также Антитела вторичный

Один метод локализации со специфической физиологической активностью был позаимствован нз ПЭМ. Этот метод меток поверхности клетки, который, будучи применен к образцам для РЭМ, приводит к образованию на поверхности клетки морфологически различаемых или аналитически идентифицируемых структур. Такие методики в сочетании с растровой электронной микроскопией высокого разрешения позволяют изучать природу, распределение и динамические свойства антигенных и рецепторных состояний на поверхности клеткн. Методы нанесения меток на поверхность клетки в общем случае достаточно сложны и включают процедуры иммунохимической и биохимической очистки. Подробные ссылки на них можно найти в работах [359—361], но сущность методик состоит в следующем. Для крепления антител в определенных антигенных состояниях на поверхности клетки используются стандартные иммунологические процедуры. Хитрость состоит в том, чтобы модифицировать антитела таким образом, чтобы они также несли морфологически различимую метку, такую, как латексные шарики или сферы из двуокиси кремния, распознаваемый вирус, как, например, вирус табачной мозаики, или один из Т-четных фагов, как показано на рис. 11.18, илн белковая молекула известных размеров, как ферритин или гемоцианин. В работе [362] (рис. 11.19) использовались гранулы золота, которые имеют большой коэффициент вторичной электронной эмиссии. Одна часть антитела имеет средство для специфичного антигенного закрепления на поверхности клетки, в то время как другая часть несет морфологически различимые структуры. В настоящее время иммунологические методы достигли такого уровня, когда они не могут быть использованы для изучения как качественных, так и количественных характеристик поверхности клетки [363, 364]. [c.244]

Специфичность действия ферментов можно объяснить с точки зрения образования фермент-субстратного комплекса и теории замка и ключа . Для присоединения субстрата или отщепления продуктов реакции необходима определенная молекулярная конфигурация фермента, обусловленная специфической последовательностью аминокислотных остатков и вторичной структурой, а также определенные электрические свойства фермента. То же самое относится и к реакции антиген — антитело. [c.361]

Особая форма неспецифической вирусной интерференции, которая возникает, очевидно, только у позвоночных, основана на образовании биологически активного вещества, так называемого интерферона, который индуцируется вирусом при первичном заражении и защищает клетки пораженного хозяина от нового заражения тем же или другим вирусом. Только для позвоночных характерен также благоприобретенный иммунитет, основанный на выработке так называемых антител. Антитела образуются в результате первичной инфекции и специфически нейтрализуют данного или близкородственного возбудителя при вторичной инфекции. Эти явления могут быть использованы при активной иммунизации и, следовательно, в борьбе с возбудителями болезней человека и животных (см. раздел 14.1.2). [c.163]

Метод также является твердофазным и формально имеет сходные черты с вышеописанным ингибиторным анализом. Отличие заключается в том, что на первой стадии используют немеченые специфические антитела, а для выявления образующихся на носителе специфических иммунохимических комплексов вводят в него ферментативную метку с помощью реакции с меченными ферментом вторичными антителами. [c.96]

Добавленные извне антитела ингибируют также развитие клеток памяти и антителообразование в культурах, В определенных условиях гомологичные антитела ингибируют и вторичную иммунную реакцию, хотя в этом случае их действие выражено хуже. [c.147]

Снижение интенсивности синтеза антител и количества антителообразующих клеток наблюдали и при добавлении Т-супрессоров в культуру клеток лимфатических узлов, полученных от мышей на высоте вторичного иммунного ответа к гамма-глобулину лошади или эритроцитам барана (Михайлова и др., 1976). Удаление Т-лимфоцитов с высокой плотностью 0-антигена из популяции клеток иммунных лимфатических узлов приводило к подавлению интенсивности синтеза антител на 70%, что, очевидно, связано с ингибирующим действием оставшихся в популяции Т-супрессоров, несущих низкую плотность 0-антигена. Уменьшение синтеза антител на 30% наблюдалось также и при удалении прилипающих клеток (Михайлова, Захарова, 1976). [c.196]

С-Область легкой цепи также представлена одним доменом (С ), тогда как у тяжелых цепей оиа заметно длиннее и состоит из 3 - 4 линейно расположенных доменов (С I — С З), структурно гомологичных С-области легкой цепи. Каждый домен упаковывается в отдельную относительно независимую глобулу, причем основной тип вторичной структуры глобулы — антипараллельная р-складча-тая (рис. 118). Между глобулами находятся открытые участки полипептидной цепи, особенно чувствительные к действию протеолитических ферментов. Весьма вероятно, что именно эти участки цепи обеспечивают значительную гибкость всей структуры, позво-1яющей молекуле антитела приспособиться к конфигурации антигена или взаимодействовать с двумя антигенными детерминантами, расстояние между которыми может варьировать. [c.214]

Радионуклиды для терапии. В последние годы в связи с ростом онкологических заболеваний активно ведутся поиск и исследование PH, которые обладали бы оптимальными для радиотерапии свойствами. Биологическое поведение PH, а именно, особенности распределения и накопления нуклидов в организме, скорость захвата и время жизни в отдельных органах, антигенные проявления, а также характеристики самих опухолевых образований (радиочувствительность размер, влияющий на проницаемость излучения близость расположения к здоровым тканям и органам степень гетерогенности поглощения радиационной дозы в зависимости от региональных изменений потока крови в опухоли) служат основой для выбора терапевтических PH. По мнению медиков радиотерапия имеет меньший риск с точки зрения возникновения вторичных нежелательных явлений, например, лейкемии, по сравнению с химиотерапией и лучевой терапией на пучках частиц. Такое заключение было сделано по результатам многолетних исследований с и Наиболее эффективной считают радиоиммунотерапию (РИТ) с мечеными моноклональными антителами (МКАТ) как дополнение к другим формам воздействия (химиотерапия, хирургическое вмешательство), особенно на начальной стадии появления опухолевых клеток. [c.350]

Члены в уравнениях, перед которыми стоят множители 8 , малы они могут быть существенны либо в самом начале иммунного ответа, когда у=0 (член с 81 во втором уравне нии), или после полного исчезновения антигена и антител на временах порядка нескольких месяцев (члены зу и 82 (1—д )). Остальные члены, как мы только что показали, в безразмерной системе имеют примерно одинаковый порядок, что указывает на равнозначность различных учтенных факторов. Система (5.3) просчитывалась на ЭВМ, результаты расчетов можно найти в работе [7], а также в [П471. Первичный ответ моделировался при начальных условиях (0)=л (0)=1, г/(0) = =2(0)=а(0)=0, вторичный—при ё[(0)=1, г/(0)=г/о, д (0)=2(0)= =а(0)=0. При заданных в модели коэффициентах вторичный ответ развивается значительно быстрее количество плазматических клеток 2 достигает максимума на третьи сутки, тогда как в первичном — на 14-е антиген практически полностью выводится из организма к концу 7-х суток вместо 30-х максимальная концентрация антител увеличивается на порядок. [c.106]

Метод с использованием меченых вторичных антител и иммобилизованного антигена. Метод также является гомогенно-гетерогенным и имеет сходные черты с вышеописанным иммунофермеитомет-рическим анализом. Отличие его заключается в том, что на первой стадии используют немеченые специфические антитела, а образующийся на твердой фазе комплекс выявляют с использованием меченых вторичных антител. Схема метода [c.93]

При выборе твердофазных схем определения следует учитывать, что скорость достижения равновесия в системе иммобилизованный реагент — анализируемое соединение зависит не только от концентрации компонентов, но может снижаться за счет микро-диффузионных эффектов. На анализ в таких системах, как правило, затрачивается время не менее нескольких часов. Переход к гомогенно-гетерогенным методам, в которых реакция образования первичного специфического иммунокомплекса протекает в растворе, значительно снижает время достижения равновесия на первой стадии. При этом сокращается и время анализа в целом, так как для разделения компонентов используется избыток иммобилизованных вторичных антител. Осуществление стадии узнавания в гомогенной фазе повышает также и точность анализа, которая определяется точностью дозирования компонентов. В тех случаях, когда анализируемая среда содержит эндогенный фермент, кофактор или эффектор, твердофазные неконкурентные методы являются наиболее эффективными. [c.102]

Меченые антитела с высокой специфической активностью удобно и просто получать с помощью активированного N-гидpo-, ксисукцинимидного эфира акридиния [6]. Это производное быстро реагирует с первичными и вторичными алифатическими аминами в водных средах при pH 8,0, давая устойчивые конъюгаты, которые легко очистить гель-фильтрацией. Полученные таким способом меченые антитела использовались более двух лет без какой-либо заметной потери их свойств. Простота введения метки, а также доступность реагентов (очищенных моноклональных антител) и стабильность конъюгатов помогают успешно преодолеть один из основных недостатков всех методов иммуноанализа - отсутствие надежного метода получения устойчивых меченых реагентов. [c.180]

Наиболее полноценной системой для воспроизведения вторичного синтеза антител in vitro также оказались органные культуры, в которых происходит пролиферация и диффе-ренцировка лимфоидных клеток и осуществляются упорядо- [c.142]

Таубин и соавторы электрофоретически переводили белки из ПААГ на нитроцеллюлозный фильтр типа Millipore и там их обнаруживали иммунохимическй [Towbin et al., 1979]. Для этого оставшиеся свободными центры сорбции нитроцеллюлозы сначала насыщали обработкой 3%-ным раствором БСА, а потом уже инкубировали с антисывороткой к интересующему белку. Иммунные комплексы на фильтре в этой работе обнаруживали с помощью радиоактивно меченных вторичных антител к иммуноглобулинам первого слоя (метод двух антител), а также конъюгированных с ферментами и флюоресцентно меченных антител (см. ниже.). [c.133]

Если индивидуальный белок, для которого очищается мРНК, имеется в достаточном количестве, то иммунопреципитацию можно осуществить и без помощи вторичных антител. После окончания избирательной реакции первичных антител с полисомами их можно связать добавлением избытка белка-антигена, также в виде нерастворимой сетки, сшитой глютаральдегидом. Напомним, что каждое антитело имеет два участка связывания антигена. Один из этих участков после присоединения антитела к полисоме остается свободным. По нему антитело, а через нее и вся полисома связывается с нерастворимой сеткой вносимого [c.273]

Одновременную инкубацию обоих конкурентов (меченого и немеченного миозина) с первичными антителами использовали Кларк и соавторы для отбора моноклональных гибридбм — продуцентов антител против миозина. Роль иммунной сыворотки в этих опытах каждый раз играли среды культивирования различных гибридом, полученных в результате слияния клеток селезенки крыс и мышей, иммунизированных миозином, и клеток миеломной линии P3-X63-Ag8. Инкубацию проводили в боратном буфере (pH 8,4), содержащем 40 мМ пирофосфата натрия, по 1% Тритона Х-100 и дезоксихолата, а также 2% нормальной сыворотки крысы или мыши. Эту сыворотку вводили опять-таки ради создания эквивалентного соотношения концентраций при последующем добавлении вторичных антител в составе анти сыворотки козы против иммуноглобулинов крысы или мыши Использовав для конкуренции миозин гомологичного и гетеро логичного происхождения, авторы выясняли степень специфич ности антител, синтезируемых гибридомами [ lark et al., 1980] [c.282]

Отметим, что для детекции антител разработаны также и нерадиоактивные (хромогенные) методы. Они основаны на свойствах пе-роксидазы из хрена и щелочной фосфатазы образовывать цветные нерастворимые продукты в процессе ферментативной реакции. Эти ферменты ковалентно связывают с вторичными антителами, которые реагируют со специфическими сайтами на первичных антителах После обработю фильтров такими комплексами в местах локализации искомых белков образуются суперкомплексы антигек — антите-ло антитело — фермент. Их положение определяют смочив фильтр в растворе проявляющего вещества (субстрата ферм нта). Например, для пероксидазы хрена хромогенным субстратом является 4-хлоро-1-нафтол, способствующий появлению на фильтрах пурпурных пятен. В качестве альтернативного метода вторичные антитела связывают с биотином, а пероксидазу хрена — с авидином. [c.286]

Инсулин влияет также на синтез белков, изменяя, по-видимому, скорость трансляции. После инкубации с инсулином в клетках происходит фосфорилирование рибосомального белка 65 с молекулярным весом 31 ООО. Фосфорилирование этого белка достигает максимума уже спустя 5 мин после инкубации клеток с инсулином. Этот процесс коррелирует с ускорением транспорта глюкозы, однако весьма вероятно, что он имеет отношение и к белковому синтезу. Фосфорилирование рибосомального белка подавляется антителами на инсулин, но ускоряется антителами на инсулиновый рецептор. Циклические нуклеотиды и a не имитируют этого эффекта. В то же время, экстракт из клеток,, преинкубированных с инсулином, также вызывает фосфорилирование белка 65. Возможно, при связывании инсулина с рецептором в клетке образуются неизвестные пока посредники ( вторичные мессенджеры ). Существует предположение, что под действием инсулина от рецептора отщепляется фрагмент (короткий пептид), который покидает плазматическую мембрану, проникает в цитоплазму и осуществляет свое регуляторное влияние на внутриклеточные структуры. Нельзя исключить и того, что инсулин вызывает выход протеинкиназы из мембраны и последующее взаимодействие с рибосомой. [c.172]

Метод спиновой метки позволил также уловить различия в свойствах кроличьих антител к 2,4,6-тринитрофенилу (ТИФ) после первичной и вторичной иммунизации (Hsia, Little, 1971). Эти антитела исследовали с помощью отличных по пространственной структуре спин-меченых ТНФ-гаптенов как методом ЭПР, так и по уменьшению квантового выхода флуоресценции антител. Обнаружено, что антитела, образуемые в ходе первичного и вторичного иммунных ответов, имеют различия в строении активных центров. Комплексы первичных антител с гаптенами являются менее жесткими и более чувствительными к действию органических растворителей и к стерическим изменениям лигандов. [c.22]

Действительно, ифференцировка синтезирующих антитела пла ма-тических клеток па стадии плазмобластов и на стадии зрелых пла мати-ческих клеток происходит внутри лимфоузлов на разных внутриорган-ных структурах (вторичных фолликулах и мякотных шнурах) и требует миграции клеток на новое микроокружение. Удалось также прямо показать (Сидоренко и др., 1978), что костномозговые фибробласты оказывают резкое угнетающее, а тимические — резкое стимулирующее дейст- [c.173]

Основной класс иммуноглобулинов, находящихся в крови, составляют IgG, производимые в больших количествах при вторичном иммунном ответе. Помимо активации системы комплемента Рс-область молекул IgG связывается со специфическими рецепторами макрофагов и нейтрофилов. В большой мере благодаря таким Рс-рецепторам эти фагоцитирующие клетки могут связывать, поглощать и разрушать внедрившиеся микроорганизмы, покрытые IgG-антителами, которые были выработаны в ответ на инфекцию (рис. 18-18). Различные типы лейкоцитов, несущие Рс-рецепторы, могут убивать также и покрытые IgG чужеродные эукариотические клетки, не фагоцитируя их. Этот процесс, называемый антителозаеисимой клеточной цитотоксичностъю, могут осуществлять макрофаги, нейтрофилы и эозинофилы (см. ниже), а также клетки-киллеры (К-клетки). Киллеры - это лимфоцитоподобные клетки, специализированные, по-видимому, для убивания аномальных клеток собственного организма (разд. 18.6.4). [c.233]

Микробиологическая диагностика. Для обнаружения бледной трепонемы в отделяемом твердого шанкра применяют микроскопию в темном поле. К концу первичного и во вторичном периоде становятся положительными сергологические реакции Вассермана, осадочные реакции Кана, цитохолевая и другие пробы, выявляющие антитела к бледной трепонеме. При массовых обследованиях применяют отборочную реакцию, или микрореакцию на стекле, с каплей крови или сыворотки и специальным антигеном. В исследовательских лабораториях используют также реакцию иммобилизации трепонем и доугие современные методы. [c.299]

Для увеличения чувствительности при иммуноблоттинге используются системы с биотинилированными вторичными антителами. Данный метод использует сродство биотина и авидина. Поскольку стрептавидин связывает несколько молекул биотина, связывание фермента с интересующими белковыми зонами усиливается. Другое преимущество данной системы - способность обнаруживать белки, связанные с положительно заряженной нейлоновой мембраной. Данная система обладает в 10-50 раз более высокой чувствительностью, а также не требует наличия метанола в буфере для переноса. [c.68]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология