Тизелиус

Рис. 41. Продольное (I) и поперечное (П) сечения электрофоретической ячейки в приборе Тизелиуса.

Рис. 81. Схема прибора Тизелиуса для электрофоретического анализа белков.

Рис. VII, 26. Схема прибора Тизелиуса в собранном виде.

Рис. УП, 25. Вид (сбоку) и-образноЯ трубки в приборе Тизелиуса

НОСТЬ, то напряженность поля изменялась бы на границе скачком и, кроме того, изменялась бы во времени при перемещении границы. Такая неоднородность поля и зависимость его напряженности от времени, обычно не проявляющаяся или проявляющаяся в очень малой степени при электрофорезе, служат существенным препятствием для использования метода подвижной границы при ионофорезе. В тех случаях, когда этот метод может применяться к коллоидным системам, он оказывается очень выигрышным, так как позволяет не только измерить электрофоретическую подвижность, но и разделить путем электрофореза компоненты с разной подвижностью, определить их число и идентифицировать каждый из них. Все эти преимущества привели, с одной стороны, к появлению тщательно разработанного Тизелиусом (1930 г.) метода подвижной границы, а с другой — к широкому применению электрофореза на бумаге и в других средах. [c.156]

Оптические методы исследования распределения концентраций в процессе седиментации или в состоянии седиментационного равновесия довольно сложны. Обычно используется зависимость показателя преломления раствора от его концентрации. Этот способ регистрации используется и в других исследованиях — при определении коэффициента диффузии или в случае электрофореза по методу Тизелиуса, при обсуждении которых он и будет рассмотрен более подробно. [c.64]

Электрофорез на бумаге. Прибор Тизелиуса очень сложен. В последнее время широкое распространение для исследования белков получил другой метод, предложенный также Тизелиусом, но осуществляемый проще. Это метод электрофореза на бумаге. [c.210]

Тизелиусом был сконструирован прибор, принципиальная схема которого изображена на рис. 81. Основная часть прибора состоит из широкой и-образной трубки (<3), нижняя и средняя части которой заполняются исследуемым раствором белков, а верхняя — буферным раствором. В средней части прибора имеется специальное приспособление (2) для смещения отдельных частей трубки на шлифах в горизонтальном направлении. При подготовке прибора, к опыту после заполнения трубки белком верхняя часть ее смещается, и избыток белка может быть удален. После удаления избытка белкового раствора верхняя часть [c.132]

Арне Тизелиус родился в 1902 г. в Стокгольме (Швеция) лауреат Нобелевской премии 1948 г. [c.689]

Для подавления теплового эффекта прибор помещается в низкотемпературный термостат. Тизелиус рекомендует применять термостатирование в интервале температур, отвечающем максимальной плотности раствора (2—3°). При этих условиях [c.133]

Тизелиус воспользовался этим методом для обнаружения границ отдельных фракций белка, обладающим иным показателем преломления по сравнению с буферным раствором. Способ применения виден на схеме рис. 84. [c.135]

Д етод Тизелиуса особенно широко применяется при исследовании белков и других высокомолекулярных электролитов, поскольку с его помощью можно не только определить скорость электрофореза, но и разделить смесь высокомолекулярных веществ на отдельные компоненты. В самом деле, если исследуемый раствор содержит несколько компонентов с различными электрофоретическими подвижностями, то фронт передвижения более подвижных компонентов будет обгонять фронт движения компонентов, движущихся медленнее, и образуется столько границ, сколько компонентов в смеси. [c.209]

Освещенная прямоугольная щель (/) проектируется линзой (2), и за линзой рядом ставится электрофоретическая трубка прибора Тизелиуса (5) с раствором белка. Если раствор гомогенен, то изображение щели на экране (5) равномерно освещено. В случае появления границы с иным показателем преломления В) происходит отклонение лучей. Отсекая отклонившиеся лучи с помощью диафрагмы (4), увидим в изображении на [c.135]

Смещение пятна показано соответственно для анодной (верхний ряд) и катодной части (нижний ряд) трубки прибора Тизелиуса. Видно, что переключение полюсов тока приводит к обратному смещению пятен. Зная силу тока в цепи, электропроводность раствора, геометрические параметры сосуда и смещение границы пятна за единицу времени, можно найти электрофоретическую скорость фракции белка. Наличие темного пятна, дви- [c.136]

Получение первичной жидкостной хроматограммы используется в разработанном А. Тизелиусом и С. Клессоном (1946) методе, названном фронтальным анализом [5, 6 . Схема прибора для исследования смеси веществ в растворе [c.24]

Смесь веществ, адсорбированных в верхней части колонки, может быть разделена на отдельные компоненты либо путем элюирования (промывание чистым растворителем), либо путем вытеснения. Идея метода вытеснительной хроматографии, предложенного А. Тизелиусом (1943), заключается в том, что колонка промывается раствором вещества, энергично десорбирующего ранее поглощенные компоненты разделяемой смеси, образовавшие в колонке зоны первичной хроматограммы. В процессе движения вытесненных компонентов смеси происходит взаимное их пе- [c.32]

Метод подвижной границы, улучшенный Тизелиусом и Филь-потом, нашел практическое применение в биологических исследованиях. [c.91]

Наиболее совершенная и довольно сложная конструкция аппарата для электрофоретического разделения, предложенная Тизелиусом, основана на методе подвижной границы. Компоненты раствора (например, плазмы крови), обладающие различными подвижностями, пространственно разделяются в U-образном сосуде после длительного электрофореза. Оптическая система построена так, что свет, проходящий через сосуд в нормальном к нему направлении, преломляется на границах, которые разделяют растворы отдельных компонентов. [c.218]

Фронтальный метод впервые был описан Тизелиусом (1940) для жидкостной хроматографии, а Джеймсом и Филлипсом (1953) был внедрен в газовую хроматографию. Проба непрерывно подается в колонку. После заполнения колонки сначала из нее выходит наименее прочно связанный с неподвижной фазой компонент данной смеси. При дальнейшем пропускании пробы из колонки выходит также второй компонент, ближайший к первому по своему сродству с неподвижной фазой, так что из колонки выходит двухкомпонентная смесь. Постепенно к ней присоединяются другие компоненты, пока, наконец, через колонку не будет протекать задаваемая смесь первоначального состава. Этот метод успешно используется для очистки больших количеств смесей от следов сильно адсорбируемых примесей. [c.17]

Вытеснительный метод впервые был использован в жидкостной хроматографии Тизелиусом (1943), а в газовой — Тернером (1943). Разделяемая смесь подается в колонку в виде небольшой пробы. В противоположность проявительному методу в данном методе подвижная фаза содержит компонент, который связывается неподвижной фазой сильнее, чем любой другой из компонентов смеси, и вытесняет их из колонки один за другим в зависимости от степени их сродства с неподвижной фазой. При этом попеременно выходят из колонки чистые компоненты и промежуточные зоны до тех пор, пока, наконец, не выйдет сам вытеснитель. [c.18]

Особое значение имеют глобулины плазмы крови. Первоначально Тизелиус разделил их электрофоретически на три фракции 3- и /-глобулины, которые, однако, ие являются однородными, а представляют собой смеси белков одинаковой подвижности. Позднее Кон и Эдсалл нашли, что фракционированное осаждение спиртом ири низкой температуре более удобно для разделения глобулнновых фракций. Этим способом теперь в больших масштабах получают т-глобулин, В нем содержатся многочисленные антитела, обусловливающие иммунитет по отношению к патогенным микробам, и поэтому -(-глобулин используют для пассивной иммунизации против различных инфекционных заболеваний. [c.399]

Метод Тизелиуса особенно широко применяется для исследования биоколлоидов. Их электрофоретическая подвижность довольно сильно и специфически зависит от pH среды поэтому измерения производят в забуферениой среде. Изменяя pH и определяя соответствующую электрофоретическую подвижность объекта, можно построить ее зависимость от pH и найти изоэлектриче кую точку, т. е. то значение pH, при котором электрофоретическая подвижность обращается в нуль. Изоэлектрическая точка является очень важной константой для биоколлоидов. Путем изменения pH можно также изменять соотношение электрофоретических подвижностей компонентов смеси, и тогда при электрофорезе появляется несколько границ, соответствующих числу компонентов с достаточно различающимися подвижностями и . Такие отдельные компоненты можно четко различить. [c.157]

И менее точен, но зато значительно проще, чем метод Тизелиуса. На полоску фильтровальной бумаги, увлажненной буферным раствором, наносят в форме поперечной черточки или пятна исследуемый биоколлоидный раствор. Полоску помещают в горизонтальном положении в закрытое пространство, а концы ее погружают в буферный раствор, где находятся электроды. После подключения источника электродвижущей силы электрическое поле вызывает движение компонентов, находящихся в черточке или пятне, вдоль полоски. Скорость перемещения компонентов зависит от их электрофоретической подвижности. Через некоторое время электрофорез прекращают, бумагу высушивают и погружают в раствор красителя, который на биоколлоиде адсорбируется сильнее, чем на бумаге. По полученному изображению видно положение компонентов в конце электрофореза, и можно судить об их числе и электрофоретической подвижности. Из сказанного выше видно, что бумага играет роль пористой среды, препятствующей растеканию компонентов и их конвективному перемешиванию со средой, в которой протекает электрофорез . В последнее время вместо бумаги используют гелеобразные среды (агар-агар, желатин), которые дают более резко очерченные зоны. Электрофорез на бумаге (и в других средах) сопровождается побочными явлениями, такими, например, как перенос вещества, вызываемый миграцией испаряющегося буфера (Машбёф, Ребейрот и др., 1953 г.). Кроме того, было установлено (Шелудко, Константинов, Цветанов, 1959 г.), что, например, в желатине не только сама электрофоретическая подвижность некоторых красителей меньше, чем в воде или водных растворах, но и соотношение между подвижностями компонентов в этом случае совсем иное. Эти особенности метода еще не до конца изучены. Поскольку рассматриваемый метод имеет важное практическое значение, различные проблемы создаваемой в настоящее время теории электрофореза в пористых и гелеобразных средах п разнообразные методы его использования являются предметом многих научных трудов. Некоторое представление о них читатель может получить из монографии [6 1. [c.158]

Метод Тизелиуса. Этот метод в принципе сводится к методу подвижной границы, однако в нем много специфических особенностей. Измерения по этому методу проводят в приборе, который представляет собою усовершенствованный аппарат Кёна. Для создания резкой,границы между коллоидным раствором и боковой жидкостью в приборе Тизелиуса используют не краны, а сдвиг пришлифованных частей U-образной трубки относительно друг друга. На рис. VII, 25 дан разре основной части прибора, соответствующей U-образной трубке прибора Кёна. Нижняя часть трубки в момент наполнения верхней части боковой [c.208]

Принцип градиентно-элюентного варианта заложил Цвет. Он для ускорения вымывания из колонки зеленых, наиболее сильно сорбирующихся пигментов к проявляющему растворителю — петро-лейному эфиру — добавлял, этиловый спирт. Этим приемом до сих пор пользуются многие исследователи (в основном биологи), причем в процессе опыта часто добавляют к проявляющему растворителю не одно сильно сорбирующееся вещество, а несколько в последовательности, соответствующей увеличению их полярности. Такая последовательность определяется так называемым элюотроп-ным рядом. Усовершенствовали градиентно-элюентный вариант шведские ученые Тизелиус и его сотрудники в начале пятидесятых годов. Но теория не была разработана. Жуховицкий и Туркельтауб в 1954 г. предложили назвать этот вариант адсорбционным спектральным анализом и сделали попытку разработать теорию применительно к газовой хроматографий. Однако практического применения в газовой хроматографии в отличие от жидкофазной хроматографии этот вариант не получил. Основными препятствиями здесь являются трудности, возникающие при детектировании разделяемых компонентов, поскольку одновременно детектируется переменная концентрация вытеснителя, а также возникает необходимость менять или регенерировать адсорбент после каждого опыта. Это смещает нулевую линию на выходной кривой и вызывает потерю времени на замену и регенерацию адсорбента. [c.20]

Принцип градиентно-элюентного варианта заложил М. С. Цвет. Для ускорения вымывания из колонки зеленых, наиболее сильно сорбирующихся пигментов он добавлял к проявляющему раство рителю — петролейному эфиру — этиловый спирт. Этим приемом до сих пор пользуются многие исследователи (в основном биологи), причем в процессе опыта часто добавляют к проявляющему растворителю не одно сильно сорбирующееся вещество, а несколько, в последовательности, соответствующей увеличению их полярности. Такая последовательность определяется так называемым элютропным рядом. Усовершенствовали градиентно-элюент-ный вариант Тизелиус и его сотрудники (Швеция) в начале 50-х годов. Но теория не была разработана. А. А. Жуховицкий и [c.19]

В конце 30-х годов в области электрофореза наметилось новое направление, сыгравшее большую роль в изучении физикохимических свойств некоторых коллоидных систем и очень быстро развивающееся в настоящее время. Это направление связано с усовершенствованиями макроскопического метода электрофореза, сделанными Тизелиусом, Мак-Иннесом, Лонгсвордом и другими исследователями для применения электрофореза к анализу сложных белковых систем. Усовершенствования включали четыре основных момента 1) получение четкой границы между золем и боковой жидкостью, 2) подавление теплового эффекта в опыте, 3) выделение отдельных фракций белков в чистом виде, 4) применение метода Фуко—Тендера для определения границы движущихся в электрическом поле отдельных фракций белка по показателю преломления света. [c.132]

А. Тизелиус разработал метод изучения электрофоретической подвижности белков. От прибора, предназначенного для изучения лиозолей (см. рис. 34, а), прибор Тизелиуса отличается некоторыми конструктивными особенностями. Наиболее существенное из них — применение разъемных кювет прямоугольного сечения. Этим достигается возможность наблюдения за движением неокрашенных в видимой области белков с помощью специальных оптических систем. Концентрация белков на различных участках прямоугольной ячейки регистрируется по изменению показателя преломления. Изучение градиента показателя преломления при электрофорезе дает возможность проводить качественный анализ смеси белков и их препаративное разделение по различию электрофоретической подвижности. Этот метод назван свободным электрофорезом. [c.216]

Как метод анализа хроматография была предложена русским ботаником М. С. Цветом для решения частной задачи — определения компонентов хлорофилла. Метод оказался универсальным. Годом возрождения его является 1931 год, когда Кун, Виптерштейн и Леде-рер стали проводить широкие исследования различных растительных и животных пигментов, используя про-явительный вариант хроматографии, при котором анализируемые веш,ества разделяются, перемещаясь по слою сорбента в потоке растворителя. В 1940 г. шведский ученый А, Тизелиус разработал фронтальный и вытеснительный методы хроматографического анализа. Фронтальный метод заключается в том, что исследуемая смесь непрерывно подается под некоторым давлением на колонку с сорбентом. Компоненты смеси по-разному сорбируются и потому передвигаются по колонке с различными скоростями. Вытеснительный метод основан на том, что более сильно адсорбирующееся вещество вытесняет с поверхности адсорбента слабо адсорбирующееся и занимает его место. Поэтому после введения в колонку определенного количества исследуемой смеси начинают подавать вытеснитель — жидкость, адсорбирующуюся сильнее, чем все компоненты смеси. Тогда зоны веществ распределяются на слое по степени адсорбируемости и каждое последующее вещество, вытесняя предыдущее, подтолкнет его вперед. Этот метод позволяет сконцентрировать компоненты на слое адсорбента и удобен, в частности, для определения примесей. Дальнейшее развитие метода привело к появлению бумажной, тонкослойной и ионообменной хроматографии. Наиболее крупным скачком в развитии метода является создание английскимп химиками А. Мартином и Р. Сингом распределительной хроматографии, за что они были удостоены в 1952 г. Нобелевской премии. [c.326]

Адсорбционно-жидкостная хроматография после открытия ее Цветом (1903) спустя более чем 25 лет была впервые использована Куном и сотр. (1931) в качестве микроаналитического метода при разложении каротина. В жидкостной хроматографии сначала применялся проявительный метод, причем идея непрерывного разделения возникла позднее. Применение фронтального анализа и вытеснительного метода в жидкостной хроматографии последовало благодаря работам Тизелиуса (1940, 1943) и Классопа (1946). [c.23]

Электрофорез со свободно Пвпжущейся границей — или электрофорез Тизелиуса. Этот метод ксиользустся главным образом для анализа смесей белков п в отличие от зонного электрофореза дает представление об истинной подвижности мигрирующих частиц. [c.403]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология