Фосфатаза щелочная, определение активности

Таблица 4.27. Определение активности щелочной фосфатазы

В чем заключается принцип метода определения активности щелочной фосфатазы При каких заболеваниях активность щелочной фосфатазы в крови повышается [c.203]

Набор для определения активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по методу Боданского [c.580]

Фосфатазы — ферменты, ускоряющие гидролиз эфиров фосфорной кислоты. Щелочной фосфатазой называют фосфа-тазу, оптимум pH которой находится в щелочной среде. В организме субстратом действия этого фермента является фосфоглицериновая кислота, однако специфичность фос-фатаз не велика и они гидролизуют многие другие эфиры фосфорной кислоты. Для обнаружения фосфатаз и их количественного определения используют в качестве субстратов такие бесцветные эфиры фосфорной кислоты, которые под действием фосфатаз распадаются на фосфат и окрашенное соединение. Активность фосфатазы оценивают по интенсивности окраски. Примером такого субстрата является нитрофенилфосфат, распадающийся при участии фосфатазы на фосфат и нитрофенол, имеющий желтый цвет [c.234]

Работа 106. Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови (метод Бесия и Лоури [c.196]

Объясните принцип метода определения активности щелочной и кислой фосфатазы. [c.94]

Навеску почвы 1 г помещают в колбу Эрленмейера на 50 см , приливают 0,9 см дистиллированной воды для увлажнения почвы до 90% (при определении активности щелочной и кислой фосфатаз вместо воды приливают такое же количество боратного буфера с pH соответственно 5,3 и 9,0). Затем прибавляют 1 см раствора, содержащего 5 мг Р-глицерофосфата натрия. Колбы закрывают пробками, взбалтывают 5 мин. на ротаторе и помещают в термостат при температуре 30°С на [c.345]

Определение активности 1,2 щелочной фосфатазы (К. Ф. 3. [c.243]

При определении активности щелочной фосфатазы в лаборатории используют различные субстраты Р-гли-церофосфат, р-нафтилфосфат, п-нитрофенилфосфат, аде-нозин-5-монофосфат и др. п-Нитрофенилфосфат расщепляется щелочной фосфатазой в три раза быстрее, чем другие субстраты, поэтому чаще используется в лаборатории. , [c.196]

Набор химических реактивов для определения активности сорбитолдегидрогеназы в сыворотке крови ТУ 6-09-4100—75 Набор химических реактивов для определения щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по методу Боданского ТУ 6-09-3860-75 [c.381]

Воздействие поверхности носителя на ферментную глобулу сводится к изменению ее третичной структуры. Экстраполяция к б = О позволяет найти удельную активность изолированных глобул на носителе. Для ряда мембранных ферментов, таких как сукцинатдегидрогеназа, щелочная фосфатаза или цитохром с, наблюдается заметная активация, существенно зависящая от природы взятого носителя, а наибольшие эффекты найдены при адсорбции ферментов на фосфолипидных слоях. Эти данные показывают, что адсорбция фермента на мембране может выступать как мощный фактор регуляции каталитической активности, а определение природы активирующей по- [c.294]

Существует несколько методов определения фосфатазной активности продуктов. Для каждого вида фосфатаз разработаны свои методы например, методы определения щелочных фосфатаз, кислых фосфатаз фосфатаз растительного и животного происхождения и т. д. Универсаль ного метода, который в той или иной мере мог бы служить общим мето дом для данной группы ферментов, нет. В каждом отдельном случае рекомендуют использовать определенный известный метод. [c.77]

Оценка результатов исследования. Как известно, определение активности щелочной фосфатазы является одной из функциональны, проб печени. Заметное повышение ее активности сопровождает, как правило, болезнь Боткина и ме.ханическую желту.чу. Профессиональные хронические токсико-химические поражения печени обычно протекают без заметного изменения активности щелочной фосфатазы. Однако в отдельных случаях хронических интоксикаций (гексахлоран) наблюдалось повышение активности этого фермента до 7 единиц. [c.89]

В связи с этим существует быстрый метод определения эффективности пастеризации молока при температуре ниже 80 °С по активности щелочной фосфатазы ( фосфатазная проба ). [c.151]

Принцип. Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови определяют по количеству неорганического фосфора, отщепленного в присутствии сыворотки от органического субстрата (р-глицерофосфата натрия) через определенный промежуток времени. [c.87]

ООО. Охарактеризованные таким образом препараты были использованы для определения активности антител к динитро-фенильным группам по отношению к ДНФ-желатине, иммобилизованной на поверхности лунок. Полученные результаты (рис. 14-10) согласуются с выводами о том, что сигмоидный характер кривой титрования в области высоких концентраций антител обусловлен пространственными затруднениями. Наибольшим сходством с кривой связывания первичных антител обладает кривая титрования конъюгата, имеющего состав [1 молекула Fab — 1 молекула щелочной фосфатазы]. [c.230]

Во многих случаях конформационные изменения белков связаны с ассоциацией или диссоциацией субъединиц. Маловероятно, что такие процессы могут протекать достаточно быстро, чтобы они были существенны при каждом превращении молекулы субстрата, так что их роль, по-видимому, сводится к контролю ферментативной активности. На вопрос, связаны ли все эти процессы с изменением конформации отдельных субъединиц, до настоящего времени не было найдено определенного ответа, однако весьма вероятно, что в большинстве случаев такие изменения имеют место, и было бы весьма удивительно, если бы столь большие структурные перестройки происходили бы без соответствующего конформационного изменения субъединиц. В случае щелочной фосфатазы из Е. соИ было показано, что зависящее от времени конформационное изменение кислотно диссоциирующих субъединиц должно иметь место до того, как частицы ассоциируются в нативный фермент [57]. [c.243]

У здоровых индивидов на содержание щелочной фосфатазы не оказывает значительного влияния 18-часовое голодание, диета с высоким содержанием белка и потребление большого количества жира в течение 40 час. При рахите активность фермента очень высока и медленно, но определенно спадает при диетотерапии. [c.97]

Буфер и pH. Все ферменты характеризуются определенным рН-оптимумом активности. Этот диапазон максимальной активности может иметь весьма узкий интервал. рН-Оптимум активности зависит от ионной силы, вида используемого буфера и меняется с температурой. Например, для щелочной фосфатазы рН-оптимум при температурах 37, 30 и 25°С составляет 9,9 10,1 и 10,3 соответственно. [c.59]

Фотометрический метод определения каталитической активно сти щелочной фосфатазы с использованием 4-нитрофенилфосфата [c.74]

Кроме того, эти авторы обнаружили изменения в количестве или активности некоторых печеночных ферментов. Количественных определений не производилось сдвиги регистрировались по интенсивности специфических гистохимических цветных реакций на эти ферменты, с помощью обычных методов связывания азокрасителей. Активности кислой фосфатазы, неспецифической эстера-зы и сукциндегидразы в паренхиматозных клетках печени были значительно снижены, тогда как щелочная фос-фатаза в купферовских и тучных клетках была повышена. [c.525]

Содержание этих ферментов может резко изменяться (обычно увеличиваться) при ряде заболеваний амилазы при поражениях поджелудочной железы, щелочных фосфатаз — при рахите, кислых фосфатаз — при раке предстательной железы, аминофераз, дегидрогеназ, креатинкиназы и альдолазы — при инфаркте миокарда, различных мпопатиях, заболеваниях печени и т. д. Определение активности названных ферментов может представлять, таким образом, значительный клинический интерес. [c.478]

Работа 21. Определение активности щелочной и кислой фосфатаз в сыворотке крови по гидролизу Р-глицерофосфата (метод Боданского), УИРС [c.88]

Определение кислых фосфатаз широко используется для диагностики новообразований предстательной железы. Повышение активности кислой фосфатазы при нормальном уровне щелочной указывает на новообразование предстательной железы. Активность фермента особенно повышается при метастазировании рака предстательной железы. Введение тестостерона (провокационные пробы) увеличивает число положительных фосфатазных проб. При метастазе карциномы предстательной железы в кости может нарастать и активность щелочной фосфатазы. Замечено также, что активность ревматического процесса сопровождается возрастанием активности кислой фосфатазы. Наиболее высокая активность фермента наблюдается у больных с затяжным и непрерывно рецидивирующим процессом. Активность щелочной фосфатазы в норме равнаО,5-1,3 ммоль/(ч л), а кислой — [c.89]

Определение ее в сыворотке крови имеет клинико-диагностическое значение. Активность щелочной фосфатазы резко повышается в сыворотке при рахите, остеомаляции, остеосаркомах, при заболеваниях печени (механическая желтуха, биллиарный цирроз). В некоторых случаях повышение активности щелочной фосфатазы является почти единственным признаком злокачественного заболевания печени. В меньшей мере активность фермента увеличивается при гепатитах. [c.196]

Какова функция мембранно-связанных ферментов на примере Ка+, К+ —АТФ-азы 2. Назовите маркерные ферменты а) длн плазматических мембран б) для митохондрий в) для ядер г) для микросом. 3. Какие требования предъявляются к ферментам-маркерам 4. Чем могут быть обусловлены артефакты при определении маркерных ферментов плазмати сских мембран 5. Примеси каких оргаиелл присутствуют во фракции плазматических мембран 6. На чем основано определение активности Na+, К+ — АТФ-азы, 5 -нуклеотидазы, щелочной фосфатазы [c.244]

Иммуноанализ проводят следующим образом. Полистирольные пробирки (80X11 мм) покрываются антителами при обработке 1 мл раствора антител. Растворы антител разбавляют ОД М N a-карбонатного буфера (pH 9,8) или фосфатным (солевым) буфером. Пробирки с этими растворами оставляют на 3 ч при 37 °С для хранения раствор оставляют в пробирках на холоду. Перед определением необходимое число пробирок промывают 0,9%-ным хлоридом натрия, содержащим 0,05% твина 20. В каждую пробирку помещают 0,5 мл одного из следующих растворов 1) стандартный раствор иммуноглобулина G, 2) неизвестный образец, 3) буферный раствор. После этого добавляют 0,1 мл разбавленного конъюгата щелочной фосфатазы и иммуноглобулина G (приготовленного с помощью сщивапия глутаровым альдегидом). Для разбавления используют фосфатный (солевой) буферный раствор, содержащий 1% сывороточного альбумина человека и 0,02% азида натрия. Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение ночи (16 ч) на роторной мешалке так, чтобы поверхность, покрытая антителами, покрывалась 0,6 мл раствора, находящегося в каждой пробирке. Затем пробирки промывают три раза раствором Na l-твин. Количество фермента, присоединенного к иммуноглобулину G, связанному стенками пробирок, покрытых антителами, определяют, добавляя 1 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера (pH 9,8), содержащего 1 мг/мл п-нитрофенилфосфата и 1 ммоль/л хлорида. магния. Через 30 мин реакцию останавливают, добавляя 0,1 мл 1 М ХаОН. Измеряют оптическую плотность при 400 нм и строят стандартный график зави-си.мости ферментативной активности (изменение оптической плотности в единицу времени) индивидуальных образцов от содержания в них иммуноглобулина G. [c.382]

Оценка обеспеченности организма витамином Д. Обеспеченность орга-низма витамином Д оценивается на основании определения активных форм витамина Д в крови и тканях методом радиоконкурентного анализа содержания кальция, фосфора и активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови уровня экскреции с мочой фосфатов. Применяются также нагрузочные пробы с приемом фиксированных доз кальция при парентеральном введении с последующим определением содержания кальция в крови и его экскреции с мочой. [c.77]

Ферменты, используемые в ИФА в качестве маркеров, должны отвечать ряду требований иметь высокую активность и стабильность в условиях анализа чувствительный и простой метод определения продуктов или субстратов ферментативной реакции сохранять активность и стабильность после конъюгирования с антителами быть доступным при высокой степени чистоты. Непременным условием является отсутствие фермента и его ингибиторов в исследуемых биологических жидкостях. Всем этим требованиям отвечают наиболее часто применяемые в ИФА пероксидаза и щелочная фосфатаза. [c.317]

Методы обнаружения в слюне амилазы и мальтазы, а также метод количественного определения амилазной активности слюны рассматривались при изучении свойств ферментов. Ферменты, выделяемые в слюну бактериями, например альдолаза и щелочная фосфатаза, могут быть обнаружены в слюне теми же методами, что и в тканях или сыворотке крови животных (см. стр. 177 и 234). [c.260]

Ферменты, которые катализируют гидролиз /производных фосфата, называются фосфатазами [5]. Существует несколько ферментов, роль которых, по-видимому, заключается в образовании ортофосфата из моноэфиров фосфорной кислоты. Они малочувствительны к природе заместителя в фосфате и называются неспецифическими фосфомоноэстеразами. Существуют, однако, заметные различия в диапазонах pH, в которых они работают, и поэтому они делятся на кислые [19] и щелочные [20] фосфатазы, хотя бывают и промежуточные случаи. Другие фосфатазы действуют на определенные субстраты, такие, как глюкозо-б-фосфат [21], фосфосерин [21] и 5 -нуклеотиды [22]. Важным ферментом является неорганическая пирофосфатаза [23], поскольку гидролиз пирофосфата сопряжен со всеми синтетазными реакциями. Некоторые киназы обнаруживают небольщую АТФ-азную активность. Активную АТФ-азу можно выделить из разрущенных митохондрий [9], и она без сомнения участвует в окислительном фосфорилировании, посредством которого обращается гидролитическая реакция. [c.633]

При определенных патологических состояниях — болезни Пэджета, гиперпаратиреозе, желтухе, вызванной закупоркой желчных протоков, — активность щелочной фосфатазы может превышать средние нормальные значения в 10—50 раз [2]. [c.97]

Метод очистки -эндорфина, секретируемого в среду клетками Е. oli [43], приведен в табл. 4.25. Для подтверждения того факта, что -эндорфин действительно секретировался в культуральную среду, а не проникал туда из периплазматического пространства, определяли активность периплазматических фер-ментов-маркеров -лактамазы [47] (табл. 4.26) и щелочной фосфатазы [48] (табл. 4.27). После очистки рекомбинантных полипептидов, секретируемых в среду, гель-фильтрацией и обратнофазовой ЖХВД определяли их аминокислотный состав в целом и N-концевые аминокислотные последовательности. Результаты определения N-концевых аминокислотных последовательностей выявили гетерогенность N-концов, но во всех полипептидах отсутствовали сигнальные последовательности. Гетерогенность, по-видимому, обусловливается действием протеиназ [42]. [c.131]

Обнаружение и количественное определение фосфатазной активности проводят также с другим флуорогенным субстратом—нафтол-А5-МХ-фосфатом (2-окси-3-амидо-М- (2 , 4 диметил-фенил)-нафталинфосфатом), который под действием фосфатаз превращается в сильно флуоресцирующее соединение. Инглис и др. [611] применили для этой цели метод индикаторного геля. Для его приготовления 2 /о-ный агар смешивают с равным объемом раствора 4 мМ нафтол-АЗ-МХ-фосфата в 0,4 М 2-ами-нО 2-метил-1-пропаноловои буфере (pH 11,2). После электрофореза пленки из ацетата целлюлозы кладут на пластину этого геля, тщательно разглаживая их, и инкубируют при 37 °С. При освещении пленок УФ-светом в тех местах, где произошла реакция, появляется флуоресценция. С помощью сканирующего устройства в УФ-свете можно проводить количественное определение фермента. Аналогичный метод был описан для выявления щелочных фосфатаз после электрофореза на ацетате целлюлозы [110]. [c.300]

Наибольшее распространение в гетерогенном ИФА среди ферментов, удовлетворяющих перечисленным выше требованиям, получили пероксидаза хрена (КФ 1.11.1.7), щелочная фосфатаза (КФ 3.1.3.1) и р- )-галактозидаза (КФ 3.2.1.23). Все три фермента определяются на уровне пикомолярных концентраций. Наиболее доступной является пероксидаза. Она содержит легко окисляемые перйодатом углеводные остатки, через которые может осуществляться связывание фермента, с антителами или антигенами. В состав субстратной системы для измерения активности пероксидазы фотометрическим способом входят хромогены, дающие при окислении перекисью окрашенные соединения. При работе с большинством из них следует учитывать их канцерогенные и мутагенные свойства и соблюдать осторожность. Каталитическая активность глюкозооксидазы регистрируется с теми же хромогенами, что и пероксидазы, однако чувствительность ее определения по сравнению с пероксидазой несколько ниже. Основным достоинством фермента является полное отсутствие его в плазме крови, что дает возможность использования фермента в гомогенных методах ИФА. [c.64]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология