Среды для клеточных культур

Изолированные протопласты можно культивировать. Обычно для этого используют те же среды, на которых растут изолированные клетки и ткани. Сразу же после удаления ферментов у протопластов в культуре начинается образование клеточной стенки. Протопласт, регенерировавший стенку, ведет себя как изолированная клетка, способен делиться и формировать клон клеток. Регенерация целых растений из изолированных протопластов сопряжена с рядом трудностей. Получить регенерацию через эмбриогенез удалось пока только у растений моркови. Стимуляцией последовательного образования корней и побегов (органогенез) добились регенерации растений табака, петунии и некоторых других растений. Следует отметить, что протопласты, изолированные из генетически стабильной клеточной культуры, чаще регенерируют растения и с большим успехом используются при исследованиях генетической модификации протопластов. [c.178]

Первичные клеточные культуры. Эти культуры получают непосредственно из ткани животного или человека путем разрушения протеолитическими ферментами (трипсин, коллагеназа, прона-за) межклеточного вещества. Разобщенные (диспергированные) клетки, помещенные в питательную среду, способны прикрепляться к поверхности культурального сосуда и размножаться, образуя так называемый монослой — слой толщиной в одну клетку. [c.259]

Помимо стационарного способа культивирования с регулярными пассажами, описанного выше для первичных культур, для большинства перевиваемых клеточных культур возможно применение метода суспензионных культур, при котором клетки находятся в жидкой среде во взвешенном состоянии. Модификацией данного метода является проточное культивирование, при котором в специальный аппарат (ферментер или роллерный культиватор) непрерывно добавляют свежую питательную среду и удаляют отработанную. Подобный метод позволяет в любой момент получить значительные количества клеточной массы для культивирования вирусов он применяется, как правило, в крупных лабораториях или при промышленном производстве вакцин. [c.261]

Культуральные среды делят на ростовые и поддерживающие. Для выращивания клеточных культур применяются ростовые среды, обогащенные сыворотками животных и человека, например бычья [c.261]

Среди названных в таблице 31 представителей многие нашли применение в биотехнологии (аэробные и Анаэробные виды), а ряд из них относится к числу перспективных для практического использования (метанобразующие бактерии, клеточные культуры лекарственных растений и животных) [c.275]

Из-за повышенной чувствительности животных клеток к различным внешним воздействиям важно исключить не только повреждающее действие перемешивающих систем в биореакторах, но и заметные колебания температуры, поскольку ниже 37°С клетки растут очень медленно, а выше 37°С они теряют жизнеспособность. Температурный контроль при этом осложняется тем, что скорость перемешивания среды с микроносителем малая и, следовательно, эффективность теплопередачи заметно снижается. Однако в отличие от микробных ферментаций, здесь нет проблемы с отводом тепла, образующегося в процессе метаболизма клеточной культуры. Определено, что теплоемкость должна быть 712 10 Дж/час/л культуры, содержащей 10 клеток. [c.348]

Основное применение данной системы определяется возможностью с ее помощью очистить рабочую среду от клеток, что используется главным образом при работе с клеточными культурами тканей млекопитающих [333]. [c.174]

Для получения однослойной клеточной культуры использовали минимальную концентрацию засеваемой суспензии (5-10 — 6-10 клеток на 1 мл инкубационной среды), при которой происходит формирование жизнеспособного клеточного монослоя — Таблица 32 называемого разреженного [c.68]

Интерес к распределенным моделям вызывается, с одной стороны, прикладными задачами, например, желанием получить условия наилучшей синхронизации клеточных культур. С другой стороны, представляется очень заманчивым, зная из эксперимента кривые распределения клеток по размерам, попытаться определить динамические и статистические характеристики популяции клеток — законы роста индивидуальных клеток в промежутках между делениями, вероятности деления и т. п.— и найти связь этих характеристик с условиями внешней- среды. [c.80]

Бактериологическая диагностика пневмоний, вызванных перечисленными микроорганизмами, практически не проводится, поскольку риккетсии и хламидии не растут на искусственных питательных средах. Вьщеление их на куриных эмбрионах или клеточной культуре требует длительного времени и не всегда бывает успешным. Хотя микоплазма пневмонии растет на специальных питательных средах (рис. 68), выделить ее в чистой культуре удается не всегда и не ранее чем через месяц после посева. В этой связи основным методом микробиологической диагностики данных пневмоний является серологическое исследование. [c.155]

Кроме того, медленный рост (время удвоения числа клеток 1—3 дн), длительный период выращивания (2—3 недели) в строго асептических условиях, чувствительность к механическим повреждениям, во многих случаях низкое содержание искомого продукта являются недостатками этого метода, ограничивающими его применение в промышленности. Это также предстоит преодолеть исследователям и технологам. Надо помнить, что кроме генетических подходов к созданию продуктивных, устойчивых к стрессам выращивания, быстрорастущих и быстро переходящих к синтезу продукта линий необходимо знание физиологических механизмов репрессии и активации ключевых ферментов различных путей. метаболизма. Правильное сочетание компонентов среды, двухэтапное культивирование клеток на средах для роста и для продукции (см. табл. 2) может увеличить количество продукта в клеточной культуре, полученной из растения, способного к данным синтезам. [c.27]

Для получения протопластов из суспензионных и клеточных культур наилучшей является поздняя стадия логарифмической фазы роста. В этот период клеточные .генки легче всего поддаются энзиматическому разрушению, а протопласты — наиболее жизнеспособны. Выход протопластов зависит от состава среды. Увеличение концентрации ауксина и снижение концентрации сахарозы за 1 сут перед изоляцией протопластов активировало их выход. Полагают, что эти условия влияют на состав клеточной стенки и облегчают ее энзиматическое разрушение. [c.35]

Второе направление развития Б. связано с клеточной инженерией. Культура растит, клеток может служить прежде всего источником свойственных данному растению вторичных продуктов, напр, антиаритмич. алкалоида ай-малина из раувольфин змеиной. Пользуясь способностью клеток растений превращаться на спец. средах в сформированное растение, клеточные культуры применяют для получения оезвирусных растений, пытаются проводить селекцию форм с нужными св-вами. Животные клетки более требовательны к условиям культивирования, им необходимы дорогостоящие среды. Все более широкое применение находят т. наз. гибридомы, полученные в лаборатории путем слияния двух различных клеток и служащие источником белков, необходимых для диагностики и лечения болезней человека, животных и растений. [c.290]

Для получения противотуберкулезной вакцины клеточную массу лиофилизируют, используя специальные защитные среды. Ослабленную культуру My oba terium tuber ulosis bovis лиофилизируют в среде, содержащей 7,5% сахарозы, 8% декстрина, 2% глутамата натрия и 0,01% гидроксиламина. [c.125]

Гибридомы, подобно большинству других клеточных культур животных, растут относительно медленно, не достигают высокой плотности и требуют сложных и дорогих сред. Получаемые таким образом моноклональные антитела очень дороги, что не позволяет широко использовать их в клинике. Чтобы решить эту проблему, были предприняты попытки создания своего рода биореакторов на основе генетически модифицированных бактерий, растений и животных. Для эффективной доставки и функционирования некоторых иммунотерапевтических средств зачастую достаточно одной антигенсвязывающей области антитела (Fab- или Fv-фрагмента), т. е. присутствие F -фрагмента антитела необязательно. [c.218]

Пассирование клеточных культур. Во флаконы с клетками после отсасывания питательной среды наливают подогретый до 37 °С раствор 0,25%-го трипсина или 0,02%-го версена и помещают их на 3 — 5 мин в термостат. Затем версен или трипсин удаляют, в культуральный сосуд добавляют небольшое количество питательной среды и, интенсивно взбалтывая, добиваются суспензирования клеток в питательной среде. После этого подсчитывают количе- [c.260]

Из исследуемого материала в асептических условиях готовят 10%-ю суспензию в ИХН, растворе Хенкса (pH 7,4 —7,6) или в питательных средах при заражении клеточных культур. Добавляют 0,75 — 2,0 % бычьего альбумина или 10 — 25 % нормальной кроличьей сыворотки и центрифугируют при 4 °С в течение 20 мин при 1500 — 2000 об/мин. [c.291]

Культура изолированных протопластов — выращивание протопластов на/в среде in vitro в присутствии стабилизатора. При регенерации клеточных стенок культура протопластов трансформируется в клеточную культуру. [c.495]

Т аблица51. Критерии оценки роста клеточных культур иа питательных средах [c.502]

Имеются такие штаммы животных клеток, которые могут расти и в прикрепленном состоянии, и в виде суспензии. Прикрепившиеся клетки размножаются, растут и развиваются до тех пор, пока не сольются в монослой, то есть плотность клеток выступает тормозным сигналом. Однако при смене питательной среды на новые порции наблюдается дальнейшее разрастание клеток в форме нескольких слившю ся слоев. Подобного результата можно добиться при использовании других факторов воздействия на клеточные культуры (гормоны, ферменты, pH и т. д.). Тем не менее, на практике широко пользуются монослойными культурами. [c.535]

Каковы же причины генетической нестабильности культивируемых клеток Таких причин несколько. Прежде всего — это генетическая неоднородность исходного материала (гетерогенность экспланта). У многих растений дифференцированные ткани характеризуются наличием клеток разной плоидности и лишь активно пролиферирующие в течение онтогенеза ткани, такие, как верхушечные меристемы, камбий и другие, остаются всегда диплоидными. Другой причиной может быть длительное пассирование тканевых и клеточных культур, приводящее к накоплению в них генетических изменений, в том числе к неравномерному изменению плоидности. Нарушение коррелятивных связей при изолировании участков тканей растений и помещении их на питательную среду также приводит к генетической нестабильности клеток. Подобные результаты могут быть связаны и с влиянием на генетический аппарат клетки входящих в состав питательных сред фитогормонов. В качестве гормонов в питательные среды для каллусообразования обязательно входят ауксины и цитокинины. О мутагенном действии этих веществ известно из целого ряда работ. Наиболее активным мутагенным препаратом является 2,4-Д, входящий в состав большинства питательных сред. Цитокинины, в частности кинетин, способствуют полиплоидизации клеток. [c.89]

Клетки эмбриональных тканей и тканей новорожденных используются в качестве исходного материала для выделения специфических типов клеток, которые можно исследовать биохимически либо использовать для создания клеточных культур. Многие клетки растений и животных выживают и часто способны пролиферировать в культуральной чашке при наличии питательной среды соответствующего состава. Разные типы клеток нуждаются в различных питательных веществах, в том числе в одном или нескольких белковых факторах роста. Большинство клеток животных погибает после конечного числа белений, но иногда в культуре клеток спонтанно возникают редкие варианты, способные поддерживаться бесконечно долго в виде клеточных линий. Клеточные линии можно использовать для получения клонов, которые происходят из одиночной клетки-предшественника. Так, можно выделить мутантные клетки, дефектные по одному белку. Можно осуществить слияние различных типов клеток с образованием гетерокарионов (клеток с двумя ядрами), из которых в конечном счете образуются гибридные клетки (ядра клеток которых слились воедино). Гибридные клетки можно использовать для изучения взаимодействия компонентов двух различных клеток. Кроме того, этот метод позволяет ответить на вопрос, в каких конкретно хромосомах находятся те или иные гены. [c.208]

Твердые культуры относительно свободны от мак-ромолекулярных компонентов и полностью свободны от частиц питательной среды, так как последние обычно находятся внутри агарового геля. Более того, твердые культуры относительно свободны от низкомолекулярных питательных веществ и продуктов метаболизма микроорганизмов, поскольку для их растворения необходимы значительно большие объемы среды. Следовательно, культуры, выращенные на твердой среде, особенно полезны для приготовления антигенов или для других целей, когда важна чистота клеточной суспензии. [c.363]

В вирусологической практике отмочено, что иаиболыний выход вируса в клеточной культуре происходит при росте ткапи не в покое, а при медленном ее вращении, когда для клеток происходит постоянная смена питательно среды — кислорода. Нам [c.26]

Проводя исследования на коонеративность с целью определения сроков появления монослоя на стекле, использовали различные коицептрации 5-10 , 7,5-10 1 -Ю клеток в 1 мл среды. Установлено, что в Норильске монослой образуется через 2 сут ул е из 5-10 клеток/мл среды, а в Новосибирске за то же время из той же взвеси вырастают только отдельные колонии. Этот факт еще раз подтверждает наши данные о том, что в Норильске клеточная культура росла более энергично. [c.95]

Некоторые лекарства будут ингибировать репликацию вирусов гриппа в клеточной культуре, и несколько химиотерапевтических агентов были идентифицированы [173, 177]. Однако генетические-исследования устойчивости к лекарствам почти полностью были ограничены амантадином (1-адамантанамином) и его производными [56], первоначально изученными W. Davies и соавт. [48]. Это лекарство ингибирует репликацию вируса гриппа в самой ранней стадии — перед первичной транскрипцией [252], и хотя, по всей видимости, раздевание ингибируется [115, 124], конкретно пока неясно, какая именно стадия подвергается воздействию. Аманта-дин ингибируется внутриклеточно в лизосомах, что приводит к возрастанию в них pH [172], но антивирусные свойства лекарства представляются зависимыми в большей степени от его наличия в экстраклеточной среде, чем внутри клетки [202]. [c.238]

При этом синдроме долю митозов в клеточной культуре с аномальной X-хромосомой можно увеличить удалением фолиевой кислоты. Отсюда возникли предположения о возможных патогенетических механизмах, однако исследование метаболизма фолиевой кислоты в клетках с маркером не выявило какого-либо дефекта [2237]. С другой стороны, описаны случаи довольно успешного лечения с помощью фолиевой кислоты [2202] и, более того, предложена замещающая терапия в период эмбрионального развития. Наследуемая ломкость наблюдалась и в других хромосомах больных с синдромом Мартина-Белла. Больпшнство из них также обладало чувствительностью к фолиевой кислоте. Гетерозиготность по фрагильным участкам больше распространена среди умственно отсталых, чем в общей популяции новорожденных [192]. [c.66]

ЖИВОТНЫХ ставят клеточные культуры как экспериментальную систему в один ряд с культурами микроорганизмов. Использование клеточных культур позволило в течение нескольких недель проанализировать ростовые потребности клеток человека и подтвердить результаты десятилетних исследований людей, относящихся к генетически различным популяциям, живущих в различных условиях окружающей среды (Eagle, 1955а,Ь см. разд. 2.2). [c.9]

Хотя, как указывалось выше, клеточные культуры и находили применение в иммунологии, в течение ряда лет использование этой системы осложнялось следующим обстоятельством. Клетки, синтезирующие интересующие исследователей антитела (например, клетки селезенки животных, иммунизированных специфическими антигенами), плохо росли в культуре или совсем не росли, а клетки миеломы продуцировали антитела с неизвестной специфичностью (разд. 15.4). Способность этих двух типов клеток к слиянию позволила в последнее время наладить крупномасштабное производство моноклональных антител (Kohler, Milstein, 1975). Если мышь иммунизировать неочищенным препаратом антигена и затем клетки ее селезенки гибридизовать с клетками миеломы, то среди полученных гибридных клеток найдется по крайней мере одна, продуцирующая антитела, специфические к исходному антигену. Эта клетка может быть клонирована (разд. 8.1) и трансплантирована в мышь в форме опухоли, продуцирующей высокоспецифические антитела в количестве, измеряемом граммами. Представляя безусловный интерес для иммунологов, это, кроме того, дает возможность биохимику получать антитела к материалу, который он не может должным образом очистить. Такие антитела могут быть, в частности, использованы для генетического анализа антигенов поверхности клеток человека (Barnstable et al., 1978). [c.12]

Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используют вирусологические, серологические и биологические методы исследования. Среди них наиболее трудоемкими являются и усологические, заключающиеся в заражении исследуемым материалом клеточных культур или куриных эмбрионов. В связи с различной чувствительностью клеточных культур к вирусам приходится одновременно заражать несколько первичных или перевиваемых культур. Некоторые вирусы могут быть обнаружены при заражении лабораторных животных. [c.230]

Отдельные клетки, небольшие группы или достаточно крупные агрегаты >50 клеток) выращивают во взвешенном состоянии в жидкой среде. Применяют разные аппараты и способы поддержания их в таком состоянии. Начальный момент получения суспензионной, клеточной культуры является событием рандоми-ческим. Зто означает, что только клетки, которые подряду причин способны к перестройке метаболизма и размножению с высоким коэффициентом в данных конкретных условиях суспензионного культивирования, образуют хорошие линии. Важными характеристиками таких линий является высокая степень дезагрегации (5—10 клеток в группе), морфологическая выравненность клеток (небольшие размеры, сферическая или слегка овальная форма, плотная цитоплазма), отсутствие трахеидоподобных элементов. На рис. 5 представлены клетки суспензионной культуры [c.21]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология