Хроматографирование ДНФ-аминокислот на бумаге

Полученную аминокислоту характеризуют величиной Rf хроматографированием на бумаге (см. стр. 36, Rf 0,33). [c.90]

Величины Я у аминокислот при хроматографировании на бумаге [c.469]

Часть выделенного индивидуального дипептида растворяют в разбавленной соляной кислоте и полученную каплю подвергают действию нитрозных газов в течение 10 мин при 37° [40]. Свободная аминогруппа аминокислоты, карбоксил которой амидно связан в молекуле дипептида, под влиянием нитрозных газов замещается на гидроксил. После упаривания реакционной смеси, гидролиза остатка 6 н. соляной кислотой в капилляре и упаривания гидролизат хроматографированием на бумаге можно разделить на оксикислоту и аминокислоту. Нингидрин обнаружит присутствие только той аминокислоты, которая была связана в пептиде своей аминогруппой. [c.480]

Если вещества, подвергаемые хроматографированию на бумаге, бесцветны, то для обнаружения образовавшихся зон следует, после высушивания хроматограммы, применить соответствующий реагент, раствором которого обрызгивают бумагу при помощи пульверизатора. В случае хроматографирования смеси аминокислот обычно применяют нингидрин, вещества кислотного или основного характера обнаруживают соответствующим индикатором, иногда пользуются разбавленным раствором перманганата и т. п. Нередко лучшие результаты можно получить при рассматривании хроматограммы в ультрафиолетовом свете. [c.303]

Рис. 194. Справочная схема расположения пятен аминокислот и родственных соединений при двухмерном хроматографировании на бумаге и проявлении, водным фенолом и смесью бутанола, уксусной кислоты и воды

Использование радиоактивных изотопов существенно расширило возможности метода разделения близких по свойствам веществ методом хроматографирования на бумаге. Отпала необходимость в наличии избирательных реактивов, дающих окрашенные соединения, повысилась чувствительность и точность определений, появилась возможность количественно определять и разделять смеси близких по свойствам веществ, например, смеси сложных аминокислот. [c.309]

КИСЛОТ [79]. Метод хроматографирования на бумаге применен для обнаружения присутствия адреналина (10 мг и меньше) [80], для изучения производных никотиновой кислоты [81], аденозин фосфорных кислот [82]. аминокислот [83] и т. д. [c.210]

Упражнение 20-8. Расположите аминокислоты — глицин, фенилаланин, аргинин и глутаминовую кислоту — по скоростям их движения при хроматографировании на бумаге с использованием в качестве органической фазы слабого основания— 2,4,6-коллидина. Приведите ваши соображения. [c.110]

В таблице 2 приведены значения Яг аминокислот в различных растворителях при хроматографировании на бумаге Ватман № 1. [c.36]

Расчет. Величина оптической плотности раствора при анализе аминокислот зависит в сильной степени от условий хроматографирования (качества бумаги, числа пропусканий растворителей и др.), поэтому для определения концентрации аминокислоты в анализируемом растворе нельзя пользоваться заранее сделанными калибровочными кривыми. Здесь пользуются установленной зависимостью между концентрацией кислоты и оптической плотностью раствора, которая в пределах концентраций аминокислот от 0,025 до 0,25 мкмоль (микромолей) имеет линейный характер. Содержание каждой кислоты в абсолютно сухих дрожжах, взятых на анализ, вычисляют по формуле [c.221]

Одно из достоинств метода ТСХ — его быстрота. Анализ аминокислот этим методом требует значительно меньше времени, чем хроматографирование на бумаге. Так, двумерное хроматографирование на бумаге длится несколько дней, тогда как методом ТСХ его можно осуществить за 4—5 ч. Другое преимущество ТСХ — повышенная чувствительность. Например, чувствительность определения гистамина этим методом в 2 раза выше, а чувствительность определения цистеиновой кислоты в 50 раз выше [24]. При двумерном разделении различие в чувствительности еще больше и для отдельных кислот может возрастать в 250—500 раз. [c.478]

Синдж [55] пользовался для хроматографирования аминокислот вместо фильтровальной бумаги колонной из крахмала. Проявителями служили бутиловый спирт или смесь бутилового и бензилового спиртов (1 1), насыщенные водой. Блок [56] описал количественное определение аминокислот на бумажных хроматограммах. [c.317]

Для тонкослойного хроматографирования аминокислот рекомендуется пользоваться пластинками с силикагелем и гипсом, которые после нанесения слоя достаточно просушить на воздухе. Проявление ведут в системе к-бутанол — уксусная кислота — вода, взятая Б соотношении 60 20 20. Окрашивают хроматограмму раствором нингидрина и азотнокислой меди. Указывают, что такой способ в 10 раз чувствительнее, чем хроматография на бумаге. [c.297]

КОЛИЧЕСТВА АМИНОКИСЛОТ, КОТОРЫЕ МОГУТ БЫТЬ ОТКРЫТЫ С ПОМОЩЬЮ НИНГИДРИННОЙ РЕАКЦИИ ПРИ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИИ НА БУМАГЕ [1971 [c.127]

Метод нашел применение в анализе практически всех пищевых продуктов в сахарном производстве - для определения углеводов в хлебопекарном и кондитерском - аминокислот, органических кислот, углеводов, полисахаридов и карбонильных соединений в виноделии - органических кислот и аминокислот в производстве молока и молочных продуктов - аминокислот в мясоперерабатывающей промышленности - фенолов, жирных и летучих кислот, аминокислот и карбонильных соединений. Анализ пищевых продуктов достаточно трудоемок, включает сложную пробоподготовку, поэтому в данном пособии приведены лабораторные работы, реально выполнимые в течение одного занятия и позволяющие освоить приемы хроматографирования на бумаге. [c.364]

Для разделения аминокислот, образовавшихся в результате гидролиза полипептида, еще Э. Фишер предложил использовать фракционную вакуумную перегонку их эфиров. Этот метод требует сравнительно большого количества вещества. В самое последнее время он, однако, вновь становится очень актуальным, так как газовая хроматография позволяет разделить ничтожные количества смеси эфиров аминокислот. Широкое применение для разделения смесей аминокислот нашла за последние годы бумажная хроматография. Если требуется определить качественный состав смеси аминокислот, то проводят двухмерное хроматографирование на листе бумаги и проявляют хроматограмму нингидрином, причем каждая аминокислота дает окрашенное пятно. [c.384]

Осторожно Брать бумагу только тщательно вымытыми руками. Иначе при хроматографировании обнаружатся пятна аминокислот из вашего пота. [c.99]

Хроматографирование проводят методом восходящей хроматографии. Капилляром аккуратно на край полоски бумаги наносят каплю исследуемого раствора аминокислот, подсушивают ее, наливают на дно цилиндра 10— 2 мл растворителя и помещают в цилиндр бумажную полоску так, чтобы ее нижний край касался растворителя, но капля исследуемого раствора не была бы в него погружена. Полоску закрепляют в цилиндре, который закрывают пробкой, [c.266]

Тиогидантойны удается идентифицировать хроматографированием на бумаге [68, 94] или путем регенерации из них аминокислоты [19], как это описано выше для фенилтиогидантоинов, полученных по методу Эдмана (см. стр. 237—245). [c.247]

Хроматография на бумаге. Впервые в современной форме метод бумажной хроматографии был описан Консденом, Гордоном и Мартином [16]. Хроматографирование на бумаге может быть применено для разделения микрограммовых количеств многих веществ, таких, как алкалоиды, нуклеозиды, нуклеотиды, сахара, аминокислоты, флавоноиды, таннины, стероиды, птеридины и фосфолипиды. Метод имеет много общего с распределительной хроматографией в качестве носителя используется фильтровальная бумага. Однако в этом случае не происходит распределения в истинном смысле этого слова (между несмешивающимися растворителями), так как разделение достигается с помощью растворителей, смешивающихся с водой. Согласно Ледереру [2], вопрос о том, обусловлен ли процесс хроматографирования на бумаге адсорбцией на водно-целлюлозном комплексе или же распределением внутри этого комплекса, рассматриваемого в качестве стационарной фазы, относится скорее к области терминологии, чем к существу дела . [c.21]

Давно установлено, что присутствующие в бумаге примеси вредно влияют на процесс хроматографирования на бумаге. Например, при гидролизе бумаги ватман № 1, 2 и 4 получаются аминокислоты, которые могут привести к ошибкам при анализе пептидов. Катионы меди, железа, марганца также мешают предложены способы их маскировки и устранения. Рекомендуется в ряде случаев предварительное промывание бумаги кислотами, водой и другие методы обработки. Бумагу применяют в виде полосок, круншов или листов. [c.403]

Полученное вещество при хроматографировании на бумаге в пяти различных системах вело себя точно так же, как природная аминокислота. Обработка 2,4-динитрофторбензо-лом привела к получению N-2,4-динитрофенильного производного, инфракрасный спектр которого был идентичным спектру аналогичного производного природного фелинина. [c.82]

На основании результатов хроматографирования на бумаге вычерчивают диаграмму, показывающую распределение аминокислот в собранных фракциях [см. Partridge, Brimley, Bio hem. J., 51, 628 (1925)]. Промывают колонку 0,075 н. серной кислотой до тех пор, пока элюат не станет кислым, и затем дистиллированной водой до нейтральной реакции элюата. Высыпают смолу в банку, а колонку моют и высушивают. [c.40]

Если бумага предназначена для хроматографирования аминокислот, ее вначале отмывают в 0,3 н. НС1, затем нейтрализуют 0,5 н. NH4OH, промывают дистиллированной водой до отрицательной реакции по фенолфталеину, пропитывают 0,1% фосфатным буферным раствором с pH = 7,0 7,5 и высушивают на воздухе. [c.320]

Фишер и др. (Fis her, Parsons, Morrison, 1948) доказали одну очень важную закономерность, имеющую место нри хроматографировании аминокислот на бумаге. Оказалось, что площади пятен на хроматограммах находятся в линейной зависимости от логарифма концентраций аминокислот в первоначальной капле [c.83]

Техника получения бумажных хроматограмм была уже изложена в общих чертах выше. При хроматографировании аминокислот на бумаге было замечено (Консден и др., 1944), что аминокислоты вступают в реакцию с металлами (например, медью), которые способны образовывать соли с аминокислотами. Это обстоятельство мешает получению достаточно четких хроматограмм. Для устранения указанного дефекта к растворителям добавляют в небольшом количестве такие соединения, которые осаждали бы подобные металлы или образовывали с ними комплексные соедипепия. Такими добавками могут служить HgS, H N, NHg, а-бензоиноксим (купрон). Можно также предварительно обработать бумагу слабым раствором K4Fe(GN)g. Наиболее употребительными растворителями для бумажной хроматографии аминокислот и пептидов являются фенол и коллидин, предварительно насыщенные водой. [c.147]

Когда еще не было приборов для двухмерного электрофореза (по Гроссу), удовлетворительные результаты получали сочетанием электрофореза с хроматографией. Диксон и др. [15] проводили электрофорез при pH 3,6 с последующим хроматографированием на бумаге в другом направлении с растворителем н-пропанол—пирофосфатный буфер. Лист бумаги ватман № 3 Т-образной формы с размерами, указанными на фиг. 23, свертывают до горизонтальной части т. Последнюю увлажняют с обоих концов буфером пиридин — уксусная кислота, pH 3,6, и проводят электрофорез при 1500 в в течение 20 мин. Диксон и др. применяли прибор Михля с жидким теплоносителем, но столь же успешно может быть использован прибор для электрофореза между горизонтальными пластинами. В последнем случае, прежде чем приступать к разделению, концы горизонтальной части Т, находившиеся в контакте с бумажными фитилями, следует отрезать. При pH 3,6 кислые аминокислоты (глутаминовая, аспарагиновая и цистеиновая) разделяются основные дают одно общее пятно, а нейтральные — другое. Если использовать для хроматографии систему П — Э — ФФ Хейнса и др. (см. [c.52]

Величины для -аминоспиртов и аминокислот для первых трех из этих систем (при хроматографировании па бумаге ватман № 1 при 20—22") приведены в табл. 32. Как правило, -аминоспирты движутся впереди соответствующих аминокислот, а интенсивность окраски при реакции -аминоспиртов с нингидрином часто составляет только 10—20 о той величины, которую дают аминокислоты. Многие -аминоспирты могут быть окислены до аминокислот с хорошим выходом путем нагревания с суспензией окиси серебра при 100° в течение многих часов [35]. Ионы серебра удаляют в виде хлорида серебра, а образовавшиеся аминокислоты адсорбируют на небольшой колонке с ионитом дауэкс 2 (в форме свободного основания). Путем элюирования 1 п. НС1 получают раствор ам1Шокислот для последующей идентификации. [c.205]

Из неорганических катионов большую часть составляют кальций и магний в меньшем количестве присутст1 уют медь и железо (для железа наблюдалось содержание 1—2 мг па 100 з бумаги), которые тем не менее могут неблагоприятно влиять на хроматографирование аминокислот. Суммарное содержание этих веществ определяется зольностью, достигающей у бумаг ватмап и Шлейхер —Шюлль 0,04—0,07 о. [c.104]

В табл. 77 приводится пример содержания аминокислот в человеческой плазме по данным, полученным методом хроматографии на ионо-обменннках и па бумаге. Аминокислотный набор крови не столь разнообразен, как у мочи. Увеличение содержания аминокислот в крови наступает при почечной недостаточности одиако ни нри каких других патологических состояниях соотпошеиие интенсивности нятен отдельных амииокислот не имеет столь ярко вырагкенного изменения, чтобы хроматографирование на бумаге можно было использовать для целей диагностики. [c.442]

Раствор аминокислот микропипеткой наносят на полоску бумаги и проводят хроматографирование, как указано выше (сы. стр. 300). Определив площади пятен или их массу, по калибровочным графикам находят концентрации аминокислот в анализируемом растворе. [c.302]

Капли водного илн спиртового раствора каждого из четырех перечисленных выше аминов наносят отдельно на полоску бумаги н производят хроматографирование, как описано выше. Для идентификации аминов рекомендуется тот же растворитель, что и для аминокислот н-бутиловый спирт—вода— уксусная кислота (4 5 1). Для определения положения пятен аминов на хроматограмме производят опрыскивание 0,1%-ным раствором иингидрина в метиловом спирте, как описано при определении аминокислот. [c.155]

Распределительная круговая хроматография аминокислот. При круговой хроматографий вместо пятен амииокис.г]от на бумаге получают концентрически расположенные кольца. В принципе метод остается таким же, как и в предыдугцей работе. Хроматографирование проводят в эксикаторах небольшого размера. [c.31]

Другую часть остатка, полученного после упаривания на пластинке, растворяют в нескольких микролитрах 6 н. соляной кислоты и всасывают раствор в толстостенный капилляр. Капилляр заплавляют на обоих концах, помещают в термостат и нагревают 16 час при 100°. После охлаждения капилляр вскрывают и раствор гидролизата переносят в микростаканчик. Вакуумированием в эксикаторе над едким кали упаривают образцы досуха. Остаток растворяют в нескольких микролитрах дистиллированной воды и избыток хлористого водорода удаляют повторным упариванием над щелочью. После растворения полученного остатка в воде раствор наносят на бумагу и хроматографированием определяют, из каких аминокислот состоит дипептид. [c.480]

В табл. 1-10 приведень значения -Ку и Rj протеиногеннЬ1Х аминокислот, полученные при хроматографии на бумаге шляйхер-шюль 2043 Ь в системах бутанол — уксусная кислота — вода (4 1 1) и бутанол — изомасляная кислота — уксусная кислота — вода (5 0,5 0,7 5). Значения Р зультаты трехкратного элюирования. Значения коэффициентов удерживания воспроизводятся, если хроматографирование идет в направлении волокна бумаги. [c.57]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология