Гемоглобин СО хроматография

Аномальные гемоглобины, различающиеся по форме, химическому составу и величине заряда, были вьщелены при помощи электрофореза и хроматографии. Передающиеся по наследству изменения чаще всего являются результатом мутации единственного триплета, приводящей к замене одной какой-либо аминокислоты в полипептидных цепях молекулы гемоглобина на другую. В большинстве случаев происходит замена кислой аминокислоты на основную 1ши нейтральную (табл. 2.1). Поскольку это замещение осуществляется в обеих полипептидных цепях одной из пар (а 1ШИ 3), образовавшийся аномальный гемоглобин будет отличаться от нормального величиной заряда и соответственно электрофоретической подвижностью. [c.82]

Применение повышенных температур в сочетании с высаливанием позволяет уверенно определять этиловый спирт в крови на уровне биологических концентраций, однако может снижать воспроизводимость и точность анализа [34,40] из-за быстрого окисления этилового спирта в ацетальдегид, катализируемого гемоглобином [43,44]. Ухудшение воспроизводимости могут вызывать также конденсация и сорбция на стенках и утечки при введении в испаритель хроматографа равновесного газа обычными шприцами. [c.125]

В качестве примера эффективной рециркуляционной хроматографии можно привести выделение комплекса гемоглобин — гаптоглобин из фракции сыворотки на сефадексе 0-200 [77] (фиг. 16). В первом цикле элюировали избыток гемоглобина (заштрихован, Л), а в четвертом цикле можно было получить комплекс Б), очищенный от остальных сывороточных [c.82]

Тонкие различия в первичной структуре родственных белков часто удается выявить методом отпечатков пальцев . Метод этот состоит в том, что белок подвергают частичному перевариванию с помощью одного или нескольких протеолитических ферментов, а затем разделяют продукты гидролиза и идентифицируют их, пользуясь для этого либо электрофорезом, либо хроматографией на бумаге. На фиг. 32 приведены полученные таким способом отпечатки пальцев , или пептидные карты , нормального и аномального гемоглобинов. Детальное изучение этих пептидных карт показывает, что все пептидные пятна, за исключением одного, идентичны. Таким способом генетически измененный структурный элемент выявляется очень легко, и для установления природы структурного изменения нет надобности устанавливать полную аминокислотную последовательность всей молекулы. Действительно, в ряде случаев весьма определенные указания относительно природы имеющегося замещения можно получить просто исходя из результатов анализа аминокислотного состава соответствующих пептидов, выделенных из двух белков. Но, конечно, однозначные доказательства замены одной аминокислоты на другую получают только после установления аминокислотной последовательности анализируемых пептидов. [c.96]

Разработаны различные виды хроматографических методов. Так, известны газовая хроматография, в которой подвижной фазой является газовый раствор, и жидкостная хроматография, в которой подвижная фаза-—жидкость. Эти два типа хроматографии подразделяются далее в зависимости от природы сорбирующей среды. Для адсорбционной хроматографии необходимо твердое вещество (или жидкость) с активной поверхностью. Для ионообменной хроматографии используют цеолиты или органические ионообменные смолы. Для распределительной хроматографии требуется стационарная полярная или неполярная жидкость, нанесенная на какой-либо твердый носитель. Хроматография на бумаге может быть или адсорбционной (если используется только бумага), или распределительной (если стационарная жидкая фаза удерживается бумажной подложкой). На рис. 36.2 приведен весьма впечатляющий пример применения хроматографии на бумаге для анализа гемоглобина. [c.210]

По данным гель-хроматографии строят график с = 1(У), рассчитывают 1 0, коэффициент распределения Ко, КаУ и число теоретических тарелок для глицнпа. Записывают содержание (в мг) гемоглобина и глицина в журнал. [c.245]

По данным гель-хроматографии строят график с = 1С /), рассчитывают Уо, коэффициент распределения Кв, КаУ и числотеоретических тарелок для глицина. Записывают содержание (в мг) гемоглобина и глицина в журнал. [c.245]

Рис. 138. Очистка гаптоглобина из плазмы аф- А финной хроматографией на гемоглобин-сефарозе [Delers et al., 1981] >

Ген, нередко встречающийся у лиц африканского происхождения, вызывает (в случае гомозиготности) тяжелое, часто летальное заболевание, получившее название серповидноклеточная анемия . В 1949 г. Полинг и Итано с сотрудниками обнаружили, что гемоглобин больных серповидноклеточной анемией имеет необычно высокую электрофоретическую подвижностьб. Позднее, в 1957 г., Ингрем разработал метод пептидных карт (гл. 2, разд. 3.2, рис. 4-20) и применил его для исследования гемоглобина. Он расщепил молекулу гемоглобина трипсином на 15 пептидов и разделил полученную смесь с помощью электрофореза и хроматографии. Ему удалось показать, что аномалия, характерная для серповидноклеточного гемоглобина (гемоглобина 5), локализована в Р-цепи (в шестом положении) (рис. 4-17). Глутаминовая кислота, находящаяся в этом положении в нормальном гемоглобине, оказалась замещенной в гемоглобине 5 на валин. Это [c.314]

После того как установлена первичная структура- какого-либо белка, обычно нет необходимости проводить полное изучение аминокислотной последовательности у гомологичных белков из близких (соответствующих) источников. Быстрый ответ можно получить, используя технику трипсинового фингерпринта . Для этого подвергают гидролизу трипсином белок с известной структурой и параллельно ему гомологичный белок полученные в результате гидролиза пептиды разделяют обычно с помощью двумерного электрофореза или хроматографии. Если разница в последовательностях невелика, то больщинство пептидов должны занимать идентичное положение на двумерном фингерпринте. Те немногие пептиды, которые отличаются по подвижности, необходимо элюи-.ровать и подвергнуть аминокислотному анализу по Эдману. Эта техника особенно полезна при изучении аномальных гемоглобинов, которые отличаются от нормального природой только одного участка. [c.276]

Применение ионообменной хроматографии оказалось успешным для таких важных сравнительно низкомолекулярных белков, как лизоцим [123], )ибонуклеаза [60], цитохром С [83, 96], химотрипсиноген [61], инсулин 14] и папаин [73]. В каждом случае разделение производили на смоле R -50 в карбоксильной форме. Разделение смеси белков яичного белка на три компонента было произведено с помощью фронтального анализа на смоле дауэкс-50 [115, 116]. Одновременный электрофоретический анализ исходной альбуминовой фракции подтвердил присутствие трех основных компонентов. Бордман и Партридж [11—13] распространили ионообменную методику на разделение таких больших молекул, как СО-гемоглобин быка и СО-гемоглобин плода овцы. Денатурация была доведена до минимума тем, что работу проводили вблизи 0°. [c.331]

Комплексы сывороточных белков с другими веществами белковой природы могут быть также выделены с помощью гель-хроматографии, как это было уже показано на примере комплекса гемоглобин — гаптоглобин (фиг. 16) [49]. Еще проще количественно определить емкость гемоглобина (способность гемоглобина к комплексообразованию) на сефадексе G-100 [50]. Фракция макроглобулинов (выделение на сефадексе G-200), очевидно, содержит белок, связывающий трипсин [51, 52]. Активность при этом сохраняется лишь частично [51, 52]. Комплексы антиген — антитело часто выделяли на пористых гелях, а затем после разложения на составные части исследовали более подробно (см. литературу, приложение IX). В предыдущем разделе на примере инсулина были рассмотрены возможности изучения растворимых иммунокомплексов. Иммунологические методы в сочетании с гель-фильтрацией играют важную роль в исследовании строения Y-глобулинов. Среди работ на эту тему (см. литературу, приложение X) имеются блестящие исследования, посвященные восстановительному расщеплению и выделению L- и Н-цепей, их рекомбинации, ограниченному действию папаина и, наконец, иммунологическим свойствам интактного белка и его фрагментов. [c.218]

Умеренно полярные акриловые полимеры применяют для адсорбции из водных-растворов таких веществ, как полипептиды, ферменты, антибиотики, гемоглобины, и для газовой хроматографии веществ различных классов. Полимер XAD-7 применяют для жидкостной хроматографии фенолов в водных и водно-метаноль-ных растворах (Fritz J. S., W i 1 1 i s R. В., J. hromatog., 1973, v. 79, p. 107— 119). Полярные полимеры с амино-, амидо- и сульфогруппами применяют для адсорбции из органических растворителей сильнополярных веществ кислот, спиртов, аминов, тиолов, тиокарбамидов. [c.42]

СМ (карбоксиметил)-целлюлоза. Активные группы —ОСНаСООН, слабокислотные (рК = 3,5—4). Рабочая область pH > 4—5, оптимальное значение pH 6. Применяют для разделения нейтральных и основных белков (альбуминов, гемоглобинов, ферментов), основных аминокислот и пептидов, нуклеиновых кислот, липидов, гормонов, а также клеток и их фрагментов. Используют также для распределительной хроматографии в полярных растворителях. [c.160]

Строение гемоглобинов. Существует несколько гемоглобинов кроме гемоглобина А нормального взрослого человека и гемоглобина Р зародыша, различают ряд аномальных или патологических ге моглобинов (С, Е, О, Н, I, 8 и т.д.) на основании их поведения при электрофорезе, хроматографии и по отношению к ферментам. [c.433]

Изучение механизма взаимодействия между гаптоглобином человека, ковалентно связанным с сефарозой 4В, и гемоглобином человека, а также а- и р-цепями, обработанными л-хлормеркурибен-зоатом, проводилось двумя способами изучалось связывание с помощью хроматографии на колонке и связывание а-цепей в равновесных условиях. а+- и р+-Цепи — это цепи, меченные с помощью п-хлормеркури- [ С] бензойной кислоты. Связывание гемоглобина и а+- и р+-ценей на иммобилизованном гаптоглобине (38 нмоль гаптоглобина на 1 мл сефарозы 4В) показано на рис. [c.371]

Известен также метод пептидных карт, позволяющий устанавливать незначительные различия в первичной структуре родственных Б. Для этого Б. частично гидролизуют специфич. протеолитич. ферментами (особенно удобен трипсин, разрывающий пептидные связи у карбонильных п)упп остатков лизина и аргинина), затем пептиды каждого Б pa дeляют электрофорезом и распределительной хроматографией При сравнении полученных пептидных карт различных Б оказывается, что все идентичные пептиды располагаются в определенных (одних и тех же) местах, за исключением пептидов, по к-рым Б отличаются друг от друга Этим методом впервые обнаружено, что при замене одного остатка глутаминовой к-ты в молекуле гемоглобина на остаток валина образуется серповидноклеточный гемоглобин, встречающийся при одном из видов анемии. Методом пептидных карт изучают генетич. аспекты эвотюционных изменений Б. и выявляют изменения Б. при различных заболеваниях. [c.121]

Пероксидаза хрена в действительности не является простым ферментом. По-видимому, у многих, если не у всех, высших растений имеется множество форм пероксидазы (иногда их называют изоферментами) которые удается разделить методами электрофореза и (или) хроматографии. Множественность форм пероксидазы можно сопоставить с неоднородностью, обнаруженной у гемоглобинов (разд. 7.1 и 7.2). В корнеплоде репы найдено, например, семь изоферментов [151 ], а в хрене — около десяти изоферментов [131 ]. Относительная концентрация изоферментов может варьировать в зависимости от времени года [151 или от одной части растения к другой [147]. Подобные колебания в относительной концентрации изоферментов, возможно, связаны с различными и изменяющимися функциями пероксидаз в метаболизме растений. Четыре изофермента пероксидазы хрена, которые удалось выделить в очищенном состоянии, как оказалось, все содержат углеводный фрагмент и имеют примерно одинаковый аминокислотный состав [131]. Природа неоднородности остается неясной. Спектры различных изоферментов пероксидазы хрена почти идентичны, и практически совпадает их ферментативная активность, что облегчает сопоставле- [c.197]

Нин е мы остановимся на одной из последних работ Шредера [42] по ионообменной хроматографии пептидов, представляющей большой интерес как с хроматографической точки зрения, так и по методике детектирования элюатов. В указанной работе производилось разделение триптических гидролизатов а, р и у цепей человеческого гемоглобина путем последовательной хроматографии па катионите Дауэкс 50X2 и анионите Дауэкс 1X2. [c.170]

Рис. 14. Хроматография (а, б) и рехроматография (в, г) гемоглобинов человека на КМ- (а, г) и ДЭАЭ-(б, в)целлюлозах [56].

II, III — фракции после хроматографии и они же после рехроматографии А , А,, Аг, F, Vi, V2 — различные гемоглобины. [c.228]

Часто одни и те же белки можно хроматографировать как на анионообменных, так и на катионообменных целлюлозах. Последовательность элюции белков с этих ионитов должна быть противоположной. Это хорошо иллюстрируется рис. 14 по хроматографии гемоглобинов людей на КМ- и ДЭАЭ-целлюлозах с последующей рехроматографией выделенных фракций [56]. [c.228]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология