предварительное осаждение белков из растворов, например трихлоруксусной кислотой, с последующим растворением их в щелочных растворах, или очистка белковых растворов от низкомолекулярных компонентов путем диализа или гель-фильтрации на сефадексе G-25. [c.81]

Осаждение белков спиртом. Навеску (2—3 г) измельченной ножницами на холоде ткани переносят в гомогенизатор с 5 объемами охлажденного 96%-ного этанола гомогенат сливают в центрифужный стакан, оставляют при комнатной температуре на 20 мин, затем центрифугируют 10 мин при 3000 Надосадочную жидкость сливают в колбу с узким горлом (при обработке 2—3 г мышц объем колбы 200 мл, при получении экстракта из большой навески можно пользоваться делительной воронкой), осадок трижды промывают 15 мл [c.191]

Осаждение белков при изменении pH [c.199]

При наличии в растворе нейтральных солей требуется более высокая концентрация органического растворителя для осаждения белка, что нежелательно. Не рекомендуется, однако, полностью удалять соли, так как в этом случае затрудняется последующее отделение выпавшего осадка На эффективность фракционирования влияет и pH [c.201]

Активность иммобилизованных ферментов можно определить практически всеми известными методами (непрерывными и периодическими, спектрофотометрическими, рН-метрическим, флуоресцентными, химическими и др.). При работе с иммобилизованными ферментами не-> обходимо постоянно перемешивать реакционную смесь в процессе из--мерения активности, так как в противном случае по мере оседания частиц носителя активность будет уменьшаться. При определении активности ферментов методом отбора проб обычное осаждение белка (например, трихлоруксусной кислотой) в случае иммобилизованных препаратов можно заменить отделением фермента фильтрованием или центрифугированием. [c.298]

Л. 6 выделяют из микросом путем центрифугирования клеточного гомогената при ускорении 105 000 g с послед, осаждением белков сульфатом аммония. Индивидуальные белки получают фракционированием с помощью хроматографии (в т. ч на гелях агарозы, содержащих ковалентно иммобилизованные фосфолипиды, и гель-фильтрацией на сефадексе), а также изоэлектрич. фокусированием в градиенте pH. Активность Л. б. определяют по перераспределению метки (изотопной, спиновой или флуоресцентной см. Липидные зонды) между донорными мембранами, содержащими меченые липиды, и немечеными акцепторными мембранами. [c.598]

См. также Осаждение белков 1/559 бесструктурная 2/816 гравитационная 4/282, 285 и коагуляция 2/816 и молекулярная масса полимеров 3/218,219 и молекулярно-массовое распределение 3/221 и устойчивость систем 2/154, 155, [c.705]

Реакции осаждения белков бывают обратимыми и необратимыми. [c.19]

С фильтратом проделывают биуретовую реакци о. Кс-ли произошло полное осаждение белков, она должна быть отрицательной. [c.20]

Осаждение белков органическими кислотами. Органические кислоты необратимо осаждают белок из растворов. Различные кислоты отличаются по силе действия. [c.23]

Осаждение белков солями тяжелых металлов. Белки осаждаются солями меди, свинца, ртути, цинка, сереб])а и дру их тяжелых металлов. [c.24]

Депротеинизация достигается также добавлением сульфата аммония и некоторых органических растворителей [23]. Основная опасность здесь заключается в возможности адсорбции или окклюзии следовых компонентов осадком. Эффективность операции нужно конфолировать в отношении биоматериала и определяемых веществ. Обычно влияние окклюзии сводят к минимуму не добавлением осаждающих агентов к пробе, а наоборот [24]. В последнее время для осаждения белков все чаще применяют ацетонитрил, особенно удобный в тех случаях, когда раствор далее анализируют методом ВЭЖХ Для предотвращения разложения белков следует избегать нафевания, либо использовать мягкие условия их разрушения с помощью ферментов [25]. С этой целью используют трипсин, папаини другие протеиназы. Ткани печени гидролизуют алкалазой, а [c.204]

При анализе содержания в физиологических жидкостях свободных аминокислот встает задача предварительной полной очистки их от белков. Для малых объемов плазмы (5—25 мкл) была описана элегантная методика осаждения белка холодным (—30°) ацетоном в капилляре (100 X 0,6 мм) с последующим центрифугированием в нем же, после чего кончик капилляра с осадком белка просто обламывали [Arola et al., 1977]. [c.483]

Осаждение белков гидратом окиси кадмия в щелочной среде. В четыре пробирки наливают по 2 мл ISO4. В дн из них микропипеткой вносят по 0,1 мл крови и микропипетку про ывают два раза той же жидкостью В другие пробирки вносят по 0,1 мл дистиллированной воды (контроль). Через 5 мин во все пробы приливают по 1 мл разведенного в 4 раза 1,1 н. раствора NaOH и нагревают 3 мин на кипя- [c.22]

Осаждение белков из исследуемого раствора проводят на холоде равным объемом 5%-ного раствора I3 OOH (или H IO4). Осадок белка сразу удаляют фильтрованием или центрифугированием. Из безбелкового раствора быстро отбирают пробу и вносят в 1,5-кратный объем магнезиальной смеси, предварительно налитой в пробирки, стоящие во льду. Проверяют реакцию среды, добавляя в пробы по капле фенолфталеина. Реакция среды должна быть щелочной (розовое окра-щивание с фенолфталеином). После тщательного перемешивания пробирки оставляют во льду на 30—40 мин, периодически их встряхивая. Образовавшийся осадок аммониевомагниевой соли фосфорной кислоты удаляют фильтрованием. [c.38]

В случае предварительного осаждения белка к исследуемому раствору добавляют I3 OOH из такого расчета, чтобы конечная концентрация ее была равна 3—4%. Раствор тщательно перемешивают и оставляют на 10—20 мин. Выпавший осадок белка отделяют центрифугированием и промывают 2%-ным раствором I3 OOH. К осадку добавляют 1—2 мл 1 н. раствора щелочи и осторожно подогревают до растворения осадка белка. Раствор белка количественно переносят в мерную колбу на 25—50 мл, доводят водой до метки, тщательно перемешивают и проводят определение белка. [c.82]

Гель-фильтрация. Готовят колонку (20x40 см), заполненную сефадексом 0-75 и уравновешенную 0,1 М сульфатом аммония, содержащим 1 мМ ЭДТА и 1 мМ дитиотреитол, pH 6,0. На колонку наносят около 2 мл раствора белка и пропускают раствор, используемый для уравновешивания колонки. Анализируют фракции элюата, определяя в них содержание белка и активность фермента. Собирают и объединяют фракции, содержащие наибольшее количество активного белка. Гель-фильтрацию можно повторить на той же колонке с новыми порциями раствора белка. Объединенные элюаты концентрируют путем осаждения белка сульфатом аммония (конечная концентрация — [c.262]

Видеин-3 является искусственным комплексом витамина Оз с казеином [65]. Применяется для профилактики и лечения рахита у детей, а также для витаминизации продуктов детского питания. Препарат обладает большей антирахитической активностью по сравнению с другими препаратами витамина В [66—69]. Метод получения видеина основан на совмещении процесса осаждения белка в момент изоэлектрического его состояния с процессом образования коллоидного раствора витамина Од, происходящего в результате замены растворителя. Витамин Од применяется в виде кристаллического комплекса его с холестерином, названного авторами ви-дехолом. [c.312]

Содержимое пробирок отфильтровывают через бумажные фильтры. В фильтратах—альбумины. Фильтраты подкисляют 17о-ным раствором уксусной кислоты — пояиляются осадки альбуминов. Их отфилмровыиают, а в фильтратах с помоп ыо биуретовой реакции доказывают отсутствие белка. Осаждение белков путем высаливания применяется в промышленности. [c.21]

Осаждение белков спиртом обратимо при условии, если нродесс проводили бс з нагренапия и воздействие реагента было кратковременным. Продолжительный контакт белка со спиртом ведет к необратимому осаждению, денатурации. [c.21]

Пи скорость и интенсивность процесса теплоиой денатурации оказывают большое влияние рП раствора и добавление электролитов. Быстро и наиболее полно белки свертываются в изоэлектрической точке. Сдвиги рИ в кислую и щелочную стороны затормаживают процесс осаждения белков. В сильно кислых и сильно н елочных растворах осаждения белков при кипячении практически ие происходит. При добавлении кислот молекулы белка заряжаются положительно, в щелочных растворах они приобретают отрицательные заряды. [c.22]

Осаждение белков минеральными кислотами. Концентрированные минеральные кислоты (ааотнан, серная, соляная) ы.1 , 11шают резкую дегидратацию белковых частиц и нейтрализацию их заряда, при этом происходит обра ование комплексных соединений. Все это иедет к необратимой денатурации белка. Ортофосфорная кислота не образует осадкой с белками. [c.23]

Колбу охлаждают и к вытяжке добавляют 7 -15 мл раствора уксуснокислого свинца, взбалтывают и ставят и а 5—10 мин. (для осаждения белков, пигментов, дубильных ве1пеств, также обладающих восстанавливающими свойствами). Появление прозрачного слоя жидкости над осадком свидетельствует о полноте осаждения. Если пол- [c.220]

Спустя точно 15 мпи (срок гидролиза крахмала под действием кнслоты) колбу вынимают нз банп, быстро приливают в нее столько холодной дистиллированной воды, чтобы до мерной черты оставался объем в пределах ие более 10—15 мл. Содержимое колбы охлаждают до температуры 20°С. Затем в колбу приливают реактивы для осаждения белков и осветления раствора. Для осветления обычно используют молибдат аммоиня (6 мл 2,5%-иого раствора) нлн сульфат цннка (прн анализе пшеницы). [c.273]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология