Химотрипсин Химотрипсин, димер

Кристаллический а-химотрипсин образует два типа контактов А а В с осями симметрии 2-го порядка. Контакт А намного прочнее контакта В. В растворе при значении pH кристаллов (pH 4) а-химотрипсин образует димеры. Данные, приведенные в табл. 5.5, позволяют заключить, что эти димеры скорее всего относятся к типу А. [c.123]

При выводе уравнения (VIII. 11) мы исходили из предположения, что коэффициент седиментации имеет постоянное значение. Анализ этого уравнения показывает, что случаю димеризации отвечает один пик с диффузным краем, в то время как при и > 2 образуются два пика узкий и диффузный. Эта картина аналогична, таким образом, хроматограмме для случая с нелинейной изотермой адсорбции. На фиг. 34 приведены рассчитанные шлирен-диаграммы (без учета диффузии) для а-химотрипсина, образующего димеры и гексамеры. Минимум на диаграмме, отвечающей образованию гексамеров, как можно показать при помощи методов дифференциального исчисления, соответствует величине б == п — 2)13 п— 1) = 0,267, откуда следует, что п=6. Согласно вычислениям Мэсси и др. [11], площади под пиками Р и М равны, если Р + М = 3,5 мг/мл. Тогда, если считать б = 0,267 границей первого пика, получаем, что площадь мономерного пика соответствует 1,75 мг/мл. Отсюда можно вычислить величину К, входящую в уравнение (VIII. 10). В действительности в этой условной граничной точке весовое количество мономера в 2,3 раза превышает количество полимера. [c.161]

Химотрипсин представляет собой второй протеолитический фермент поджелудочной железы. Он обладает также и способностью створаживать молоко. Свежая поджелудочная железа содержит химотрипсиноген, который был выделен в кристаллическом виде [78]. Химотрипсиноген превращается в активный фермент — химотрипсин — под действием небольших количеств трипсина 1 мг трипсина способен активировать 3 г химотрипсиногена, причем активность последнего возрастает при этом примерно в 1 ООО раз. Превращение химотрипсиногена в химотрипсин является, повидимому, очень сложным процессом, при котором образуются несколько промежуточных продуктов. Так, например, установлено, что химотрипсиноген переходит сначала в Tt-химотрипсин, затем в 8-химотрипсин. В конечном итоге из химотрипсиногена получается смесь химотрипсинов, обозначаемых буквами а, р и Y [79, 80]. Сущность процесса активации заключается, повидимому, в освобождении 4— 6 аминогрупп в каждой молекуле химотрипсиногена [82]. В результате стояния водного раствора а-химотрипсина при pH 7,6 происходит необратимое превращение его в и у-химотрипсины, которые отличаются от а-химотрипсина по форме кристаллов и по растворимости [80]. Y-Химотрипсин является димером а-химотрипсина [81]. Химотрипсин расщепляет пептидные связи, образованные карбоксильной группой тирозгша, фенилаланина, триптофана или метионина [20, 83], а также эфиры тирозина [84]. [c.293]

О пространственной структуре молекул ферментов известно пока мало. Считают, что количество спиральных участков в них невелико это было доказано методом рентгеноструктурного анализа для ряда белков, в частности яичного альбумина наиболее подробно — для лизоцима, а также для рибонуклеазы, а-химотрипсина. Сходные данные найдены и методом спектрополяри-метрии, например по Моффиту-Янгу (10—20—30%). Несомненно, что каждый ферментный белок обладает уникальной третичной структурой, где между спирализованными участками располагаются неспирализованные, количество которых велико и которые составляют значительную часть молекулы. Частицы многих ферментов состоят из нескольких (2—4) одинаковых субъединиц, связанных между собой различными способами (четвертичная структура). Часто они удерживаются вместе с помощью атомов металлов, коферментов. Разбавление во многих случаях приводит к диссоциации субъединиц, иногда же силы, связывающие их, более прочны и для этого требуется действие концентрированных растворов мочевины. Химотрипсин, например, находится в растворах чаще в виде димера, при разбавлении образуется мономер (Л1—23 000), а в концентрированных растворах содержится тример. Алкогольдегидрогеназа дрожжей при удалении из нее атомов цинка диссоциирует на четыре неактивные субъединицы (М = 36 000). [c.73]

Недавно была изучена природа этой основной субъединицы для дезоксирибонуклеиновой кислоты, выделенной из Е. oli [1771. Нуклеиновая кислота после экстрагирования и депротеинизации имела молекулярный вес 11-10 (светорассеяние). Нагревание вещества в растворе хлористого цезия снижало молекулярный вес до 5,6-10 , в то время как обработка химотрипсином (или смесями хлороформ — октиловый спирт) давала полимер с молекулярным весом 2,4-10 , который имел нормальную S-образную кривую зависимости оптической плотности от температуры с точкой перегиба при 92°. Нагревание этой последней нуклеиновой кислоты в хлористом цезии (7,7 М) понижало молекулярный вес до 1,3-10 , но при этом образовывался двуцепочечный полимер, что было показано изучением кинетики ферментативного (дезоксирибонуклеаза Н) гидролиза. В отсутствие обработки хлористым цезием тем же методом было показано наличие четырехцепочечных образцов, и, следовательно, можно было предположить, что исходная ДНК из Е. соИ представляет собой димер из параллельно связанных друг с другом двойных спиралей, причем каждая двойная спираль сохраняется незатронутой при делении клеток. Белковые связи, как, например, в агрегате с молекулярным весом 11-10 , устойчивы к нагреванию в хлористом цезии, хотя эта обработка разрывает димеризующие связи между парами оснований в двухспиральных структурах [1771. [c.559]

По ранним представлениям, в случаях, когда равновесие устанавливается быстрее, чем общая длительность ультрацентрифугирования, такая система, как пА должна давать один пик со свойствами, промежуточными между свойствами мономера и полимера. Система А В - -С должна давать два шлирен-пика, поскольку, если считать, что скорость седиментации этих компонентов падает в последовательности А, В, С, медленный пик будет соответствовать легкой молекуле С, в то время как вторая (быстрая) граница благодаря присутствию В будет отвечать также движению некоторого количества образующегося тяжелого компонента А. На деле, однако, все обстоит значительно сложнее. При седиментационном исследовании а-химотрипсина при визкой ионной силе и pH 7,9 Мэсси, Харрингтон и Хартли [11] получили странные результаты, не укладывающиеся в описанную выше простую схему. Теоретическое объяснение этих результатов было предложено Джил-бертом [12], впоследствии более подробно разработавшим свой подход к решению трудной задачи об обратимых системах, из которых центробежное поле постоянно забирает тяжелые компоненты [13, 14]. Джилберту удалось объяснить результаты Мэсси и сотрудников, исходя из системы с одним пиком для димеров и из системы с двумя пиками для гексамеров. Он вычислил долю гексамеров, совпадающую с экспериментальными данными, и точно предсказал значение 5 как функцию концентраций обоих компонентов. В своих рассуждениях [c.157]

Для циклического димера Ьуз -вазопрессина теоретически возможна параллельная или антипараллельная структура. Недавно Шэлли и Барретту [2766] удалось показать, что димеру Ьу5 -вазопрессина отвечает антипараллельная циклическая структура. С этой целью авторы провели его гидролиз химотрипсином в различных условиях, после чего разделили смесь с помощью электрофореза и установили строение образовавшихся фрагментов. [c.432]

Недавно Смит и Браун [1536] исследовали седиментацию трех приготовленных Янсеном и сотрудниками [8, 26, 141] кристаллических производных а-химотрипсина, а именно 1) фермента, ингибированного при помощи ДФФ, 2) активного окисленного фермента и 3) окисленного фермента, ингибированного обработкой ДФФ. Ранее проведенные седиментационные исследования показали, что а-химотрипсин в отличие от зимогена ведет себя как смесь мономера и димера. Исследование указанных производных было предпринято с целью определить природу детерминирующих групп. Для ДФФ-производного а-химотрипсина и активного окисленного фермента при ультрацентрифугировании были получены диаграммы, характерные для равновесия мономер — димер в необработанном ферменте. Однако после повторной обработки с помощью ДФФ и окисления получается производное, которое осаждается при рН 4,0 как мономер. Отсюда был сделан вывод, согласно которому в димеризации а-химотрипсина принимают участие несколько групп, одна из которых должна иметь ионный характер, так как указанное явление зависит от величины рН. Седиментация аналогичных производных трипсина имеет совершенно иной характер [153 в]. При ограниченной концентрации активного трипсина последний ведет себя во время седиментации подобно активному химотрипсину и ДФФ-производному а-химотрипсина, т. е. обнаруживает характерную обратимую агрегацию, зависящую от концентрации и от величины рН. Однако ДФФ-производное трипсина, так же как и трипсиноген [153г], осаждается в подобных условиях в виде мономерных частиц. [c.344]

Следует отметить, что а-химотрипсин кристаллизуется в виде димера. Обе молекулы в димере практически одинаковы в отношении конформации основной цепи. Однако конформация боковых цепей, особенно в области межмолекулярных контактов, заметно отличается. То же справедливо цри сравнении а-химотрип-сина с кристаллами мономерного 7-химотрипсина [1224,1226]. [c.77]

Во-первых, связывание специфических суОстратоподоОных ингибиторов характеризуется значительно большим отрицательным изменением энтропии, чем связывание неспецифичных ингибиторов. Во-вторых, дегидратация Ser195 или метилирование H1S57 приводит к существенному положительному изменению энтропии ассоциации, что, по-видимому, объясняется большей подвижностью лигандов в комплексах с модифицированными белками и отсутствием в таких белках индуцированных лигандами конформационных изменений [2469]. Отмечено также [3018], что связывание лигандов с мономерной формой химотрипсина значительно более эффективно, чем с димером. [c.281]

Рис. 77. Зависимость логарифмов молекулярных масс белков от их относительных подвижностей в полиакриламидных гелях разных концентраций, содержащих 0,1 % ДСН [325]. Л. 5%-ный гель. Б. 10%-ный гель. В, 15%-ный гель. 1 — пентамер БСА 2 — тетрамер БСА 3 — тример БСА 4 — у глобулин 5 — димер БСА 6 — БСА 7—овальбумин 8 — пепсин 9 — карбоксипептндаза 10 — химотрипси-ноген А 11 — трипсин 12 — вирус мозаики костра 13 — р-лактоглобулин 14 — миоглобин 15—белок вируса табачной мозаики 16 — лизоцим 17 — Р-оксиметиллизоцим 18 — РНКаза А 19 — ацетилцистамннил-РНКаза А 20 — В-цепь химотрипсина 21 — белок вируса К17 22—цитохром С 23—С цепь химотрипсина 24 — инсулин.

Идентичность структуры ферментов в растворе и в кристаллах подтверждается следующими данными. 1. Несмотря на то что некоторые ферменты были получены в кристаллическом виде из разных растворителей и в различных формах, их структура оставалась практически одинаковой (например, субтилизин [18, 19] и лизоцим [20]). 2. Ферменты, принадлежащие к одному классу, имеют сходную структуру (например, сериновые про-теазы, см. ниже). 3. При образовании димера а-химотрипсина контакт между мономерами осуществляется одними и теми же участками как в растворе, так и в составе кристалла [21, 22]. [c.26]

В мембране эритроцитов имеется анионный канал, делающий мембрану проницаемой для НСОз и С1 . Быстрый обмен этих ионов через мембрану имеет большое значение для транспорта СО2 эритроцитами. Как было показано относительно недавно, анионный канал-это димер белка, представленного при электрофорезе полосой 3 он составляет одну четверть общего количества белка в эритроцитарной мембране. Масса димера 95 кДа. Для определения локализации и ориентации белка полосы 3 использовали следующий прием интактные эритроциты, разорванные тени и вывернутые наружу мембранные везикулы подвергали протеолитическому действию химотрипсина. Результат протеолиза зависел от того, что было доступно действию химотрипсина наружная или внутренняя поверхность мембран или же обе поверхности сразу. Эти опыты показали, что белок полосы 3 локализован на обеих сторонах эритроцитарной мембраны и все молекулы белка одинаково ориентированы (рис. 10.23). Оказалось также, что углеводный компонент белка расположен на наружной поверхности. Трансмембранная локализация белка полосы 3 вполне [c.213]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология