Фосфатаза щелочная, определение

В чем заключается принцип метода определения активности щелочной фосфатазы При каких заболеваниях активность щелочной фосфатазы в крови повышается [c.203]

Набор для определения активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по методу Боданского [c.580]

Фосфатазы — ферменты, ускоряющие гидролиз эфиров фосфорной кислоты. Щелочной фосфатазой называют фосфа-тазу, оптимум pH которой находится в щелочной среде. В организме субстратом действия этого фермента является фосфоглицериновая кислота, однако специфичность фос-фатаз не велика и они гидролизуют многие другие эфиры фосфорной кислоты. Для обнаружения фосфатаз и их количественного определения используют в качестве субстратов такие бесцветные эфиры фосфорной кислоты, которые под действием фосфатаз распадаются на фосфат и окрашенное соединение. Активность фосфатазы оценивают по интенсивности окраски. Примером такого субстрата является нитрофенилфосфат, распадающийся при участии фосфатазы на фосфат и нитрофенол, имеющий желтый цвет [c.234]

Определение фосфатазы (кислой и щелочной) в сыворотке [c.350]

Работа 106. Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови (метод Бесия и Лоури [c.196]

Применение. В качестве субстрата для определения щелочной фосфатазы а крови, молоке и молочных продуктах, а также кислой фосфатазы в мясо- продуктах. . [c.296]

Для отбора клеток, содержащих рекомбинантную ДНК, используют специальные приемы. Чтобы уменьшить количество кольцевых плазмидных молекул, образующихся ири сшивании фрагментов ДНК-лигазой Т4, рестрицированную плазмидную ДНК обрабатывают щелочной фосфатазой, удаляющей 5 -концевые фосфатные группы. Для отбора трансформированных клеток, содержащих гибридные плазмиды, проводят 1) тестирование на резистентность к определенным антибиотикам или колориметрическую реакцию 2) иммунологические тесты или выявление специфического белка - продукта клонированного гена 3) гибридизацию с зондом, комплементарным како-му-либо участку искомого гена. [c.78]

Пригодность для определения щелочной фосфатазы — испытание [c.296]

Существует несколько методов определения фосфатазной активности продуктов. Для каждого вида фосфатаз разработаны свои методы например, методы определения щелочных фосфатаз, кислых фосфатаз фосфатаз растительного и животного происхождения и т. д. Универсаль ного метода, который в той или иной мере мог бы служить общим мето дом для данной группы ферментов, нет. В каждом отдельном случае рекомендуют использовать определенный известный метод. [c.77]

Определение ведется так же, как при щелочной фосфатазе, и единица та же. Содержание кислой фосфатазы в крови нормального человека значительно ниже, чем количество щелочной,— оно равно 0,04—0,64 единицы. Содержание кислой фосфатазы повышается при раке предстательной железы, особенно при метастазах ее в костях. [c.351]

В связи с этим существует быстрый метод определения эффективности пастеризации молока при температуре ниже 80 °С по активности щелочной фосфатазы ( фосфатазная проба ). [c.151]

Применение. В гистохимии в качестве субстрата для определения Щелочной и кислой фосфатаз ti—6]. [c.296]

Определение фосфатазы имеет довольно большое значение в диагностике некоторых заболеваний, в частности на содержание в плазме крови кислой фосфатазы сильно влияет метаста-зирующий рак предстательной железы, а на содержание щелочной фосфатазы — рахит и заболевания печени. [c.350]

При определении активности щелочной фосфатазы в лаборатории используют различные субстраты Р-гли-церофосфат, р-нафтилфосфат, п-нитрофенилфосфат, аде-нозин-5-монофосфат и др. п-Нитрофенилфосфат расщепляется щелочной фосфатазой в три раза быстрее, чем другие субстраты, поэтому чаще используется в лаборатории. , [c.196]

Набор химических реактивов для определения активности сорбитолдегидрогеназы в сыворотке крови ТУ 6-09-4100—75 Набор химических реактивов для определения щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по методу Боданского ТУ 6-09-3860-75 [c.381]

Так как содержание кислой фосфатазы в плазме крови в норме невелико, кровь следует брать в небольшом разведении. Удобнее пользоваться сывороткой крови — 0,2 мл, которую разводят физиологическим раствором в 5 раз, а затем берут геометрически возрастающие разведения в ряд пробирок, как при определении щелочной фосфатазы. Хлористого магния не прибавляют. [c.354]

Диагностика печёночной недостаточности. Весьма привлекательными, с точки зрения ранней диагностики заболеваний, являются тесты, направленные на диагностику функционального состояния печени. Используемые в настоящее время методы диагностики печёночной недостаточности, в большинстве своём, основаны на измерении определённых параметров крови, которые меняются при поражении печёночных клеток. Наиболее распространённые методы взятие тимоловых проб определение полного билирубина, сывороточного альбумина, щелочной фосфатазы и некоторые другие. Общим недостатком вышеупомянутых методов является констатация уже произошедших патологических изменений. Однако хорошо известно, что лечение дис- [c.472]

Во многих случаях конформационные изменения белков связаны с ассоциацией или диссоциацией субъединиц. Маловероятно, что такие процессы могут протекать достаточно быстро, чтобы они были существенны при каждом превращении молекулы субстрата, так что их роль, по-видимому, сводится к контролю ферментативной активности. На вопрос, связаны ли все эти процессы с изменением конформации отдельных субъединиц, до настоящего времени не было найдено определенного ответа, однако весьма вероятно, что в большинстве случаев такие изменения имеют место, и было бы весьма удивительно, если бы столь большие структурные перестройки происходили бы без соответствующего конформационного изменения субъединиц. В случае щелочной фосфатазы из Е. соИ было показано, что зависящее от времени конформационное изменение кислотно диссоциирующих субъединиц должно иметь место до того, как частицы ассоциируются в нативный фермент [57]. [c.243]

Определение ее в сыворотке крови имеет клинико-диагностическое значение. Активность щелочной фосфатазы резко повышается в сыворотке при рахите, остеомаляции, остеосаркомах, при заболеваниях печени (механическая желтуха, биллиарный цирроз). В некоторых случаях повышение активности щелочной фосфатазы является почти единственным признаком злокачественного заболевания печени. В меньшей мере активность фермента увеличивается при гепатитах. [c.196]

Ферменты, используемые в ИФА в качестве маркеров, должны отвечать ряду требований иметь высокую активность и стабильность в условиях анализа чувствительный и простой метод определения продуктов или субстратов ферментативной реакции сохранять активность и стабильность после конъюгирования с антителами быть доступным при высокой степени чистоты. Непременным условием является отсутствие фермента и его ингибиторов в исследуемых биологических жидкостях. Всем этим требованиям отвечают наиболее часто применяемые в ИФА пероксидаза и щелочная фосфатаза. [c.317]

Для каждого фермента имеется определенное значение pH, при котором скорость катализируемой реакции максимальна (оптимум pH). В таблице 8 приведены значения оптимумоа pH для некоторых гидролитических ферментов. Видно, что эти значения сильно различаются так, например, для пепсина оптимум находится при pH 1,5, а для щелочной фосфатазы — 9,0 — 10,0. Большинстао ферментов имеют оптимум pH а нейтральной области (7,0 —8,U). [c.185]

Иммуноанализ проводят следующим образом. Полистирольные пробирки (80X11 мм) покрываются антителами при обработке 1 мл раствора антител. Растворы антител разбавляют ОД М N a-карбонатного буфера (pH 9,8) или фосфатным (солевым) буфером. Пробирки с этими растворами оставляют на 3 ч при 37 °С для хранения раствор оставляют в пробирках на холоду. Перед определением необходимое число пробирок промывают 0,9%-ным хлоридом натрия, содержащим 0,05% твина 20. В каждую пробирку помещают 0,5 мл одного из следующих растворов 1) стандартный раствор иммуноглобулина G, 2) неизвестный образец, 3) буферный раствор. После этого добавляют 0,1 мл разбавленного конъюгата щелочной фосфатазы и иммуноглобулина G (приготовленного с помощью сщивапия глутаровым альдегидом). Для разбавления используют фосфатный (солевой) буферный раствор, содержащий 1% сывороточного альбумина человека и 0,02% азида натрия. Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) на роторной мешалке так, чтобы поверхность, покрытая антителами, покрывалась 0,6 мл раствора, находящегося в каждой пробирке. Затем пробирки промывают три раза раствором Na l-твин. Количество фермента, присоединенного к иммуноглобулину G, связанному стенками пробирок, покрытых антителами, определяют, добавляя 1 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера (pH 9,8), содержащего 1 мг/мл п-нитрофенилфосфата и 1 ммоль/л хлорида. магния. Через 30 мин реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл 1 М ХаОН. Измеряют оптическую плотность при 400 нм и строят стандартный график зави-си.мости ферментативной активности (изменение оптической плотности в единицу времени) индивидуальных образцов от содержания в них иммуноглобулина G. [c.382]

Ингвал и др. [324] применилн принцип радиоиммуноанализа, описанный для определения кроличьего иммуноглобулина G однако вместо меченных радиоактивным изотопом антигенов они конъюгировали последние с ферментом — щелочной фосфатазой. Основой конкурентного иммуноаналнза является разделение свободных и связанных с антителами антигенов, так чтобы антигены можно было определить количественно. Это разделение можно облегчить фиксацией антител на твердой фазе путем физической сорбции на стенках полистирольных пробирок. [c.382]

Применение. В гистохимии ферментов в качестве субстрата для выявления кислых фосфатаз методами последующего и одновременного азосочеуания [1—5J, Метод применим только для определения кислой фосфатазы, так как образующийся при ферментативной реакции нафтол-2 заметно растворим в щелочной среде [Берстон, 155]. [c.75]

Применение. В микроскопии в качестве y6 Tpata для биохимического определения щелочной и кислой фосфатаз [1—7]. [c.411]

Содержание этих ферментов может резко изменяться (обычно увеличиваться) при ряде заболеваний амилазы при поражениях поджелудочной железы, щелочных фосфатаз — при рахите, кислых фосфатаз — при раке предстательной железы, аминофераз, дегидрогеназ, креатинкиназы и альдолазы — при инфаркте миокарда, различных мпопатиях, заболеваниях печени и т. д. Определение активности названных ферментов может представлять, таким образом, значительный клинический интерес. [c.478]

И механизмах реакций. Один из главных методов нолучепия такой информации основывается на определении начальной скорости реакции, а также на выявлении типа ингибирования исходя из кинетических данных в условиях стационарного состояния (см. гл. VI). Ценные сведения удается также часто получать с помощью меченых соединений. Изотопы многих элементов, например С , ЬР, и 3 , радиоактивны, благодаря чему их можно отличать от обычных изотопов тех же элементов. Другие изотопы, например Н2, N15 д 018 отличаются от обычР1ых изотопов соответствующих элементов только массой и, следовательно, могут быть определены по масс-спектрам Изотопный метод используют обычно в экспериментах двух типов — в опытах по включению изотопов и в опытах по изотопному обмену. Эксперименты первого типа, вообще говоря, позволяют выявлять положение образующихся и разрывающихся связей однако в некоторых случаях они также дают возможность идентифицировать промежуточные продукты реакции. Опыты по изотопному обмену, в процессе которого происходит замещение имеющейся группы на аналогичную меченую группу, дают информацию о существовании промежуточных продуктов реакции. Ознакомимся с исследованиями первого типа на примере расщепления глюкозо-1-фосфата щелочной фосфатазой. Эту реакцию, очевидно, можно представить себе как результат расщепления либо С — 0-связи, либо Р — О-связи. Если проводить ее в водной среде, обогащенной НгО , то первый из двух возмон ных путей должен привести к глюкозе, содержащей один атом О [c.201]

Методы обнаружения в слюне амилазы и мальтазы, а также метод количественного определения амилазной активности слюны рассматривались при изучении свойств ферментов. Ферменты, выделяемые в слюну бактериями, например альдолаза и щелочная фосфатаза, могут быть обнаружены в слюне теми же методами, что и в тканях или сыворотке крови животных (см. стр. 177 и 234). [c.260]

Во все пробирки приливают по 0,5 мл 0,4%-ного раствора субстрата в ацетатном буфере с pH 5,0 и, закрыв пробками, ставят на 30 минут в водяной термостат при 37°. По истечении этого времени почти бесцветный раствор в пробирках быстро подщелачивают прибавлением в каждую из них по 2 капли 2 н. раствора NaOH. При этом отщепленный р-нитрофенол дает желтое окрашивание. Находят в ряду пробирок окрашивание, равное стандартной пробирке — той же, что при определении щелочной фосфатазы. При расчете учитывается степень разведения сыворотки. У здоровых людей по этой методике авторы находили 2—8 ед/мл. [c.354]

Дело в том, что скорость синтеза данного фермента в клетке регулируется в очень широких пределах. Для двух белков Е. oli (щелочной фосфатазы и 3-галактозидазы) установлено, что скорость синтеза в соответствующих условиях вырастает в тысячу раз, а подобный особенно интенсивно синтезируемый фермент составляет до 5—10% всей массы белка, производимого клеткой (против нескольких сотых процента в обычных условиях). Подобные изменения в кинетике синтеза какого-либо определенного белка вызываются изменением среды, например заменой глюкозы в окружающей среде на лактозу (так называемое действие индуктора). Реакция клетки на изменения в окружающей среде очень быстрая. За 40 сек. устанавливается новая скорость синтеза фермента (3-галактозидазы, соответствующая действию индуктора на синтетический аппарат клетки. Так как 40 сек. — время малое по сравнению с временем генерации культуры, то и число рибосом, синтезированных клеткой за это время, ничтожно. [c.461]

Ферменты, которые катализируют гидролиз /производных фосфата, называются фосфатазами [5]. Существует несколько ферментов, роль которых, по-видимому, заключается в образовании ортофосфата из моноэфиров фосфорной кислоты. Они малочувствительны к природе заместителя в фосфате и называются неспецифическими фосфомоноэстеразами. Существуют, однако, заметные различия в диапазонах pH, в которых они работают, и поэтому они делятся на кислые [19] и щелочные [20] фосфатазы, хотя бывают и промежуточные случаи. Другие фосфатазы действуют на определенные субстраты, такие, как глюкозо-б-фосфат [21], фосфосерин [21] и 5 -нуклеотиды [22]. Важным ферментом является неорганическая пирофосфатаза [23], поскольку гидролиз пирофосфата сопряжен со всеми синтетазными реакциями. Некоторые киназы обнаруживают небольщую АТФ-азную активность. Активную АТФ-азу можно выделить из разрущенных митохондрий [9], и она без сомнения участвует в окислительном фосфорилировании, посредством которого обращается гидролитическая реакция. [c.633]

II 5 -мононуклеотиды разделяют с номогцью электрофореза при pH 3,5. Этот метод обычно иснользуется для определения 5 -концевых остатков в дефосфорилированных олигонуклеотидах, образующихся при гидролизе РНК Тгрибонуклеазой и бактериальной щелочной фосфатазой. При этом Г) -концовой остаток высвобождается из олигонуклеотида в виде нуклеозида его можно идентифицировать как остаток, который присутствует в продуктах гидролиза, получонных нри использовании щелочной фосфатазы и отсутствует в продуктах гидролиза, полученных при использовании фос- однэстеразы. [c.65]

Работа 21. Определение активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по гидролизу Р-глицерофосфата (метод Боданского), УИРС [c.88]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология