Антитела против антител к lq

Приведенные данные и ряд других результатов свидетельствуют о том, что клеточные рецепторы различных лигандов способны взаимодействовать с антителами против антител к соответствующему лиганду, т. е. с антиидиотипическими антителами. Специфичность взаимодействия подтверждается как фактом конкуренции антиидиотипического антитела и лиганда за рецептор, [c.51]

Как известно, макрофаги экспрессируют рецептор для lq (см. гл. 3 и 5). Активный центр этого рецептора содержит структуры, являющиеся детерминантами для антител против антител к lq (см. разд. 3.2). Моновалентные Fab-фрагменты указанных антиидиотипических антител блокируют активный центр рецептора для lq, эффективно конкурируя с последним. Это определяет возможность использования РаЬ-фрагментов антиидиотипических антител для оценки роли рецептора в регуляции биосинтеза белка, распознаваемого этим рецептором. Как показали выполненные эксперименты (А. Я. Кульберг и др., 1986), добавление в среду РаЬ-фрагментов антител против антител к lq приводит к подавлению биосинтеза lq покоящимися перитонеальными макрофагами (рис. 22). Одновременно в этих же условиях был исследован биосинтез других белков, продуцируемых макрофагами. Для этого с помощью иммобилизованных антител из препаратов извлекали lq, а остальные белки (как внутриклеточные, так и присутствующие в культуральной жидкости) осаждали трихлоруксусной кислотой и определяли их радиоактивность. Оказалось, что в присутствии РаЬ-фрагментов антиидиотипических антител биосинтез водорастворимых белков макрофага (за исключением lq) не изменяется. Таким образом, избирательное блокирование активного центра рецептора для lq сопровождается подавлением биосинтеза только lq. [c.88]

Следует использовать радиоиммунологический анализ. Для этого можно связать препарат с альбумином бычьей сыворотки и иммунизировать кролика, чтобы получить антитело против препарата. Далее следует получить радиоактивную форму препарата, после чего построить калибровочный график путем прибавления различных количеств нерадиоактивного препарата к постоянному количеству радиоактивного в смеси с антителом. Затем к смеси радиоактивного препарата и антитела нужно прибавить различные аликвоты крови, определяя при этом количество препарата по калибровочному графику. [c.553]

К началу фазы торможения в организме животного и человека уже успевает накопиться значительное количество антител против использовавшегося для иммунизации антигена. Напрашивается предположение, что именно эти антитела по принципу обратной связи, плюс — минус взаимодействия по М. М. Завадовскому (1931) тормозят синтез клетками таких же антител. И, действительно, показано, что антитела, присутствующие в кровотоке или культуральной среде, могут тормозить антителообразование. [c.146]

Сложность иммунного ответа связана отчасти с тем, что другие клетки, в особенности Т-лимфоциты и макрофаги, изменяют реакцию В-клеток на антиген. В отсутствие активирующего действия антигена процесс деления большей части лимфоцитов заторможен. Т-клетки, а они представлены по меньшей мере тремя типами, могут либо стимулировать клеточное деление после связывания антигена, либо продолжать подавлять его. Видимо, торможение имеет место в том случае, когда иммунная система узнает о наличии в антигене детерминанты, присутствующей также на поверхностях собственных клеток организма. Совершенно очевидно, что различение своих и чужих антигенов чрезвычайно важно для иммунной системы. Аналогично тому как нервная система находится обычно в заторможенном состоянии и только иногда по ней осуществляется проведение потока импульсов, так и иммунная система в основном ингибирована и лишь в определенных случаях развивается клон плазматических клеток. Торможение иммунологической активности обусловлено отчасти синтезом антител против других антител, а именно против антител, функционирующих в качестве рецепторов на поверхности В-клеток. [c.366]

Последовательность используемых реагентов такова раствор, содержащий тестируемый белок (этап 2), затем антитела кролика, специфичные к белку (этап 3), наконец, меченые специфические антитела против IgG кролика (этап 4). Таким образом, меченые антитела будут реагировать только со специфическими к белку антителами, добавленными на этапе 5, а не с антителами, сорбированными пластиком. Эти высокочувствительные методы, не требующие больших расходов антител и весьма хорошо приспособленные для количественного определения большого числа образцов, находят все большее применение. [c.108]

Гомологичные белки разного происхождения могут иметь определенное структурное сходство, которое характеризуется более или менее сильными реакциями со специфическими антителами против одного из этих белков, взятого в качестве иммуногена. Такие перекрестные реакции между индивидуальными, отдельно взятыми белками разного происхождения использовались в исследованиях по систематике и филогенезу [111]. Но непредвиденные перекрестные реакции могут также обнаружиться у белков, которые явно не сходны между собой ни в функциональном, ни в эволюционном отношении однако они тем не менее имеют структурное сходство, которое подтверждено анализом последовательностей аминокислот [52]. Поэтому такие перекрестные реакции интересны с методической точки зрения при исследованиях структурных гомологий, но могут также представлять неудобства в некоторых областях, как, например, выявление происхождения белков в пищевых продуктах. При решении некоторых из этих проблем распознавания, по существу, необходимо, чтобы специфические антитела к белкам растения какого-то определенного ботанического вида не давали перекрестной реакции с белками растения соседнего вида. Недавно описаны возникающие на практике трудности в связи с использованием антисывороток, вызывающих недостаточно контролируемые и приводящие к ошибочным результатам пере- [c.114]

Иммуноэлектронно-микроскопические наблюдения, где использовались антитела против пуромицина, ковалентно фиксированного в пептидилтрансферазном центре/ также указывали на его положение у головки (центрального протуберанца) 50S субчастицы, но скорее с другой стороны, а именно со стороны L1 ребра (хотя нельзя исключать, что последнее могло бы быть артефактом вследствие искажения положения антитела при специфической ориентации 50S субчастицы —контактирующей стороной к подложке). В целом можно утверждать, что пептидилтрансферазный центр на 50S субчастице должен быть расположен на ее контактирующей (вогнутой) поверхности, где-то совсем рядом с головкой (центральным протуберанцем), скорее всего в районе желобка, отделяющего головку от остального тела. [c.152]

Другие эксперименты указывают на существование в -бел-ках, распознающих гаптены, антигенных детерминант, которые взаимодействуют с антителами против антител к соответствующим гаптенам, т. е. с антиидиотипическими антителами. Эти данные хорошо согласуются с результатами изучения рецепторов к таким белковым лигандам, как инсулин и lq. В своей совокупности они могут означать, что антитела и рецепторы нелимфоидных клеток, распознающие идентичные структуры в лигандах, сходны по идиотипу, т. е. по строению гипервариабельных участков вариабельных районов их полипептидных цепей. Кроме [c.56]

Изображен поперечный срез лимфатического узла кролика, клетки которого содержат антитело против альбумина бычьей сыворотки (АБС) на четвертый день после повтор-лой иммунизации. Многие клетки дают желто-зеленую флуоресценцию флуоресцеина (па рисуике белые), тогда как фон из других клеток выглядит голубоватым ([ а рисунке серый). Антитело находится в цитоплазме. Ткань фиксировали 95%-ным этанолом при 4°С в течение ночи, затем обезвоживали в холодном 100%-ном этаноле, ск ветляли в холодном ксилоле и погружали в парафин при температуре ниже СО°С. Затем делали срез, депарафинировали его и гидратировали. Далее срез обрабатывали АБС (0,5 мг/мл в физиологическом растворе) и промывали. В результате АБС связывается только с участками, содержащими антитело, а несвязанный АБС удаляется при промывке. Анти-АБС метили флуоресцеином (две молекулы на молекулу белка) и наносили тонким слоем иа срез, чтобы могла пройти реакция с любым связанным АБС. При этом обнаруживается антитело, которое находилось в клетках с самого начала. Таким способом было показано. что клетки лимфатических узлов синтезируют анти-АБС. (Любезно предоставил Альберт Коонс.) [c.57]

Предварительные результаты подтверждают, что процесс, заключающийся в иммобилизации антител против иммуноглобулинов мыши на мерсалил-трисакриле и выделении клеток, предварительно покрытых специфическими моноклональными антителами мыши, может применяться как общий метод. Этот процесс, уже использованный в чашечных методиках , требует лишь небольших количеств указанных моноклональных антител (Бонафо и др., неопубликованные данные). Этот метод имеет хорошие перспективы использования для разделения подгрупп специфических клеток и выделения антигенспецифических лимфоцитов. [c.259]

Ряд выполненных к настоящему времени исследований свидетельствуют в пользу того, что антиидиотипические и антивариотипические антитела реагируют со структурами в активных центрах рецепторов, не имеющих иммуноглобулиновой природы. С использованием в качестве антигена антител против инсулина были получены антиидиотипические анти-антитела, способные реагировать не только с активным центром антител против инсулина, но и активным центром рецептора инсулина на клетках бурого жира (адипоциты). Инкубация адипоцитов с указанными антиидиотипическими антителами приводила к утрате клетками [c.50]

Высвобождению аминов (гистамин, серотонин, так азываемая медленно реагирующая субстанция анафилаксии— SRS-A), предшествует взаимодействие фиксированных на поверхности тучных клеток цитотропных JgE- или IgG-антител с антигеном (аллергеном). Те же процессы возникают при реакции фиксированных на клетках цитотропных иммуноглобулинов указанных классов с антителами против IgE и IgG. Активация метаболических процессов в тучных клетках, предшествующая высвобождению вазоактивных аминов, происходит лишь в том случае, когда антиген поливалентен, а анти-иммуноглобулиновые антитела — бивалентны. Так, фрагмент aнти-IgE-aнтитeл не вызывает высвобождения аминов (дегрануляция) тучных клеток, сенсибилизированных IgE. Причины того, что сшивание нескольких молекул IgE или IgG цитотропных антител необходимо для активации клетки, связаны как с влиянием этого процесса на цитоплазматическую мембрану, так и с конформационной перестройкой молекулы фиксированного антитела и появлением эффекторного центра. Этот центр обозначен Д. Стенвортом (D. Stanworth, 1971) как активирующий ткани центр. Центр возникает под влиянием антигена в молекуле IgE-антитела, отличаясь по структуре и локализации от центра, отвечающего за фиксацию IgE на клетке-мишени. [c.146]

Планшет инкубируют 30 мин при 37°С во влажной атмосфере, а затем из каждой лунки осторожно отсасывают антитела. Каждую лунку трижды промывают PBS (250 мкл на 1 лунку) и добавляют в них по 10 мкл разбавленных, конъюгированных с флуоресцеином антител против мышиных иммуноглобулинов (кроличьих либо других в зависимости от используемых первых антител). Флуоресцирующая сыворотка должна быть предварительно адсорбирована клетками HeLa. Для этого отмытую суспензию клеток HeLa инкубируют 18 ч на холоду с флуоресцирующими антителами в присутствии ингибиторов протеаз. Готовые для работы антитела, не дающие фоновой флуоресценции, получают центрифугированием (500 g, 5 мин) инкубационной смеси и фильтрацией супернатанта через нитроцеллюлозный фильтр с диаметром пор 300 мкм. [c.268]

Вероятно, антитела против ДНФ не допускают присоединения FAD к ДНФ—АпоГО с получением активного голофермента вследствие ограничения подвижности, мешающего полипеп-тидной цепи ДНФ—АпоГО свернуться в каталитически активную конформацию. ДНФ-аминокапроновая кислота устраняет ингибирующее действие антител на рекомбинацию ДНФ— АпоГО и FAD с образованием активного фермента. [c.19]

Baxi С антигеном за специфические клеточные рецепторы, не явл5 ющиеся антителами. Например, моноклональные антиидио-типи ские антитела против антител к гликопротеину реовиру са предотвращают связывание реовируса с его специфическими рецепторами, находящимися на клеточной поверхности по-видимому, это связано с тем, что антиидиотипические антитела могут действовать как лиганды для рецепторов [13]. [c.19]

Разработка метода определения опиатов на основе латексной агглютинации. На основе полученных реагентов - антител к опиатам и конъюгата морфина меченого латексом, был разработан метод для выявления опиатов в биологических жидкостях организма с использованием латексной агглютинации. Для этого непосредственно перед работой разводили латексный конъюгат до 1% концентрации буферным раствором. Специфичные антитела против опиатов разводили в плашке, используя серию двойных последовательных разведений. Для проведения опыта в микрокамеры с коническими лунками вносили по 10 мкл сыворотки каждого разведения и быстро добавляли равную аликвоту раствора латекса, модифицированного морфином или конъюгатом морфин-овальбумин. В качестве контроля использовш1и лунку, в которую не добавляли антитела. Интенсивность реакции агглютинации оценивали через 1 час по 4-крестовой схеме [2]. Из полученных результатов выбра1ш условия для проведения реакции ингибирования. Для этого использовали концентрацию антигена на латексе 100 мкг/мл и 50 мкг/мл, а разведения сыворотки соответствовали 1 16, 1 32 и 1 64, Морфин вносили в лунки после серии пятикратных разведений в интервале концентраций от 500 мкг/мл до 200 нг/мл, В каждую лунку вносили 7 мкл антиопиатной сыворотки, 7 мю1 раствора морфина соответствующей концентрации и 7 мкл раствора латекса. Контрольные [c.202]

Загадочная, но практически очень важная особенность иммунной системы состоит в том, что в организме могут образовываться антитела против собственных клеток, как это имеет место при аутоиммунных болезнях. К числу таких болезней относится, по-видимому, ревматоидный артрит при этом заболевании сыворотка крови и суставная жидкость содержат комплексы IgG с неизвестными антигенами, причем такие комплексы не встречаются у здоровых лиц. При тяжелом аутоиммунном заболевании, системной красной волчанке, иммунная система часто образует антитела против собственной ДНК больных. Эти антитела атакуют клетки различных тканей, например эритроциты. Хотя клетки иммунной системы обычно отделены от нервных клеток гематоэнцефа-литическим барьером, все же у мышей нетрудно вызвать аллергический энцефаломиелит, при котором антитела повреждают миелиновые оболочки (т. 1, стр. 354), Другим примером таких заболеваний, называемых болезнями иммунных комплексов, служит амилоидоз, характеризующийся отложением белково-углеводных комплексов во внеклеточном пространстве [196]. Было сделано важное наблюдение, что количество аутоантител и отложения амилоида с возрастом увеличиваются. Предполагается, что болезнь иммунных комплексов является основной причиной старения. Огромное значение для медицины имело выявление природы основного заболевания почек—первичного гломе-рулонефрита, который, как показали исследования, обусловлен перекрестной реакцией между мембраной стрептококка и базальными мембранами почечных клубочков. [c.366]

КосвеннЬ й метод 2. П, 3 — как и в Л, за исключением того, чю антитела, специфичные к белку, не мечены и нет наблюдений в 3 4— инкубация с мечеными антителами против IgG кролика П - промывка . 5 — наблюдение. [c.105]

Как и при иммуногистологических методах можно обходиться без мечения специфичных к белку антител, обычно вырабатываемых в организме кролика, используя вместо этого имеющиеся в продаже меченые специфические антитела против иммуноглобулинов кролика. Однако это усложняет процедуру исследования. Для описанного варианта метода необходимо, чтобы сорбированные антитела, специфичные к белку, индуцировались У иного животного, чем кролик, — это означает дополнительную выработку антител против белка, например, у козы (этап /). [c.107]

Использование иммобилизованных антигенов позволяет выделить фракцию иммуноглобулинов, специфических антител против белка (рис. 4.ЮЛ). Полученный таким путем высокоочищенный специфический реагент может быть использован в случаях, когда Ьн требуется, как, например, в иммуногистологии. Существенным недостатком этих методов являются жесткие условия десорбции антител. Чтобы смягчить денатурирующий эффект от снижения pH до 2,8 (условие, нередко используемое для десорбции антител), десорбированные фракции необходимо собирать в буферном растворе, pH которого близок к нейтральному. В этих условиях восстановленные антитела обычно активны. В то же время, если иммобилизованный антиген чист, эта операция позволяет удалить неспецифические примеси антител, временами присутствующие во фракции иммуноглобулинов. [c.109]

Рис. 66. Электронные микрофотографии рибосомных 50S субчастиц, прореагировавших с антителами а —антитела против белка L7 / L12 (по W. А. Stry harz et al. V-Mol. Biol., 1978, V. 126, p. 123-140) оригинал предоставлен д-ром Дж. Лейком, Калифорнийский университет, Лос-Анджелес) б —антитела против белка L1 (предоставлено д-ром Г. Штоффлером, Институт молекулярной генетики им. М. Планка, Зап. Берлин) в — антитела против 5S РНК-белкового комплекса SOS частицы видны, с их выпуклой ( задней ) стороны (предоставлено В. Д. Васильевым, Институт белка АН СССР, Пущино) [c.111]

Для идентификации белковых компонентов 50S субчастицы, формирующих факторсвязьшающий участок, были использованы, в частности, антитела против различных рибосомных белков. Оказалось, что только антитела против белка L7 / L12 ингибировали связьшание EF-G, в то время как антитела против большого разнообразия других белков не влияли на эту функцию. Первоначально из этих опытов был сделан вьшод, что местом присоединения EF-G является белок L7 / L12. Действительно, избирательное удаление белка L7 / L12 то 50S субчастицы (с помощью диссоциации 0,5 М NH4 I с этанолом) приводило к значительному падению связьшания EF-G с рибосомой. Однако сродство не исчезало совсем, а лишь уменьшалось. Было показано, что даже при полном отсутствии белков L7 / L12 на рибосоме EF-G способен, хотя и гораздо менее эффективно, не только связываться, но и осуществлять свои функции в гидролизе ГТФ и в транслокации. Следовательно, белок L7 / L12 лишь помогает связьшанию EF-G, а основным связьшающим компонентом, ввиду отсутствия других причастных белков, должна быть рибосомная РНК. В прямых экспериментах это было подтверждено было найдено специфическое сродство определенного района 23S РНК к EF-G. [c.145]

Рис. 88. ЭлектЬонные микрофотографии рибосомных 50S субчастиц с присоединенным EF-G, прореагировавших с антителами против EF-G (а), и фотография модели 50S субчастицы с обозначением (черный кружок) приблизительного местоположения EF-G на субчастице (б) (предоставлены В. Д. Васильевым, Институт белка АН СССР, Пущино)

Другой белок —EF-Тц—поступает на рибосому в виде комплекса Aa-tRNA EF-Tu GTP. В составе такого комплекса он взаимодействует с рибосомой, и можно показать, что место его взаимодействия—50S субчастица. Присутствие EF-G на 50S субчастице препятствует взаимодействию EF-Tu с рибосомой, откуда можно заключить, что EF-Tu-связьшающий участок совпадает или перекрьшается с EF-G-связьшающим участком. Как и в случае EF-G, антитела против белка L7/L12, и только они, ингибируют взаимодействие EF-Tu с рибосомой. Удаление белка L7/L12 сильно уменьшает взаимодействие EF-Тц с рибосомой, но не исключает его полностью, и EF-Tu может вьшолнять свои ф щии на рибосомах без белка L7/L12, хотя не так эффективно следовательно, EF-Tu, по-видимому, тоже связьшается с 23S РНК. [c.147]

Еще более убедительны опыты, демонстрирующие приобретение растущим пептидом на рибосоме иммунологической специфичности, присущей нативной конформации готового белка. Так, рибосомы, несущие растущие цепи р-галактозидазы, реагируют с антителами против готового фермента еще задолго до завершения трансляции мРНК и освобождения белка. Используемые антитела были специфичны к третичной структуре денатурация рибосомосвязанного материала путем нагревания полностью разрушала его способность реагировать с антителами. [c.273]

Смотреть страницы где упоминается термин Антитела против антител к lq: [c.334] [c.261] [c.39] [c.88] [c.195] [c.198] [c.66] [c.277] [c.197] [c.469] [c.36] [c.201] [c.217] [c.451] [c.140] [c.565] [c.287] [c.114] [c.110] [c.147] [c.219] [c.251] [c.178] [c.217] [c.567]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология