Фильтры для флуориметрии

Подбор фильтров для флуориметрии [c.184]

При облучении образца УФ-светом возможна флуоресценция молекул, дающая свет с большей длиной волны, который может попадать на детектор и приводить к ошибкам. Наличие флуоресценции у вещества может быть проверено на флуориметре. Чтобы уменьшить количество излучения от флуоресценции образца, можно или поставить фильтр, поглощающий данное излучение, или отнести кювету на максимальное расстояние от детектора. [c.22]

Точную навеску порошка растертых драже, таблеток или количество таблеток, покрытых оболочкой, растертых в порошок, указанных в соответствующих частных статьях, взбалтывают в горячей воде ири подогревании на водяной бане, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл, охлаждают, доводят объем раствора водой до метки и фильтруют первые 10 мл отбрасывают. Из полученного раствора готовят раствор второго разведения с таким расчетом, чтобы содержание в нем рибофлавина было около 0,0004 мг в 1 мл. В кюветы флуориметра помещают в одну — 10 мл испытуемого раствора, в другую— 10 мл раствора рабочего стандартного образца рибофлавина и измеряют флюоресценцию при длине волны около 440 нм. Параллельно в другие кюветы помещают в одну — 10 мл испытуемого раствора и в другую — 10 мл раствора рабочего стандартного образца рибофлавина, в каждую прибавляют по 0,1 г натрия гидрокарбоната и натрия гидросульфита, перемешивают и измеряют флюоресценцию растворов. [c.47]

Применение флуориметрического метода к диагностике фитопланктона оказалось чрезвычайно плодотворным. Первые результаты по дистанционной лазерной флуориметрии фитопланктона с борта самолета были опубликованы в 1973 г. 71. Источником возбуждения служил лазер на красителях с ламповой накачкой, генерирующий излучение с длиной волны 590 нм. Эхо-сигнал выделяли интерференционным фильтром с центральной длиной волны Х = 685 нм и детектировали с помощью фотоэлектронного умножителя (ФЭУ). В последнее время за рубежом появились работы по дистанционному (с борта самолета) количественному определению хлорофилла а с использованием калибровки по комбинационному рассеянию воды. В работе [8] в качестве источника излучения использовали лазер на красителе с ламповой накачкой мощностью 200 кВт и генерацией на 470 нм. Эхо-сигналы КР воды (560 нм) и флуоресценции фитопланктона (685 нм) разделяли полупрозрачными фильтрами на соответствующие ФЭУ. В работе [9] использовали лазер Nd + AИГ с длиной волны генерации 532 нм и дифракционный спектрометр с приемником параллельного детектирования, включающим в себя сорок ФЭУ. Система проводит не только спектральные измерения, но и стратификацию распределения фитопланктона, [c.177]

Рассмотренный метод лазерной флуориметрии может быть применен не только к водной среде, но и к экстрактам. Методика приготовления ацетоновых экстрактов пигментов фитопланктона подробно описана в работе [16]. Там же показано, что, используя лазерный спектрофлуориметр, можно вести измерения концентраций хлорофилла а и феофитина в исходных пробах природной воды и в экстрактах с погрешностью меньше 20% в районах с крайне низким содержанием фитопланктона. Чувствительность лазерной флуориметрии при зондировании хлорофилла а в пробах воды 0,1 мкг/л, в экстрактах 0,002 мкг/л. При этом для приготовления экстракта достаточно фильтровать только 2 л природной воды (стандартные методы потребовали бы более чем столитрового объема). [c.182]

Если известны характеристики излучения ламп, такие, как на рис. 55—59 или в табл. 16, и светосила монохроматора, то с помощью уравнений (208) или (212) можно вычислить максимальный световой поток при данной ширине полосы для любой комбинации лампы и монохроматора. При использовании этих уравнений светосилу монохроматора нужно умножить на его пропускание, которое для решеточных приборов при некоторых неблагоприятных длинах волн может снижаться до 0,1. Получаемые световые потоки значительно меньше вычисленных (см. табл. 15), так как яркость источника неодинакова по его площади, и желательно расфокусировать изображение на входной щели (см. раздел III, В, 6). В табл. 19 и 20 приведены примеры световых потоков, попадающих на кювету флуориметра, которые были получены с помощью монохроматоров или фильтров. Необходимо сделать два замечания. Во-первых, интенсивности [c.175]

Фильтры молено использовать вместо монохроматоров большой светосилы или в сочетании с монохроматором для увеличения его эффективности. Фильтры применяются также для выделения полосы возбуждающего света при измерении спектра люминесценции или для выделения нужной полосы люминесценции при измерении спектра возбуждения. В простых флуориметрах для обеих целей используются фильтры, в этом случае можно обойтись без монохроматоров. [c.178]

Материал этой части главы разбит по разделам возбуждение, приготовление образцов, измерения и разнообразные методические приемы. Вначале рассмотрены главным образом вопросы выбора источников света, интенсивности света и выделения выбранных спектральных интервалов при помощи фильтров и монохроматоров. Кроме возбуждения действием света, существует множество других методов возбуждения, включая возбуждение рентгеновскими лучами, гамма-лучами, электронами и другими быстрыми частицами. Однако в большинстве исследований по люминесценции для возбуждения используют видимый и ультрафиолетовый свет. Поглощение света значительно более селективно, чем другие методы, а так как последние с большей полнотой рассмотрены в ряде уже опубликованных работ, то мы ограничимся здесь только первым методом. Приготовление образцов включает очистку веществ, приготовление твердых стекол, низкотемпературную методику и выращивание монокристаллов. В следующем разделе описана аппаратура для регистрации флуоресценции и фосфоресценции, для измерения времени жизни и квантового выхода. Прингсгейм [17] в своей монографии Флуоресценция и фосфоресценция дает хорошее представление о методах эксперимента, применявшихся примерно до 1949 г. Исчерпывающий обзор по спектроскопии и спектрофотометрии в видимой и ультрафиолетовой области дан Вестом [33]. Более специфичные вопросы, связанные с определением флуоресценции и фосфоресценции, источниками света, приемниками, флуориметрами, приборами для регистрации спектров флуоресценции и фосфоресценции и для измерения времени жизни и квантового выхода рассмотрены Вотерспуном и Остером [35]. Исчерпывающая библиография, собранная Липсетом [36], содержит ссылки на работы, в которых рассматриваются вопросы методики исследования переноса энергии и сходных явлений. [c.81]

Поляризация фотолюминесценции жидкостей почти всегда измеряется под прямым углом к направлению распространения возбуждающего света. Такие измерения производятся с помощью флуориметра с фильтрами или спектрофлуориметра, снабженного приспособлением для определения степени поля- [c.276]

Поляризационные флуориметры с фильтрами [c.278]

И флуориметра с фильтрами [131] (табл. 45). Система с фильтрами имеет гораздо большую светосилу, чем небольшой монохроматор. Поэтому для флуориметра с фильтрами чувствитель- [c.384]

Измерение интенсивности флуоресценции можно провестй с помощью простого флуорометра с фильтрами (иногда прибор называют флуориметром). Такой прибор состоит из источника излучения, первичного фильтра, камеры для вещества, вторичного фильтра и системы обнаружения флуоресценции. В большинстве таких флуорометров детектор располагается под углом 90° к падающему лучу, что позволяет падающему излучению проходить через испытуемый раствор без загрязнения выходного сигнала, получаемого детектором флуоресценции. Однако на детектор неизбежно попадает некоторое количество падающего излучения в результате внутреннего рассеивания — свойства, присущего самим растворам таким же образом влияет присутствие пыли или других твердых веществ. Для удаления этого остаточного рассеивания используют фильтры. Первичный фильтр отбирает коротковолновое излучение, способное вызывать возбуждение испытуемого вещества, в то время как вторичный фильтр, обычно строго отсекающего типа, пропускает флуоресценцию при большей длине волны, но блокирует рассеянное возбуждающее излучение. [c.53]

За последние годы как в Советском Союзе, так и за границей для измерения интенсивности свечения растворов, а также перлов (плавов) разработано несколько фотоэлектрических приборов. Приборы отличаются друг от друга конструкцией, оптическими и электрическими схемами приемниками света служат фотоэлементы или фотоумножители. В люминесцентных фотометрах (флуориметрах, флуорометрах) для выделения света люминесценции часто применяются интерференционные фильтры. [c.80]

При применении флуориметров со скрещенными свето-фильтра.ми в качестве первичного светофильтра используют указанный выше светофильтр, а в качестве вторичного — 10%-ный раствор бихромата калия. Хорошие результаты получены при применении лампы УФ0-4А и вышеуказанных [c.77]

Измерения проводят на флуориметре с кюветой 9 мкл и фильтрами для возбуждения при 305—395 нм и эмиссии при 420—650 нм. [c.281]

Для регистрации спектра возбуждения образца его освещают светом различных длин волн поворачивая монохроматор Мх, измеряют флуоресценцию при постоянной длине волны (Мг неподвижен). Спектр флуоресценции снимают при неподвижном М (в этом случае образец освещается светом постоянной длины волны) и измеряют флуоресценцию при различных длинах волн, перемещая Мг. В самых простых флуориметрах Мг отсутствует, М заменен фильтром, а в качестве источников света используются ртутная, ксеноновая или водородная лампы. Такой прибор, измеряющий общую интенсивность свечения, применяется для количественных исследований однокомпонентных систем. [c.160]

Дайте определение следующих терминов разрешающая способность, светосила, коэффициент пропускания светофильтра, микрофотометр, фотографическая эмульсия, фотолиз, колориметр, определяемое вещество, спектрофотометр, флуориметр, фосфориметр, спектрофлуориметр, раствор сравнения, коллимирование, люминесценция, резонансная флуоресценция, внутренняя конверсия, интеркомбинационная конверсия, колебательная релаксация, триплетное состояние и эффект внутреннего фильтра. [c.670]

Некоторые неорганические вещества взаимодействуют с орга ническими реагентами, образуя продукты, интенсивность флуоресценции которых при определенных условиях пропорциональна концентрации определяемого вещества. Чаще всего для возбуждения флуоресценции применяется ультрафиолетовое излучение. Интенсивность флуоресценции измеряется с помощью флуориметров (с использованием спектральных фильтров) или спектрофлуори-метров, снабженных монохроматорами, которые позволяют выделять узкие спектральные полосы (линии) возбуждающего или испускаемого излучения. [c.375]

Нужно упомянуть, что при необходимости можно также применять интерференционные фильтры. Иногда наблюдается пик, который появляется и исчезает при отрицательном отклонении самописца. Такое поведение указывает па то, что эмиссионный пик соединения совпадает с граничной линией пропускания фильтра. Типичными примерами являются оптические осветлители (brighteпers), флуоресцирующие около 400 нм. Они могут быть сканированы с использованием коротковолновой ультрафиолетовой лампы в сочетании с вторичным фильтром, оптически прозрачным ниже 400 нм. В таком случае экспериментатор может отмечать гашение флуоресценции под действием ультрафиолетовой лампы при условии, что был применен адсорбент марки Р, в то время как флуориметр регистрирует флуоресценцию в диапазоне длин волн, невидимых для глаза. [c.113]

Рамановское испускание растворителя, если не принять соответствующих мер, может привести к большим значениям фона в высокочувствительной флуориметрии с фильтрами. Например, для возбуждения часто используется линия ртути 366 нм, выделяемая посредством черного стекла (например, марки han e 0Х9А, срезающего длины волн приблизительно при 405 нм, см. рис. 66). Если в качестве растворителя используется четыреххлористый углерод, достаточно подобрать второй фильтр, не пропускающий света с длинами волн ниже 410 нм. Однако, если растворителем служит вода, главная полоса комбинационного рассеяния появляется при 418 им, и, чтобы избежать высокого фона, необходимо подобрать второй фильтр. [c.394]

Двухлучевой фотоэлектрический флуориметр ФМ-42 предназначен для количественного определения урана в перлах, таблетках и порошках.. Принципиальная схема прибора приведена на рис. 193. Ультрафиолетовые лучи от лампы СВД-120 (/) зеркалами 2 и 2 ), через светофильтры (5 и 3 ) направляются по двум каналам правому — измерительному и левому — компенсационному. В правом плече они через переменную диафрагму 4) попадают на анализируемый образец (6), возбуждают его свечение, которое затем направляется сферическим зеркалом (5) на фотоэлемент Ф . В левом плече они через фотометрический клин (8) попадают на люмниесцирующую пластинку (9), свечение которой регистрируется фотоэлементом Фг. Для устранения влияния возбуждающего света перед фотоэлементами Фх и Фг помещены фильтры [10 и 10 ), скрещенные с фильтрами (о и 3 ) (см. 107). Фототоки фотоэлементов Ф и Фг протекают через сопротивление Я в противоположных направлениях снимаемое с него напряжение сигнала усиливается усилителем <У , вьшрямляется сиихронным детектором СД и поступает на измерительный прибор М. [c.425]

Эти ученые использовали излучение ртутной лампы и с помощью соответствующих стеклянных фильтров выделяли линии возбуждения. Полосы флуоресценции фотографировались. Когда десятилетие спустя начали выпускать автоматические спектро-флуориметры, ван Дуурен предпринял исследование флуоресценции веществ класса ПАУ на примере анализа сигаретного дегтя 128, 131, 135]. Результаты его работ были обобщены в 1960 г. 242]. В то же время Савицки с сотр. [223] исследовали возможность флуоресцентного определения вредных примесей в воздухе, особенно в тех случаях, когда ультрафиолетовое поглощение оказывалось неадекватным (например, при определении БаП в присутствии БкФ). Автоматические регистрирующие приборы позволяют обнаружить по спектрам флуоресценции гораздо меньшие концентрации ПАУ, чем это возможно методом абсорбционной спектрометрии [223, 242]. [c.161]

Флуориметр настраивают согласно инструкциям, приведенным в работе Келли и Кристьяна (Kelly, hristian, 1981). Луч аргонового ионного лазера (488 нм) фокусируется на проточной ячейке и затем проходит через оптическую систему, содержащую фильтр с ограниченной полосой пропускания. Применение фильтра позволяет собрать излучение с длиной волны больше 520 нм и, таким образом, устранить помехи, создаваемые рассеянным излучением. [c.164]

Ход определения. Инкубационная смесь объемом 3 мл содержала 100-мМ трис-НС1 буфер (pH 7,4) и 3 мг белка микросом. Реакцию начинали добавлением НАДФ-Н или НАД-Н до 33 мкМ концентрации и регистрацию флуоресценции проводили на флуориметре ЭФ-ЗМ (фильтр возбуждения 366 нм, фильтр регистрации 420 нм) при 30 °С в термостатированной кювете с подключенным к нему самописцем КСП-4. [c.59]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология