Сорбенты фракционирование

На величину сорбции флавоноидов кроме природы самих веществ и характера растворителей будет оказывать влияние и величина макромолекул полиамидного сорбента. Фракционированием полиамидного порошка было выделено три [c.14]

С рождением сорбционных и особенно хроматографических методов в распоряжении исследователей оказались самые эффективные пз современных средств фракционирования. Разработка широкого круга разнообразнейших сорбентов, твердых носителей и стационарных жидких фаз, препаративного и аналитического [c.14]

Если построить график зависимости объема газа, накопившегося в барботажной бюретке, от объема двуокиси углерода, пропущенной через слой сорбента, или от времени, считая от начала опыта, то получается выходная кривая типа полярограммы или кривой фракционированной разгонки жидкости (см. рис. 15 и 48). Число ступеней кривой соответствует числу компонентов смеси, а высоты ступеней кд — объемам отдельных газов смеси с/а, да во [c.137]

Выбор сорбента диктуется, очевидно, биологической специфичностью интересующего исследователя вещества или веществ. Необходимо сразу же уяснить себе вопрос о наличии в исходном препарате других компонентов со сходной биологической активностью. В любом случае удобно воспользоваться готовым продажным сорбентом с групповой специфичностью. При наличии в препарате сходных и ненужных компонентов задачу очистки следует попытаться решить путем динамического фракционирования, опираясь на различия силы сродства сходных компонентов к лиганду или на аффинную избирательную элюцию. Если сходные по своей биологической специфичности компоненты тоже представляют интерес, то динамический вариант является единственно приемлемым. Как обычно, в этом случае надо воспользоваться достаточно длинной колонкой. Если же сходных компонентов нет, а готовый сорбент с подходящей групповой специфичностью имеется, очистку можно вести [c.399]

На практике нередко возникает такая ситуация, когда уже готовая колонка с аффинным сорбентом оказывается загруженной лишь на малую долю своей эффективной емкости. Весь препарат в этом случае сорбируется в верхнем тонком слое сорбента. Для динамического хроматографического фракционирования это хорошо, но в обычном варианте статической аффинной хроматографии такая ситуация невыгодна уже тем, что в процессе элюции, продвигаясь по всей длине колонки, полоса очищенного вещества будет расширяться хотя бы за счет продольной диффузии в элюенте. Проблема легко разрешается — перед началом элюции снабженную адаптором колонку следует перевернуть и элюировать обратным током жидкости. [c.403]

Раствор препарата наносят на поверхность слоя сорбента на расстоянии 0,5—1,5 см от того края пластины, с которого будет начинаться миграция элюента (при вертикальной установке — с нижнего). Препарат или препараты можно наносить в виде одного пятна, находящегося близ угла пластинки (для двумерной хроматографии), в виде серии равноотстоящих от края и равноудаленных друг от друга пятен (для сопоставления картин хроматографического фракционирования), для той же цели — в виде полосок длиной 5—I0 мм, поскольку разрешение близко расположенных полос на хроматограмме всегда лучше, чем так же расположенных пятен, [c.467]

Интересна модификация процедуры фракционирования, которая, по утверждению авторов, заметно улучшает форму пятен. Сначала оии промывали пластинку в течение ночи восходящей хроматографией, потом сушили и наносили препарат. Затем в том же направлении, что и промывку пластинки, вели хроматографию на расстояние 5 см (считая по фронту элюента). После этого пластинку подсушивали и проводили электрофорез в перпендикулярном направлении, а затем — снова хроматографию в первом направлении, теперь уже до конца. По мнению авторов, важно строго придерживаться оптимального режима сушки пластинки иосле электрофореза (в их опытах — 20 мии при 50°, а затем 10 мии при комнатной температуре). Указывается, что если выдержка в комнатных условиях недостаточна, то пятна при хроматографии плохо мигрируют, а если избыточна — расплываются. Трактовка этих наблюдений не предложена. Возможно, что здесь играла роль степень увлажнения сорбента за счет влаги воздуха. [c.488]

Впервые использованные в нефтяном анализе лишь 20 лет назад ионообменные процессы [113] стали сейчас важным способом выделения и фракционирования кислых и основных соединений из нефтей и нефтяных фракций, вытесняюш им из аналитической практики методы кислотной и ш,елочной экстракции. Большой интерес вызывает проведение этих процессов в системе с неводным элюентом, при котором исчезает барьер растворимости и исключается возможность гидролиза образующихся солей. Смещение реакции в неводных средах в сторону со-леобразования обеспечивает удерживание в слое сорбента даже очень слабых оснований (piTh,g 9—14) [114]. Благодаря специфическому взаимодействию с поверхностью на ионитах могут делиться и некоторые неионогенные соединения [115]. [c.16]

Сорбционные и хроматографические процессы, основанные на использовании эксклюзионных (молекулярно-ситовых) явлений — одно из важнейших современных средств фракционирования. Применение в анализе нефтяных ГАС твердых молекулярных сит (цеолитов, широкопорнстых силикагелей и стекол с узким распределением пор по размерам) ограничено из-за сильного проявления адсорбционных эффектов, которые часто действуют противоположно ситовым эффектам, что ухудшает результаты чисто эксклюзионного разделения в соответствии с размерами и формой молекул [109]. Наибольшее распространение получили методы эксклюзионного разделения па пористых, набухающих в растворителях органических полимерах (пространственно сшитых сополимерах стирола и дивинилбензола, полидекстранах и т. д.) или неорганических макропористых сорбентах с поверхностью, модифицированной прочно сорбированной или химически связанной неполярной органической стационарной фазой [117]. [c.16]

В этом варианте в колонку или па стартовую линию хроматографической пластинки наносят определенную порцию раствора исходной смеси веществ, а затем ведут элюцию раствором вещества, обладающего заведомо большим сродством к неподвижной фазе хроматографической системы, чем любой из компонентов смеси. Происходит вытеснение их пз неподвижной фазы, причем в первую очередь тех, которые обладают меньшнм сродством к сорбенту, а затем и всех остальных. Элюеит выталкивает все компоненты смеси впереди себя наподобие поршня. Так как они выходят в подвижную фазу концентрированными, то между ними также идет конкуренция за связь с неподвижной фазой. Компоненты, уступающие другим в силе сродства к этой фазе, оттесняются еще вперед, где сорбируются, но только до тех пор, пока их опять не вытеснят компоненты, обладающие большим сродством к сорбенту. В результате такого чередования сорбции и вытеснения компоненты смеси будут выходить из колонки один за другим в порядке возрастания силы их связи с неподвижной фазой. Ясно, что при этом зоны соседних компонентов будут соприкасаться или даже немного перекрываться друг с другом. Для аналитического фракционирования метод непригоден, но хорош для препаративного или полупромышленного разделения веществ, поскольку емкость колонки здесь используется очень эффективно. [c.12]

При разделении относительно крупных бромциановых пептидов ОС-, р- и 7-цепей глобина человека 0,1 %-ный раствор ТФУ, помимо своей роли в осуществлении ион-парной хроматографии, оказался очень полезен как прекрасный растворитель для пептидов, в частности гидрофобных. Кроме того, раствор ТФУ прозрачен вплоть до А, = 216 нм и легко удаляется лиофилизацией. Фракционирование вели на колонке Li lirosorb RP-8 (0,46 X 50 см). Использование сорбента с меньшей, чем в рассмотренных выше примерах, гидрофобностью обусловлено большими размерами пептидов. Колонку уравновешивали 0,1%-ньш водным раствором ТФУ, впрыскивали в нее 100 мкл смеси пептидов и вели элюцию линейным градиентом концентрации изопропанола (от нуля со скоростью нарастания 1,6% в минуту) в течение 1 ч при температуре 28 и скорости подачи элюента 0,7 мл/мин. Профиль элюции показан на рис. 96 (сплошная линия). Пептиды длиной 32, 43 и 64 аминокислотных остатка хорошо отделились друг от друга [Mahoney, Hermod-son, 1980]. [c.204]

Двумя годами позже Махони опубликовал результаты фракционирования Br N-пептидов гемоглобина на сорбенте с такой же модификацией (Се), но на основе крупнопористого (300 4) силикагеля [c.204]

Примеры использования оксиапатита для разделения одно- и двунитевых молекул нуклеиновых кислот и соответствующие практические рекомендации будут приведены в следующих разделах. Общее рассмотрение сорбции НК на оксиапатите закончим указанием на то, что на 1 мл уиакованного оксиапатита можно сорбировать 0,2—0,5 мг ДНК, однако для целей фракционирования ие следует превышать первой из этих цифр. Присутствие ЭДТА и цитрата препятствует сорбции, по-видимому, за счет блокирования кальция на поверхности сорбента. Следует упомянуть о том, что в аналитических опытах при избытке сорбента не только элюцию, но и исходную сорбцию НК на оксиапатите следует производить достаточно медленно, например в течение 30 мин, с тем чтобы дать возможность молекулам ДНК или РНК отыскать наиболее благоприятное для сорбции расположение на поверхности сорбента. [c.230]

V Все эти манипуляции облегчаются благодаря тому, что оксиапа-тит не боится контакта с воздухом и даже кратковременного обсыхания колонки. Вместе с тем колонки оксиапатита используют обычно однократно или небольшое число раз ввиду накопления необратимо сорбируемого материала. При расчете необходимого количества сорбента можно исходить из того, что 1 г сухого оксиапатита дает примерно 2,5 мл упакованного объема влажного сорбента в колонке. Температуру фракционирования выбирают, главным образом исходя из ее влияния на конформацию биополимера (особенно в случае гибридных НК). Впрочем, иногда изменения температуры используют и для фракционирования с повышением тем- [c.231]

Приведенные примеры иллюстрируют возможность использования оксиапатита для очистки более или меиее высокополимерной ДНК. На колонках с этим сорбентом удается фракционировать и короткие фрагменты ДНК по их длине. Для фрагментов денатурированной ДНК длиной от 4 до 180 нуклеотидов такое фракционирование было недавно описано [Wittelsberger, Hansen, 1979]. Авторы использовали посадку смеси фрагментов на оксиапатит в воде и элюцию линейным градиентом концентрации фосфатного буфера (0—0,1 М — для очень коротких фрагментов, 0—0,35 М — для более длинных). [c.240]

Можно попробовать разделить все три аминокислоты и прп pH 6 на любом из двух ионообменников. Вопрос лишь в том, достаточно ли глицин отстанет от яаряжоиной одноименно с сорбентом и выходящей в свободном объеме колонки аминокислоты. Можно ожидать, что отставание окажется достаточным, во-первых, за счет дополнительного эффекта гель-фильтрации (нейтральный глицин легче входит внутрь гранул, чем одноименно заряженная аминокислота), а, во-вторых, за счет того, что каждый цвиттерион глицина будет все же иногда цепляться одним из своих зарядов за противоположные по знаку заряды неподвижных ионов обменника. Тем не менее создается впечатление (его можно проверить на опыте), что условия для фракционирования трех аминокислот в этом модельном эксперименте будут более благоприятными при pH 3,5 или pH 8,5. [c.264]

Перед использованием колонки с аффинным сорбентом ее имеет смысл промыть раствором бычьего сывороточного альбумина (2 мг/мл). Было замечено, что в результате этого улучшается качество очистки и фракционирования методом конкурентной элюции целого ряда ферментов. По-видимому, БСА блокирует на сорбенте места неспецифической сорбции ферментов [Ramadoss et al., 19831. [c.368]

Для иллюстрации изложенных в предыдущем разделе обш их соображений и возможностей использования различных аффинных сорбентов рассмотрим определенное число примеров, отобранных из периодической научной литературы последних трех лет. Большая их часть относится к очистке ферментов клеточного метаболизма (и отдельно — белков, регулирующ,их активность нуклеиновых кислот). Далее будут приведены примеры аффинного фракционирования и очистки самих нуклеиновых кислот, в том числе на иммуносорбентах. Основное внимание уделим более простому и универсальному методу — неспецифической элюции, однако био-снецифическая аффинная элюция белков тоже будет представлена несколькими типичными примерами. Рассмотрение начнем с использования сорбентов с индивидуальной специфичностью, ограничившись здесь тремя примерами, поскольку нет смысла пытаться сколько-нибудь полно иллюстрировать бесчисленное разнообразие возможных сорбентов этого типа. Аффинная хроматография белков клеточного метаболизма на сорбентах с групповой специфичностью будет иллюстрирована подробнее, а затем последуют два примера использования ковалентной хроматографии. [c.412]

Что касается самого процесса ТСХ, то здесь можно усмотреть далеко идущую аналогию с жидкостной хроматографией на колонках. Неподвижную фазу образует н идкость, связанная со слоем фиксированного на подложке гранулированного сорбента, свойства и характеристики которого близки, а иногда даже идентичны таковым для материалов, используемых в качестве носителей неподвижной фазы в колоночной хроматографии. Здесь используются те же производные целлюлозы или силикагеля, к которым надо добавить только полоски ацетилцеллюлозы. Подвижную фазу образует жидкий элюент с аналогичными, рассмотренным ранее свойствами. Неизменной остается и сущность хроматографического процесса, базирующегося на равновесном распределении вещества между неподвижной и подвижной фазами. Как и в любом хроматографическом процессе (гель-фильтрация в тонком слое была рассмотрена в гл. 4), для целей хроматографического фракционирования это распределение должно быть сильно сдвинуто в пользу неподвижной фазы. Из всех вариантов хроматографпп для разделения компонентов белков и нуклеиновых кислот методом ТСХ (сами биополимеры очень редко выступают здесь в качестве объектов) практически пспользуют только два нормальнофазовую распределительную и ионообменную. [c.458]

Полиамиды, в том числе и гидрофильные, в меньшей степени гидрофильны, чем целлюлоза или силикагель. Этим обусловлено их применение для распределительной ТСХ ароматических производных аминокислот — ФТГ-АК и данзил-АК. С водными или полярными элюептами полиамидные пластинки ведут себя подобно обратнофазовым сорбентам — замедление миграции веществ вдоль них обусловлено явлением распределения между фазами. С неполярными растворителями сильнее проявляются сорбционные свойства полиамида особенно хорошо сорбируются вещества с делокализованными л-электронами. Подробнее различные механизмы фракционирования на полиамидных и иных носителях рассмотрены в обзорной статье [Zakaria et al., 1983], хотя приведенные в ней примеры несколько устарели. [c.462]

Несложная модификация устройства фирмы Desaga позволяет наносить на пластинки линейно изменяющуюся в одном направлении по своим пропорциям смесь двух сорбентов или импрегнировать сорбент линейно возрастающей концентрацией какой-либо добавки ( Gradient TLG-spreader ). ТСХ нескольких идентичных препаратов в направлении, перпендикулярном к градиенту, позволяет выбрать оптимальную пропорцию смеси, а хроматография вдоль градиента открывает возможность разделения компонентов, сильно различающихся по своей подвижности (подобно тому как это происходит при электрофорезе в градиенте пористости ПААГ). Эти возможности, насколько нам известно, еще не использовались для фракционирования компонентов белков и НК, однако целесообразно иметь их в виду. [c.467]

В заключение добавим, что при одномерном фракционировании нескольких препаратов имеет смысл треки их предстоящей миграции разделить, процарапав в слое сорбента бороздки по направлению элюцпи,— элюент будет подниматься ровнее. Полоскп должны более чем на 1 см не доходить до уровня жидкости в банке, иначе элюент сможет подниматься но ним, как по капиллярам. [c.471]

Смотреть страницы где упоминается термин Сорбенты фракционирование: [c.37] [c.214] [c.141] [c.6] [c.5] [c.10] [c.11] [c.104] [c.105] [c.124] [c.203] [c.211] [c.214] [c.216] [c.217] [c.217] [c.223] [c.227] [c.231] [c.246] [c.272] [c.368] [c.372] [c.407] [c.412] [c.443] [c.448] [c.449]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология