Электрофоретическая гетерогенность белка

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ БЕЛКА [c.15]

При изучении системы трансферрин — кональбумин у домашней птицы было показано, что железосвязывающие белки могут синтезироваться во многих тканях и что ген трансферрина может определять синтез различных форм белка в разных тканях. У цыплят описана гетерогенная популяция железосвязывающих белков, подобная той, которая наблюдается при сравнении белков сыворотки крови и СМЖ у человека [60]. Трансферрин сыворотки курицы и кональбумин яичного белка сходны по иммунологическим свойствам и аминокислотному составу. Оба белка образуют аналогичные продукты после обработки трипсином и химотрипсином, и тот и другой содержат аланин в качестве N-концевой аминокислоты. Генетически обусловленный полиморфизм трансферрина сыворотки цыпленка отражается в соответствующем полиморфизме кональбумина яичного белка [69]. Генетические вариации трансферрина сыворотки птиц были описаны Мюллером и сотр. [70]. Вильямс [60] показал, что обработка нейраминидазой не оказывает влияния на электрофоретическую подвижность кональбумина в крахмальном геле. Однако тот же фермент уменьшает подвижность двух компонентов трансферрина сыворотки цыпленка, образуя компоненты, соответствующие по подвижности компонентам кональбумина. Это позволило автору предположить, что трансферрин и кональбумин отличаются только по содержанию сиаловой кислоты в углеводных простетических группах. Основываясь на данных, полученных в опытах по включению меченых аминокислот в кональбумин в срезах яйцеводов, тот же автор [60] постулировал, что ген трансферрина у птиц определяет синтез как трансферрина (в печени), так и кональбумина (в яйцеводах). [c.126]

Как отмечалось в гл. 5, глобулины—это белки, нерастворимые в воде, но растворимые в растворах солей. Глобулины сыворотки—это гетерогенная сложная смесь белковых молекул, обычно называемых а-, Р- и у-глобулинами (иногда дополнительно вводят цифровые обозначения) данная классификация основана на электрофоретической подвижности (рис. 55.2). Более рациональная классификация базируется на структуре и функциях глобулинов. [c.320]

Б. Поскольку обработка нативного переносчика глюкозы ферментом, отщепляющим боковые олигосахаридные цепи, приводит к получению более четкой электрофоретической полосы, размытый характер ее должен быть обусловлен гетерогенностью углеводных компонентов, связанных с белком. Объясняется ли эта гетерогенность различной заполненностью участков на поверхности белка, способных к О- или N-связыванию олигосахаридов, либо связана с вариабельностью длины или последовательности боковых олиго-сахаридных цепей, пока неизвестно. Данная степень гетерогенности необычна, большинство гликопротеинов образуют гораздо более резкие полосы при электрофорезе в полиакриламидном геле с ДСН. Хотя на каждый эритроцит приходится до 350000 молекул этого белка (столько же, сколько гликофорина и белка полосы 3), однако в течение многих лет он оставался незамеченным. К тому же существовали противоречивые мнения относительно молекулярной идентификации переносчика глюкозы, его молекулярный вес оценивали величинами до 200000 Да. Причиной была размытость, нечеткость его полосы при электрофорезе. [c.319]

Точные данные о содержании амидного азота в белках необходимы при определении в них общего азота и при изучении вопроса о том, не являются ли различия в содержании амидного азота причиной электрофоретической гетерогенности белков, как это показано для желатина [1] и предполагается для у-глобулина [2]. Для установления тонкой структуры гликопротеинов [3] очень существенно точное онределение амидного азота, но при выполнении такого анализа в этой группе веществ встречаются значительные трудности. Во-первых, при действии кислот, применяемых для освобождения амидного азота в виде аммиака из остатков аспарагиновой и глутаминовой кислот белковой части, будут образовываться, по крайней мере частично, 2-ацетамидо-2-дезоксигексозы. Свободные гексозамины, образующиеся при деацетилпровапии, являются потенциальным источником аммиака в условиях его отгонки из щелочного раствора. Во-вторых, известно, что сиаловые кислоты, обычные компоненты гетеросахаридов гликонротеинов, даже в мягких кислотных условиях расщепляются с выделением части их азота в виде аммиака [4]. [c.159]

Постепенное дефосфорилирование яичного альбумина было подтверждено электрофоретическим выделением дифосфояичного альбумина Ль частичным дефосфорилированием яичного альбумина фосфатазой предстательной железы, в результате которого образуется монофосфорное производное Л2, и полным дефосфорилированием производного Л2 кишечной фосфатазой с образованием альбумина Лз, не содержащего фосфора [150в]. За исключением содержания фосфора и характера подвижности, все три белка А, Л2 и Л3 обладают сходными свойствами. Как и в случае превращения яичного альбумина в плакальбумин, изменение подвижности, которым сопровождается процесс дефос-форилирования, можно использовать для оценки изменения суммарного заряда белков. Эти результаты показывают, что в удалении каждого из атомов фосфора принимают участие два способных ионизироваться атома водорода. Установление взаимосвязи между тремя формами яичного альбумина помогает объяснить электрофоретическую гетерогенность свежеприготовленных растворов этого белка и изменения, наблюдающиеся при старении. [c.335]

В 1892 г. Фрейнд (см. [1]) выделил из крови углеводсодержащий мукоид, в котором ему не удалось обнаружить азот. Пять лет спустя Занетти [2], фракционируя спиртом жидкость, оставшуюся после удаления большей части белков из крови уксусной кислотой, получил белковое вещество, которое после гидролиза приобретало редуцирующие свойства (содержание азота 12,93%). По последним данным, эта фракция электрофоретически гетерогенна, однако она сходна с веществом, полученным Винцлером и сотр. [3], и содержит как основной компонент (-кислый гликопротеин. Занетти [4] обнаружил в этом веществе, которое он назвал серомукоид , присутствие гексозамина. [c.68]

В настоящее время около половины идентифицированных ферментов находятся в клетках и тканях в виде множественньгх молекулярньгх форм, имеющих единую субстратную специфичность, но отличающихся по физико-хими-ческим или иммунологическим свойствам. Генетическая основа молекулярной гетерогенности обусловлена наличием нескольких генов, каждый из которых кодирует одну субъединицу фермента или одну его молекулярную форму. Кроме того, различные молекулярные формы одного и того же фермента могут кодироваться в одном генном локусе, имеющем множественные аллели. Генетически детерминированные молекулярные формы называются изоэнзимами. Посттрансляционные модификации ферментов, обусловленные локальным протеолизом, ковалентными модификациями, белок-белковыми взаимодействиями и т. д., являются причиной образования множественных молекулярных форм, не являющихся истинными изоэнзимами, но играющими существенную роль в метаболических процессах. Наиболее часто встречаются так называемые конформеры — молекулярные формы, имеющие одинаковую первичную структуру, но отличающиеся по своей конформации. Это возможно в том случае, если эти конформации достаточно устойчивы, т. е. соответствуют уровню свободной энергии, близкой к минимальной. Только такие конформационные варианты белков, которые воспроизводимо фиксируются посредством электрофоретических, хроматографических или иных методов, могут рассматриваться как конформеры. [c.83]

Размывание границы при электрофорезе было описано Тизе-лиусом и другими исследователями [138—141]. Были рассмотрены преимущества работы при значениях рН, близких к средней изо-электрической точке [138—141] была развита теория этого явления [140—142] и произведено исследование гомогенности ряда белков [138—144]. Из числа многих исследованных указанным методом белков электрофоретически гомогенной оказалась одна лишь рибонуклеаза (ср., однако, это доказательство с доказательством гетерогенности, полученным распределительной хроматографией [145]). Был применен также метод стационарного состояния , не требующий проведения опыта в изоэлектрической точке [144]. (Дальнейшее обсуждение этих методов см. в статье IV т. П.) [c.26]

Большое значение для исследования генетической гетерогенности природных популяций имело применение метода гель-электрофореза при оценке изозимного разнообразия. Этот шаг, сделанный в 60-х годах благодаря успехам молекулярной биологии, приблизил к гену генетиков, изучающих популяции, позволил им непосредственно исследовать элементарные признаки в их молекулярном проявлении. Замены аминокислотных остатков в белках в результате мутаций могут изменять физико-химические свойства белков, в частности их электрофоретическую подвижность. [c.461]

Иммуноглобулины составляют группу макромолекул, чрезвычайно гетерогенную по биологической активности, заряду и молекулярному весу. Это наиболее щелочные из сывороточных глобулинов, обладающие наименьшей электрофоретической подвижностью (обзор Eisen, 1973). Для их отделения от остальных белков сыворотки используют либо обычные физико-химические методы, такие, как высаливание, ионообменная хроматография, гель-фильтрация и препаративный зональный электрофорез, либо аффинную хроматографию последний метод особенно пригоден для выделения из сыворотки специфических антител. Все эти методы достаточно просты, не требуют большой затраты времени и обеспечивают хороший выход иммуноглобулинов. Иммуноглобулины разных животных различаются по заряду, молекулярному весу и электрофоретической подвижности, поэтому методы фракционирования, пригодные для выделения иммуноглобулинов одного вида, не всегда будут без каких-либо изменений пригодны для глобулинов другого вида в каждом отдельном случае необходима подработка методики. В этой главе дается краткое описание общих методов фракционирования, позволяющих выделять иммуноглобулины большинства видов животных. [c.58]

Для изучения четвертичной структуры НАД-киназы из скелетных мышц кролика использовали препараты фермента, очищенные в 150—300 раз. Тремя независимыми методами электрофорезом в однородном геле и в градиенте концентрации полиакриламидного геля, путем разделения в тонком слое сефадекса С-200, с помощью гель-фильтрации через колонку с сефадексом С-200 — была обнаружена большая гетерогенность препарата в отношении НАД-киназы [2, 4]. Локализацию фермента в геле определяли по измерению активности в элюатах, полученных после разрезания столбика геля на диски толщиной 2 мм. При это оказалось, что по данным диск-электрофореза в однородном геле ферментативной активностью обладают четыре зоны, характеризующиеся значениями Rf 0,1, 0,52, 0,73 и 0,98. Повторный электрофорез белка с электрофоретической подвижностью, близкой к 1,0, после его элюции и кондентрирования обнаружил несколько белков с более низким, чем у исходного, значением Rf (0,73, 0,52, 0,07). [c.137]

Природа фибриллярного белка амилоида (F-компонент) в последнее время хорошо изучена. Руководствуясь разносторонними исследованиями (определение относительной молекулярной массы, электрофоретический и хроматографический анализ), можно считать, что фибриллы амилоида представляют собой гетерогенную группу (смесь) белков с индивидуальными особенностями в каждом случае амилоидоза [Рукосуев В. С., 1975]. Из смеси белков фибрилл амилоида удалось выделить две группы— белок А (AS) и белок В. Белок А (AS), обнаруженный в амилоиде при всех формах амилоидоза у человека и при экспериментальном амилоидозе у различных животных, по сравнению с белком В содержит больше таких аминокислот, как аргинин, аспарагин, глицин, аланин и фенилаланин, причем последовательность концевых участков аминокислот отличаех-этот белок от любого из иммуноглобулинов. Белок В, обнаруженный в амилоиде при первичном амилоидозе, опухолевидном амилоидозе респираторного тракта и плазмоцитоме, по сравнению с белком А (AS) имеет большую относительную молекулярную массу по аминокислотному составу и последовательности концевых остатков аминокислот он напоминает легкие цепи иммуноглобулинов или белка Бене-Джонса [Isersky С. et al., 1972]. [c.215]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология