Осаждение белка органическими кислотами

Осаждение белков органическими кислотами. Органические кислоты необратимо осаждают белок из растворов. Различные кислоты отличаются по силе действия. [c.23]

VI. Осаждение белков органическими кислотами [c.27]

Выделение белков из клеток растений очень сложно и обычно заключается прежде всего в экстрагировании их изучаемого материала соответствующими растворителями. Как увидим дальше, отдельные группы белков растворимы в различных растворителях, и для их экстракции из растений в качестве растворителей используют воду, растворы солей, спирта, кислот и щелочей. Экстрагированные белки могут быть осаждены из растворов различными реактивами. В качестве осадителей белков используются органические растворители — спирт, ацетон концентрированные растворы минеральных солей, чаще всего растворы сульфата аммония кислоты — трихлоруксусная, фосфорновольфрамовая, пикриновая дубильные вещества, например таннин соли тяжелых металлов — ртути, меди, свинца. После осаждения белки отмывают и высушивают. [c.212]

Работа № 20 Осаждение белка некоторыми органическими кислотами [c.42]

Существующие методы осаждения белка можно разделить на методы обратимого осаждения и методы, применение которых ведет к разрушению пространственной структуры белковых молекул. При высаливании белков, осаждении их спиртом и ацетоном на холоду получаются осадки, которые можно затем вновь растворить без потери биологических свойств белка. При осаждении кипячением, минеральными и органическими кислотами, солями некоторых тяжелых металлов белки теряют свои биологические свойства. [c.61]

Из сильных органических кислот для осаждения белков часто применяют трихлоруксусную (см. табл. 5 в опыте 75) и 5-сульфосалициловую кислоты. [c.319]

В качестве примера высокоэффективного метода фракционирования при помощи органического растворителя можно привести метод фракционирования белков плазмы крови человека. Разделение основано на применении последовательно различных концентраций этанола, различных буферов, обеспечивающих на каждом отдельном этапе необходимую (различную) ионную силу и ионный состав. В составе буферов использовались ацетат натрия, глицин, цитрат натрия, ацетаты цинка, бария, уксусная, лимонная кислоты, компоненты фосфатного буфера. Осаждение вели при температурах —5°, —6—7°С, в различных зонах pH, примерно от 5,5 до 6,7. Точное выполнение условий pH, ионной силы и температуры имеет в этом сложном методе решающее значение. [c.146]

Осаждение белков органическими веществами органическими кислотами к 5 каплям раствора белка добавить 2 капл раствора сульфосалициловой кислоты. Выпадает осадок белка. К 5 каплям раствора белка добавить 2 капли раствора трихлоруксусной кислоты. Выпадает осадок белка [c.31]

Работа 46. Осаждение белка органическими кислотами [c.66]

Растворимость биополимеров в воде в значительной мере определяется их способностью к гидратации. У глобулярных водорастворимых белков высокий уровень гидратации обеспечивается предпочтительным расположением на их поверхности гидрофильных групп. У нуклеиновых кислот важным фактором, способствующим гидратации, является наличие в нейтральной и щелочной среде отрицательно заряженных остатков фосфорной кислоты. Добавление органических растворителей понижает степень гидратации и приводит к осаждению гидрофильных биополимеров. Так, для осаждения белков используется добавление к их водным растворам ацетона. Нуклеиновые кислоты осаждаются добавлением этанола. [c.233]

Полученные сапониновые фракции очищают повторным пере осаждением, что, однако, не приводит к полной очистке от полярных onyт твyюш x веществ неорганических примесей, моно-и олигосахаридов, гликозидов других классов, органических кислот и др. Ряд методов основан иа способности сапонинов образовывать нерастворимые в воде или водном спирте соли с гидр01жи-дом бария или ацетатом свинца и комплексы с холестерином, танинами, белками. Соли затем разлагают угольной или серной кислотами холестериновые комплексы — извлечением холестерина бензолом, толуолом, этиловым эфиром или пиридином таниновые — кипячением с водной суспензией оксида ципка белковые — извлечением гликозидов подходящими органическими растворителями. [c.45]

Одной из самых важных и трудных стадий в исследовании полисахаридов является их очистка и фракционирование с целью получения более или менее однородных индивидуальных веществ. До настоящего времени разделение проводилось главным образом фракционным осаждением производных полисахаридов в органических растворителях или избирательным осаждением из водных растворов различными электролитами [1, 2]. Из-за отсутствия подходящих адсорбентов хроматография полисахаридов не достигла больших успехов. Введение в практику Соберем и сотр. [3, 4] ионообменников на основе целлюлозы для колоночной хроматографии белков и нуклеиновых кислот привело к появлению новых адсорбентов, весьма удобных для разделения высокомолекулярных растворимых в воде веществ. [c.268]

При добавлении к раствору белка трихлоруксусной или сульфосалициловой кислоты белок выпадает в осадок. Реакции осаждения белка органическими кислотами получили широкое практическое применение. Так, трихлоруксусная кислота применяется в микрохимических количественных анализах для получения безбелковых фильтратов сульфосали-г диловая кислота широко используется в клинических лабораториях для обнаружения белка в моче, экссудатах и других биологических жидкостях (чувствительность реакции 0,0015%). [c.42]

Щавелевая кислота. Основным химическим методом определения щавелевой кислоты является метод, основанный на осаждении ее хлористым кальцием, с последующим отделением осадка оксалата кальция, растворением его в серной кислоте и титровании перманганатом [2, 4, 6, 7, И]. При этом для устранения влияния других органических кислот, в том числе винной, добавляют борную кислоту. Большие количества белка в продукте удаляют солями цинка [11]. [c.222]

Предположению о существенном вкладе гидрофобных взаимодействий в поддержание нативной структуры противоречит факт чрезвычайной устойчивости альбуминов к действию органических растворителей после осаждения сывороточных белков трихлоруксусной кислотой, экстракции этанолом или ацетоном и последующего диализа против воды удается выделить сывороточный альбумин с сохранением нативной структуры, что доказано химическими, иммунологическими и биохимическими методами анализа [38, с. 215]. [c.549]

При 50%-ной концентрации растворителя в растворе, вероятно, останутся только белки с молекулярной массой менее 15000. Осаждению кислых белков способствует присутствие в растворе ионов двухвалентных металлов, таких, как магний у образовавшихся магний-белковых комплексов величина суммарного заряда меньше, что облегчает агрегацию. Наоборот, изменение pH в сторону изоэлектрической точки может привести к осаждению белка и без увеличения концентрации органического растворителя. Следует отметить, что значение pH, измеренное с помощью электрода, стандартизованного по водному буферу, обычно повышается по мере повышения концентрации органического растворителя. Это объясняется просто тем, что диссоциация кислоты складывается из двух процессов [c.80]

Метод определения основан на осаждении хлора азотнокислым серебром в присутствии азотной кислоты. Избыток азотнокислого серебра оттитровывают роданистым аммонием в присутствии железоаммиачных квасцов, являющихся индикатором. Помимо солей, в крови содержится много органических веществ (белки, углеводы, жиры и др.), которые могут осаждаться, образуя соединения с серебром, а в некоторых случаях восстанавливать его до металла. Поэтому определение хлора в присутствии органических веществ крови вести нельзя и их удаляют окислением (путем нагревания с марганцовокислым калием). Органические вещества при этом окисляются до углекислоты и воды, а марганцовокислый калий восстанавливается частью до двухвалентного марганца, частью— до темнобурой перекиси марганца. Избыток перекиси марганца восстанавливают до солей двухвалентного марганца при помощи глюкозы, которая не мешает определению. Реакции осаждения хлора и титрования избытка азотнокислого серебра идут по следующим уравнениям [c.247]

Растворы белков имеют коллоидный характер и могут быть очищены диализом. Из растворов белки легко осаждаются органическими водорастворимыми растворителями (спиртом, ацетоном), растворами солей, особенно солей тяжелых металлов (Си, РЬ, Hg, Ре и др.), кислотами и т. д. Осаждением растворами солей различной концентрации белки могут быть очищены и разделены. При осаждении некоторые белки меняют структуру и переходят в нерастворимое состояние. Этот процесс называется денатурацией. Денатурация наступает для многих белков и при нагревании. [c.334]

Многие белки растворимы в воде, в разбавленных растворах солей, в кислотах. Почти все белки растворяются в ш,елочах, и все они нерастворимы в органических растворителях. Растворы белков имеют коллоидный характер и могут быть очищены диализом. Из растворов белки легко осаждаются органическими водорастворимыми растворителями (спиртом, ацетоном), растворами солей, особенно солей тяжелых металлов (Си, РЬ, Hg, Ре и др.), кислотами и т. д. Осаждением растворами солей различной концентрации белки могут быть очищены и разделены. При осаждении некоторые белки меняют конформацию цепей и переходят в нерастворимое состояние. Этот процесс называется денатурацией. Денатурация многих белков может быть вызвана и нагреванием. [c.506]

Реакции осаждения белков широко применяются для удаления нежелательных белков из биологических жидкостей, используемых для анализа других компонентов (дефекация). Белки осаждаются из растворов солями многих тяжелых металлов (Си, РЬ, Hg, Ге, иО ), некоторыми органическими кислотами (трихлоруксусной, сульфосалициловой, пикриновой), коллоидными соединениями (вольфрамовой кислотой, таннином, гидроокисью железа) и некоторыми комплексными неорганическими кислотами (фосфомолибденовой, фосфовольфрамовой, железосинеродистой). В большинство случаев эти реактивы вызывают также необратимую денатурацию белка. [c.442]

При необратимом осаждении происходит глубокая денатурация белка, он теряет свойства гидрофильности и СТЙ1ЮВИТСЯ гидрофобным. Денатурированный белок неспособен к восстановлению своих первоначальных физико-химических и биологических свойств. Необратимое осаждение вызывается высокой температурой, действием концентрированных минеральных и некоторых органических кислот, ионов тяжелых металлов, алкалоидных реактивов, детергентов, красителей. [c.19]

Связи первого типа образуются между белками и ионами, как органическими, так и неорганическими. Уже сравнительно давно известно, что с некоторыми органическими кислотами, например с пикриновой, трихлоруксусной или сульфосалициловой кислотами, белки образуют прочные нерастворимые соединения. Анализ осадков, полученных при осаждении белков метафосфорной кислотой, показал, что количество метафосфата в осадке эквивалентно числу аминных групп в осажденном белке [3]. Это означает, что отрицательные метафосфатные ионы соединяются с положительно заряженными аммонийными группами белков. [c.218]

Белки, осаждение — потеря белком растюримости, происходящая в результате сближения отдельных могГекул, потери стабилизации, их взаимодействия в образованием надмолекулярных агрегатов, теряющих способность находиться в растворенном состоянии. Белок осаждается при повышении температуры до 45—50 С( при действии ионов тяжелых металлов, органических растворителей, кислот, солей. Дестабилизация белковых молекул является результатом влияний, меняющих варяженность поверхностных групп, разрушающих гидратную оболочку, что в целом и снижает гидро-фильность молекул. Осаждение белка может быть обратимым. [c.14]

Органические кислоты вызывают необратимое осаждение белков, чаще используют растворы трихлоруксусной и сульфосалицило-вой кислот. Сульфосалициловая кислота широко используется в клинике при обнаружении малых количеств белка в моче и других биологических жидкостях (чувствительность реакции 1 50 ООО). Кроме белков она осаждает также продукты их распада — высокомолекулярные пептоны и полипептиды. Трихлоруксусная кислота способна осаждать только белки и не осаждает продукты распада белков. В связи с этим трихлоруксусной кислотой осаждают, например, белки крови, когда хотят отделить их от высокомолекулярных пептидов. [c.28]

Некоторые органические кислоты способны осаждать белки. Сульфосалициловая и трихлоруксусная кислоты часто используются для осаждения белков при биохимических исследованиях. Однако многие глюкопротеиды не осожда-ются трихлоруксусной кислотой это свойство используют при их очистке. [c.66]

Трихлоруксусная кислота, ТХУ (Tri hlora eti a id) Органическое соединение, часто использующееся для осаждения белков и нуклеиновых кислот. [c.562]

Белки в пробе можно коагулировать, например нагреванием. Липиды, воски, парафины и другие липофильные соединения удается отделить от гидрофильных компонентов методом экстракционного разделения между фазами петролейного эфира и водных спиртов (например, 60- и 95%-ного метанола в зависимости от природы веществ) в одной делительной воронке или в нескольких, применяя метод противоточного распределения. Различные виды аминокислот (основные, кислые и нейтральные) можно предварительно разделить посредством электрофореза на бумаге или в геле. Для отделения различных органических кислот и ряда соединений типа фенолов от сахароподобных веществ пригодны даже такие старые методы, как осаждение ацетатом свинца, основным ацетатом свинца и т. п. Некоторые группы алкалоидов можно высадить из экстрактов с помощью специфических реагентов, а затем выделить их. В тех случаях, когда представляют интерес органические вещества средней полярности, можно иногда очистить пробу непосредственно на бумаге, на которой должен проводиться хроматографический анализ. Неочищенную пробу хроматографируют сначала чистым петролейным эфиром (иногда несколько раз), липиды при этом перемещаются вместе с фронтом растворителя. Далее хроматограмму сущат, после этого можно хроматографировать пробу еще раз чистой водой, если целевое вещество полностью нерастворимо в ней. Вода вымывает из пробы соли, сахара, аминокислоты и т. д., которые перемещаются вместе с фронтом элюента или вблизи него. В заключение пробу хроматографируют специально подобранным элюентом, следя при этом, чтобы фронт растворителя не продвинулся на такое же расстояние, как при предыдущих операциях по очистке. [c.88]

Полифосфорные кислоты представляют собой линейные полимеры, состоящие из чередующихся атомов фосфора и кислорода с одной свободной гидроксильной группой у каждого атома фосфора и двумя — у конечных атомов фосфора 293]. Линейные полифосфорные кислоты получаются при нагревании крепкой фосфорной кислоты, содержащей большое количество фосфорного ангидрида (более 72% Р2О5), или же при обезвоживании фосфорной кислоты при 350° С [294, 295]. Полифосфорные кислоты широко используются в синтетической органической химии как циклизующее средство, а также для осаждения белков [296]. [c.352]

Комплексообразование играет огромную роль в жизни растений. Многие биологически активные вещества представляют собой комплексные соединения например, хлорофилл — внутрикомплексное соединение протопорфирина с магнием. Ряд ферментов также является хелатами, в которых металлы комплексно связаны с молекулами белков. В транспортировке многих металлов по растению, вероятно, участвуют определенные естественные хе-латообразователи связывание железа в естественный хелат [5] удерживает его от осаждения фосфатами и другими соединениями в проводящих системах растения. В связи с этим вполне естествен большой интерес к возможности применения синтетических ком-плексообразователей для защиты железа и других металлов в известковых почвах от осаждения. В качестве подобных хелантов испытан ряд органических кислот — лимонная, аскорбиновая, гу-миновая, винная [6]. Однако применение их недостаточно эффективно в связи с малой устойчивостью образуемых комплексов, разрушением их микроорганизмами почвы. [c.361]

Из органических соединений, помимо давно применяемых водных растворов глицерина, широко используют (особенно для солюбилизации) слабые растворы сахарозы. На растворимость белков при экстракции большое влияние оказывает pH среды, поэтому в белковой химии применяют фосфатные, цитратные, боратные буферные смеси со значениями pH от кислых до слабощелочных, которые способствуют как растворению, так и стабилизации белков. Особенно широкое распространение получили трис-буферные системы, представляющие собой смеси 0,2 М раствора трис-(оксиметил)-аминометана (НОСН,)зСКН, (сокращенно обозначают трис ) с 0,1 М раствором хлороводородной кислоты в разных соотношениях. Для выделения белков сыворотки крови используют способы их осаждения этанолом (см. метод Кона), ацетоном, бутанолом и 1гх комбинации. Почти все органические растворители разрывают белок-липидные связи, способствуя лучшей экстракции белков. [c.24]

Однако этот взгляд был принят не без возражений. Дело в том, что белки в своей изоэлектрической точке обнаруживают минимальную растворимость [10], а хорошо известно, что растворимость органических кислот и оснований увеличивается с их ионизацией. Это правило, однако, не имеет силы для амфолитов. Осаждение белков в их изоэлектрической точке обусловлено электростатическими силами взаимного притяжения между положительно и отрицательно заряженными группами соседних цвит-терионов. Это объяснение находит известную поддержку при рассмотрении явления растворяющего действия добавленных к белку нейтральных солей. Ионы нейтральной соли в силу своего электростатического действия на ионизированные группы, расположенные на поверхности белковой частицы, предотвращают их взаимную агрегацию [11]. [c.78]

Практически бензплпенициллин получают путем биосинтеза. Процесс проводят в особых аппаратах (ферментерах), снабженных приспособлениями для продувания стерильного воздуха. Специально селекционированные плесени (обычно Peni illium hrysogenum) выращивают на жидкой среде, содержащей сахара, белки, жиры и производные фенилуксусной кислоты (предшественники). Затем саму плесень (мицелий) отфильтровывают, а из подкисленного фильтрата быстро извлекают пенициллины органическим растворителем (обычно бутилацетатом). Дальнейшую очистку пенициллина проводят путем экстракции водным раствором (рН= 7), реэкстракции органическим растворителем и осаждением в виде солей. [c.693]

Большинство белков теряют биологическую активность в присутствии сильных минеральных кислот или оснований, при нагревании и обработке ионными детергентами (амфифильными соединениями), хаотропными агентами (мочевиной, гуанидином), тяжелыми металлами (Ag, Pb, Hg) или органическими растворителями. Денатурированные белки обычно менее растворимы в воде и часто из водного раствора выпадают в осадок. Это свойство широко используется в клинической лаборатории. Пробы крови или сыворотки, взятые для анализа на содержание в них малых молекул (глюкозы, мочевой кислоты, лекарственных препаратов), сначала обрабатывают трихлоруксусной, фосфовольфрамовой или фосфомолибденовой кислотой для осаждения белка. Осадок удаляют центрифугированием, а свободную от белка надосадочную жидкость анализируют. [c.48]

Содержаиие азота, входящего в состав небелковых соединений, в зрелых семенах большинства растений составляет 5—15% общего азота, в листьях растекий — 10—30%, а в корнеплодах и клубнях картофеля —до 50% общего содержания азота. Суммарное количество небелковых азотистых соединений определяют либо по равности между содержанием общего и белкового азота, либо непосредственным сжиганием фильтрата, остающегося после осаждения белковых веществ. В последнем случае белки осаждают 5%-ной трихлоруксусной кислотой, как описано выше, фильтруют и фильтрат собирают в мерную колбу емкостью 100 мл. Раствор доводят дистиллированной водой до метки, берут 50 мл фильтрата и переносят в колбу Кьельдаля. Туда же добавляют 3—5 мл концентрированной Н2304 и содержимое очень слабо кипятят до полного испарения воды. После этого в колбу добавляют катализатор и сжигают органическое вещество до полного обесцвечивания жидкости. Затем содержимое колбы переносят количественно в мерную колбу емкостью 50 мл для отгона аммиака берут 10 мл раствора, а при малом количестве небелкового азота — 20 мл. [c.8]

Допустим, что перед исследователем стоит задача определить природу дефекта у мутантной мыщи, синтезирующей аномально низкое количество альбумина (белка, который в норме секретируется в кровь клетками печени в значительных количествах). Для этого прежде всего необходимо взять образцы ткани печени у дефектных и нормальных мыщей (последние служат в качестве контролей) и обработать клетки сильным детергентом для инактивации клеточных нуклеаз, которые в противном случае могут разрушить нуклеиновые кислоты. Затем отделяют РНК и ДНК от всех других компонентов клетки присутствующие белки при этом полностью денатурируются, их удаляют последовательной экстракпией фенолом - мощным органическим растворителем. Нуклеиновые кислоты остаются в водной фазе. Чтобы их отделить от низкомолекулярных клеточных соединений, проводят осаждение спиртом. После этого ДНК отделяют от РНК, пользуясь их различной растворимостью в спиртах и обрабатывают высокоспецифическими ферментами (соответственно РНКазой или ДНКазой), чтобы освободиться от нежелательных примесей нуклеиновых кислот. [c.239]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология