Методы изучения электрофореза

Одним из наиболее изученных 4 ферментов, множественность форм которого детально изучена методом гель-электрофореза, является ЛДГ, катализирующая обратимое превращение пировиноградной кислоты в молочную. Пять изоферментов ЛДГ образуются из 4 субъединиц примерно одинакового размера, но двух разных типов. Поскольку Н-протомеры несут более выраженный отрицательный заряд при pH 7,0—9,0, чем М-про-томеры, изофермент, состоящий из 4 субъединиц Н-типа (Н,), при электрофорезе будет мигрировать с наибольщей скоростью в электрическом поле к положительному электроду (аноду). С наименьщей скоростью будет продвигаться к аноду изофермент М в то время как остальные изоферменты будут занимать промежуточные позиции. Следует подчеркнуть, что изоферменты ЛДГ, обладая почти одинаковой ферментативной активностью, различаются некоторыми физико-химическими свойствами молекулярной массой, электрофоретической подвижностью, отнощением к ак- [c.128]

В настоящее время разработано значительное число методов изучения электрофореза и определения с его помощью электрокинетического потенциала метод непосредственного изучения движения границы между дисперсной системой и свободной дисперсионной средой под действием внешней разности потенциалов (метод подвижной границы), метод микроэлектрофореза — наблюдение с помощью микроскопа или ультрамикроскопа за перемещением отдельных частиц,, электрофорез в гелях, бумажный электрофорез и др. Эти методы,, подробно описанные в практикумах по коллоидной химии широко применяются для изучения электрофореза как дисперсных систем, образованных низкомолекулярными веществами, так и дисперсий ВМС, особенно природного происхождения. Методы электрофореза позволяют анализировать и разделять смеси белков, что эффективно используется в исследовательской работе и лечебно-диагностической практике. [c.194]

Для изучения электрофореза по методу наблюдения за передвигающейся границей применяется прибор, изображенный на рис. 4. Он представляет собой широкую U-образ-ную трубку, к которой припаяна снабженная краном узкая трубка с воронкой, служащая для заполнения прибора исследуемым золем. Работу с зтим прибором начинают с того, что в узкую трубку через воронку наливают немного золя при закрытом кране. Слегка открыв кран, заполняют его просвет золем, следя, чтобы в просвете не оставалось пузырьков воздуха и чтобы золь не попал в нижнюю часть U-образной трубки. Кран закрывают и наполняют узкую трубку золем, а U-образную трубку — дистиллированной водой или другой боковой жидкостью. [c.155]

Методы изучения электрофореза и электроосмоса. Из четырех электрокинетических явлений наиболее подробному изучению подверглись электрофорез и электроосмос. [c.112]

Широко применяемый для изучения биополимеров метод гель-электрофореза основан на различной подвижности макромолекул и их фрагментов в электрическом поле. Для разделения и исследования белков гель-электрофорез производится с додецилсульфатом натрия (ДСП), который связывается с молекулой белка, вызывая ее денатурацию. Подвижность молекулы в геле, на который наложено электрическое поле, зависит не только от заряда, но и от размеров молекулы (диффузионный эффект). [c.33]

Тематика диссертаций по токсикологической химии охватывает широкий круг веществ (алкалоиды, барбитураты, гликозиды, синтетические лекарственные вещества, спирты, химические вещества неорганической природы и т. п.) и методов исследования (микрокристаллоскопия с кристаллооптикой, хроматография, оптические методы анализа, электрофорез и т. д.). Углубленному изучению подвергаются специфические вопросы токсикологической химии методы изолирования различных химических веществ из биологических жидкостей и внутренних органов трупа, методы их обнаружения и определения, распределение ядов в организме при отравлении, сохраняемость их в организме и трупе. Изучаются вопросы метаболизма (превращения) отдельных органических веществ в организме и трупе. [c.25]

Для изучения электрофореза по методу наблю- [c.138]

Измерения электрофореза. Микроскопический метод. При этом методе изучаемый коллоидный раствор или суспензия помещается в специальную микроячейку для электрофореза, закрепленную на предметном стекле микроскопа [18]. Обычно применяется мелкая плоская ячейка с прямоугольным сечением, с двух сторон которой впаяно по электроду. Эти электроды соединяются с источником э. д. с., и скорость движения любой частицы определяется с помощью окулярной шкалы микроскопа. Градиент потенциала вычисляется из величины силы тока и сопротивления раствора между электродами, расстояние между которыми известно. Поскольку взвешенные частицы постепенно оседают, для изучения электрофореза была сконструирована вертикальная микроячейка. Влияние силы тяжести исключается путем наблюдения движения частицы при наложении поля сначала в одном направлении, а затем в обратном. Для изучения электрофореза применяются также ячейки цилиндрической формы, поскольку их легче изготовлять и мыть, чем ячейки с прямоугольным поперечным сечением. Однако кривизна стенок таких ячеек несколько затрудняет точное наблюдение за движущимися частицами. [c.712]

Разделение частиц с помощью прибора Тизелиуса. Одним из важнейших преимуществ прибора Тизелиуса для изучения электрофореза является то, что с его помощью можно производить разделение смеси разных частиц, если только эти частицы имеют достаточно отличные электрофоретические подвижности. Способ разделения частиц с помощью электрофореза был использован в последнее время для изучения протеинов, полученных из различных природных веществ. Был разработан ряд, методов для того, чтобы выяснить, является ли данная система протеинов гомогенной или она состоит из двух или [c.717]

Прежде чем перейти к изложению и обсуждению экспериментального материала, рассмотрим методы изучения состояния радиоактивных изотопов. Важнейшими из них являются следующие 1) адсорбция, 2) десорбция, 3) диализ, 4) ультрафильтрация, 5) центрифугирование, 6) диффузия, 7) электрофорез, 8) электрохимическое выделение, 9) радиография, 10) экстракция, 11) ионный обмен. [c.44]

Фракционирование сложных смесей веществ является одним из основных этапов в решении многочисленных проблем биохимии, биофизики и молекулярной биологии, в связи с тем что биологические системы содержат большое число компонентов, часто близких по ряду химических и физических свойств, а также в связи с развитием методов изучения первичной структуры биополимеров. Выделение отдельных компонентов из таких систем является, как правило, весьма сложной экспериментальной задачей, решение которой ранее осуществлялось путем использования физико-химических методов — осаждения, кристаллизации и сорбции. В настоящее время имеется большой арсенал средств избирательного выделения компонентов или разделения сложных смесей с получением всех веществ в чистом виде. К ним относятся в области изучения биополимеров и их фрагментов прежде всего хроматография и электрофорез. Для аналитических целей при рассмотрении систем, содержащих ограниченное число компонентов, успешно применяется также седиментация, диффузия и ряд других процессов, в которых осуществляется обычно не полное разделение компонентов, а относительное смещение границ зон отдельных веществ. [c.6]

Метод Кендела нельзя использовать для изучения миграции и разделения микроколичеств веществ. Эта задача наиболее просто решается методом зонного электрофореза, например электрофореза на бумаге, предложенной Виландом и Фишером [92]. Еще ранее электромиграцию на бумаге изучали другие авторы [87]. Однако их работы не привлекли в свое время внимания исследователей. [c.60]

При сравнительном изучении белков бактерий исследователи активно используют методы гель-электрофореза. [c.80]

Электрофорез—это движение заряженных частиц в растворе под влиянием электрического поля. Если В или А представляют собой ионы, то константы устойчивости системы можно иногда получить изучением миграции одной или более форм. Методы изучения электрофореза рассматривались Робинсоном и Стоксом [59] и Мукерджи [53]. Наиболее часто используется метод движущейся границы. Теория и практика этого метода хорошо описаны Лонгсвортом [49]. Эксперименты обычно проводят в и-образной трубке Тизелиуса, содержащей растворенное вещество в подходящем буферном растворе или ионной среде, покрытых слоем чистого раствора среды. Структуру и движение границы, образованной между двумя растворами, наблюдают с помощью оптической системы Шлирена, которая отмечает градиенты показателя преломления, соответствующие градиентам концентрации. Полученная диаграмма Шлирена зависит от числа присутствующих форм, от их подвижностей и от скорости установления равновесия между ними. [c.377]

Методы изучения электрофорезав золях делятся на 1) макроскопические, основанные на наблюдении передвижения либо вещества дисперсной фазы (только в качественных наблюдениях), либо границы коллоидного раствора с дополнительной боковой жидкостью, и 2) микроскопические, основанные на непосредственном наблюдении за движущимися частицами в ультрамикроскоп или простой микроскоп. [c.112]

А. Тизелиус разработал метод изучения электрофоретической подвижности белков. От прибора, предназначенного для изучения лиозолей (см. рис. 34, а), прибор Тизелиуса отличается некоторыми конструктивными особенностями. Наиболее существенное из них — применение разъемных кювет прямоугольного сечения. Этим достигается возможность наблюдения за движением неокрашенных в видимой области белков с помощью специальных оптических систем. Концентрация белков на различных участках прямоугольной ячейки регистрируется по изменению показателя преломления. Изучение градиента показателя преломления при электрофорезе дает возможность проводить качественный анализ смеси белков и их препаративное разделение по различию электрофоретической подвижности. Этот метод назван свободным электрофорезом. [c.216]

Последние годы ознаменовались огромными успехами в изучении строения и функций важнейших биологически активных полимеров. Благодаря развитию новых методов разделения н очистки веществ (различные методы хроматографии, электрофореза, фракционирования с использованием молекулярных сит) и дальнейшему развитию методов рентгеноструктурного анализа и других физико-химических методов исследования органических соединений стало возможным определение строения сложнейших природных высокомолекулярных соединений. Изучено строение ряда белков (работы Фишера, Сейджера, Стейна и Мура). Установлен принцип строения нуклеиновых кислот (работы Левина, Тодда, Чаргаффа, Дотти, Уотсона, Крика, Белозерского) и экспериментально доказана их определяющая роль в синтезе белка и передаче наследственных признаков организма. Определена последовательность нуклеотидов для нескольких рибонуклеиновых кислот. Широкое развитие получили работы по изучению строения смешанных биополимеров, содержащих одновременно полисахаридную и белковую или липидную части и выполняющих очень ответственные функции в организме. [c.53]

Штыкова . ., Гуменюк А.П., Муштакова С.П. Изучение состояния родия в растворе хлороводородной кислоты методом капиллярного электрофореза // В сб. Всероссийский симпозиум по теории и практике хроматографии и электрофореза, посвященнный 95-летию открытия хроматографии М.С. Цветом. Самара, 1999. С. 143-150. [c.388]

В изучении кольцевых ДНК и сверхспирализации метод гель-электрофореза дал столь же много, как и в определении ДНКовых последовательностей. Было сделано множество тонких измерений, позволивших определить важнейшие характеристики зкДНК. Именно с помощью гель-электрофореза была точно определена энергия, которая может быть запасена в ДНК с помощью сверхспирализации. [c.101]

Изучение электрофореза — удобный и простой метод оценки специфич. связывания противоионов полиионами, поскольку электрофоретич. подвижность пропорциональна эффективному заряду полииона. Электрофорез широко используется при исследовании р-ров полиамфолитов, в частности белков, как аналитич. и препаративный метод. [c.50]

Макроскопические методы. Хотя микроскопический метод имеет некоторые преимущества в отношении простоты количества необходимого для измерени51 времени и в отношении получения сведений о форме, величине и ориентации частиц, за последние годы большое внимание привлекает макроскопический метод главным образом потому, что Тизелиус разработал очень удобный прибор для измерения. Макроскопический метод применялся в течение многих лет для приближенного изучения электрофореза простейшая форма прибора изображена на рис. 126. Нижняя часть U-образной трубки содержит исследуемую суспензию или коллоидный раствор, над которым в обоих коленах сосуда налит слой чистого растворителя и в него погружены два платиновых электрода. При наложении на эти электроды некоторого напряжения граница между растворителем и суспензией начинает передвигаться со скоростью, равной скорости электрофореза частиц. Если суспензия окрашена, можно непосредственно наблюдать за положением границы и измерять скорость ее движения. Зная градиент потенциала, можно вычислить среднюю электрофоретическую подвижность частиц. Если граница не поддается визуальному наблюдению, то иногда можно сделать ее видимой, заставив ее флуоресцировать в ультрафиолетовом свете в этом случае прибор должен быть изготовлен из кварца [20]. [c.713]

Описанный метод движущейся границы для изучения электрофореза страдает целым рядом недостатков один из основных недостатков состоит в нарушении отчетливости границы раздела. При определении чисел переноса путем наблюдения за движущейся границей благодаря автоматическому осущС ствлению условий, необходимых для поддержания отчетливой [c.713]

Основные недостатки макроскопического метода устранены в приборе, предложенном Тизелиусом. Его важнейшим преимуществом является применение во всем приборе одной и той же жидкo тIi, обычно буферного раствора, так что при движении границы частицы продолжают оставаться в том же растворе. Кроме того, употребляются трубки с прямоугольным сечением, а раствор поддерживается при температуре около 3°, соответствующей максимальной плотности буферного раствора. При прохождении электрического тока через жидкость, находящуюся в трубке, выделяется тепло, причем благодаря теплопроводности жидкость вблизи стенок трубки теряет больше тепла, чем в середине. В результате раствор в середине трубки приобретает более высокую температуру, чем у стенок, и различие плотностей приводит при комнатной температуре к появлению токов конвекции, которые нарушают отчетливость границы между растворами. Трубки с прямоугольным поперечным сечением имеют большую площадь стенок, чем цилиндрические, что облегчает отвод тепла в окружающую среду. Поддержание в растворе температуры несколько ниже 4°, при которой плотность жидкости очень мало меняется с изменением температуры, приводит к значительному уменьшению конвекции. С этими усовершенствованиями и с приспособлением для получения в начале опыта резкой границы макроскопический метод представляет собой ценное средство для изучения электрофореза и для его применения с целью разделения частиц, движущихся с различной скоростью. [c.714]

Проведенное фракционирование гуминовых кислот торфа и псевдогуминовых кислот сапропеля методом непрерывного электрофореза показало, что изученные вещества неоднородны и разделяются в электрическом поле на нейтральные, положительно и отрицательно заряженные фракции. [c.268]

Для фракционирования щелочнорастворимых веществ торфа и сапропеля использован метод непрерывного электрофореза. Получено 20 фракций. Изучение веществ фракций методами ИК-спектроскопии, спектров поглощения в видимой и ультрафиолетовой областях спектра, порогов осаждения и т. д. показало отличия в их свойствах в зависимости от электрофоретической подвижности. [c.306]

Описанные явления легко наблюдаются и хорошо изучены на лиофобных золях. При помощи электрофореза было установлено наличие электрич. зарядов на частицах дисперсной системы. Совокупностью методов изучения электрокинетнч. явлений было установлено наличие двойного злектрического слоя у мицел, электропроводность у лиофобных золей и другие электрич. свойства. Изучение Э.с.д.с. имеет важное практич. значение см., например, электродиализ в fiT. Диализ. [c.464]

Многочисленные исследования коллоидного состояния микроколпчеств радиоактивных веществ, в ходе к-рых были использованы разнообразные экснеримен-тальные методы (адсорбция и десорбция, диализ, центрифугирование, ультрафильтрация, радиография, диффузии, электрофорез и др.), показали, что все известные факты могут быть объяснены, если признать, что Р. к. могут существовать как в форме истинных так и псевдоколлоидов, в зависимости от конкретных условий их нахождения (pH и солевой состав среды, концентрация радиоактивного элемента, наличие загрязнений, присутствие комплексообразователей и т. д.). При этом ни одни из методов изучения коллоидного состояния микроколичеств радиоактивных веществ, взятый в отдельности, не позволяет различать истинные и нсевдоколлоиды, но в сочетании указанные методы (напр., методы адсорбции и ультрафильтрации) дают эту возможность. Так, адсорбция Ро стеклами и бумагой наиболее значительна в слабокислой среде в пределах pH от 8 до 13 наблюдается минимум адсорбции. Вместе с тем методами ультрафильтрации и [c.236]

Применение методов хроматографии, электрофореза, изучение промежуточных продуктов гидролиза, метилирование и ИК-спектроскопия свидетельствуют, что эремуран является гетерополисахаридом, глюкоманнаном, в мало разветвленных цепях которого преобладают Р-1,4-гликозидные- связи. [c.63]

Методы изучения макроскопического переноса веществ вужиДкой среде под действием некоторой внешней силы имеют много общего, что породило выделение их в отдельную область транспортных явлений (transport phenomena) [5, 6]. В физической химии полимеров к транспортным методам относят ультрацентрифугирование, диффузию, электрофорез и хроматографическое разделение макромолекул в растворах. Транспортные методы основаны на неравновесных процессах массопереноса различной природы. Общее во всех этих методах — направленное движение макромолекул относительно гомогенной или гетерогенной окружающей среды под действием некоторой силы. Разновидности последней обеспечивают разнообразие транспортных методов. В случае седиментации и электрофореза — это силы внешних гравитационного и электрического (для заряженных макромолекул) полей, в случае диффузии — это осмотическое давление, т. е. градиент химического потенциала, возникающий одновременно с возникновением градиента концентрации, в случае хроматографии — обусловленное динамической сорбцией межфазное распределение, уменьшающее среднюю скорость движения макромолекул по сравнению с молекулами растворителя — носителя . [c.7]

Одномерный или двухмерный электрофорез в сочетании с хроматографией на бумаге является наиболее эф ктивным из известных методов изучения сложной смеси небольших количеств пептидов. Чтобы проиллюстрировать, насколько широк тот круг вопросов, изучение которых осуществляется сочетанием электрос реза и хроматографии, ниже кратко изложены некоторые методики, разработанные в ходе подобных исследований. [c.54]

Наиболее распространено разделение белков электрофорезом, основанным на различиях зарядов макроионов. Скорость движения макроионов зависит от из заряда, градиента напряжения электрического поля и вязкости среды. А. Тизелиус разработал метод изучения электрофоретической подвижности белков с помощью прибора, схема которого изображена на рис. 95. От прибора, предназначенного для изучения лиозолей (см. рис. 47), он отличается некоторыми конструктивными особенностями. Наиболее существенное из них — применение разъемных кювет прямоугольного сечения. Этим достигается возможность наблюдения за движением неокрашенных в видимой области белков с помощью специальных оптических систем. Концентраиля [c.208]

В дополнение к измерениям электропроводности выяснению механизма мицеллообразования и свойств мицелл значительно способствовало изучение электрофореза. При помощи известного метода Тизелиуса [58] можно наблюдать движение мицелл в электрическом поле. Майселс с сотрудниками [591 метил мицеллы солюбилизирующимися в них красителями, молекулы которых, мигрируя вместе с мицеллами, создавали видимые окрашенные границы раздела. Интересное исследование электрофореза поливинилацетатных эмульсий в присутствии различных эмульгаторов и электролитов провели Мунро и Секссмит. Кривая зависимости скорости миграции от концентрации имеет перегиб при ККМ, что позволяет установить влияние на нее различных факторов, например концентрации добавляемого электролита или типа поверхностноактивного вещества [60]. [c.310]

Диск-электрофорез в его многочисленных вариантах, позволяющий проводить разделение макромолекул, стал в астоящее время очень важным методом, применяемым в биологических и медицинских исследованиях, а также в клинической диагностике и промышленности (для контроля за технологическими процессами). С тех пор как в 1959 г. Орнстейн [67] и Дэвис [64] впервые описали метод прерывистого электрофореза, проводится широкое изучение всех аспектов гель-электрофореза, в результате чего был внесен большой вклад в разработку теории этого метода, получена подробная информация [c.258]

Если существенный триптофанил находится вне активного центра, то сшивка изменяет баланс водородных, гидрофобных и других слабых сил (множественные разрывы связей), поддерживающих нативную конформацию макромолекулы. В результате инициируется кооперативный процесс денатурации, которая и приводит к потере ферментативной активности. В большинстве случаев непосредственной причиной инактивации являются конформационные изменения макромолекулы. Действительно, фотоинактивации белка сопутствуют конформационные перестройки и оба эти эффекта наблюдаются при одинаковых дозах УФ-света. УФ-индуцированные конформационные перестройки в белках зарегистрированы с помощью методов седиментации, электрофореза, вискозиметрии, полярографии, электронной микроскопии, люминесценции, оптического вращения, осмометрии, кондуктометрии, измерений поверхностного натяжения, растворимости, скорости дейтериевого обмена, устойчивости к протеолитическим ферментам и теплу, количества титруемых кислых, основных и 5Н-групп, изучения иммунологических свойств. [c.262]

Два подхода должны оказаться очень полезными в дальнейших исследованиях с использованием мутантов вируса гриппа. Во-первых, первичное повреждение у большого количества нетекущих мутантов с повреждениями в отдельном сегменте РНК генома вируса гриппа должно быть установлено при тщательном изучении каждой из установленных стадий репликационного цикла. Использование коров для сравнения in vitro активностей вирионной транскриптазы ts-мутанта и вируса дикого типа должно оказать существенную помощь в расшифровке данных по инкубации при ограничите.11ьной температуре [274]. Недавно разработанные методы, в которых используются клонированные копии индивидуальных сегментов РНК [264], могут быть применены для проведения более прямого анализа фенотипа РНК но сравнению с тем, чтО было возможно до настоящего времени. И наконец, применение метода двухмерного электрофореза в геле в сочетании с изоэлектрическим фокусированием или электрофорезом в неравновесном градиенте pH дает значительные преимущества в характеристике изменений фенотипа в клетках, инфицированных мутантным ви- [c.240]