Электрофоретический анализ

Рис. 81. Схема прибора Тизелиуса для электрофоретического анализа белков.

Электрофоретический анализ препаратов миозина и его [c.397]

Электрофоретические анализы проводились на аппарате Перкин — Эльмера, модель 38. Так как лигниновые растворы были сильно окрашенными, причем красный цвет поглощался, фото-запись показаний была затруднена. Разность светопоглощения [c.227]

Первые попытки разделения белков плазмы были основаны на фракционном осаждении их сульфатом аммония или спиртом. Фибриноген легко может быть получен методом высаливания. Электрофоретический анализ кровяной сыворотки показывает наличие в ней четырех основных фракций, названных альбумином и а-, р- и Y- Глoбyл и нa-ми. С улучшением техники разделения было показано, что эти фракции являются не индивидуальными белками, а группами белков, обладающими одинаковылш подвижностями. Дальнейшие успехи, достигнутые в период второй мировой войны Коном и Эдсоллом , были стимулированы большим спросом на пла шу, необходимую для предотвращения шока, зависящего от поддержания осмотического давления белками сыворотки. Цельная плазма содержит протеолитические ферменты, которые в большой мере расщепляют белки плазмы, поэтому получение белковой фракции крови в сухом виде сулило большие преимущества. [c.670]

Электрофоретический анализ растворимого дубового лигнина после каждой очистки показал, что при одинаковых условиях электрофоретическая подвижность заметно не изменялась. [c.227]

На основании этих результатов Норд пришел к выводу, что лигнины должны рассматриваться как смеси компонентов, обладающих сходными структурами, но, вероятно, имеющих и некоторые химические различия. Хотя электрофоретические анализы и дали некоторые сведения о чистоте и гомогенности препаратов лигнина, применение этого метода ограничено ввиду малых различий в скорости передвижения изучавшихся лигнинов. Поэтому можно рассматривать лигнин как продукт, принадлежавший к типу соединений, названных Штаудингером [135] групповыми веществами (см. Шуберт и Норд [123]). [c.229]

Введение Тизелиусом электрофоретического анализа следует рассматривать как начало нового весьма значительного направления в изучении белков сыворотки. [c.9]

Буферный раствор Михаэлиса очень удобен для иммуно-электрофоретического анализа белков сыворотки крови. Однако можно использовать и другие буферные растворы. В этих случаях, разумеется, следует готовить агаровый гель на том же буферном растворе, в котором проводится электрофорез. [c.140]

Следует заметить, что в каждом отдельном случае электрофоретического анализа разрабатывают метод выделения исследуемых белков в зависимости от их физико-химических свойств. В отдельных случаях белки выделяют и очищают способом хроматографической адсорбции. [c.45]

Измерение распределения радиоактивности в нерве за различные промежутки времени позволяет изучить кинетику транспорта (рис. 10.2). Если затем провести электрофоретический анализ отдельных сегментов в ДСН-полиакриламидном геле, то можно идентифицировать транспортируемые радиоактивные компоненты. [c.304]

Заполняют капиллярные трубки погружением в жидкую реакционную смесь, приготовленную для получения ПААГ. Под действием капиллярных сил жидкость заполняет трубки. При достижении специальной отметки капилляр сверху плотно закрывают и переносят в емкость с раствором смеси белков, подвергаемых электрофоретическому анализу. После погружения нижнего. конца капилляра в раствор и открытия верхнего конца происходит полное заполнение капилляра. Заполненные таким образом капиллярные трубки помещают в аппарат для микроэлектрофореза. При создании электрического поля в аппарате происходит разделение белков в соответствии с величиной заряда, размером и формой макромолекул. [c.66]

Электрофоретический анализ используют для исследования сыворотки крови, смесей белков, нуклеиновых кислот и т, д. Широкое применение получил для изучения биохимически важных объектов вариант электро ретического исследования — метод электрофореза на бумаге. Каплю исследуемого раствора наносят в определенную точку на полоску специальной фильтровальной бумаги, увлажненную буферным раствором (бумага играет роль своеобразного сосуда) концы полоски находятся в контакте с электродами. Подвергнутые электрофорезу составные части, обладающие различной электрофоретической подвижностью, переносятся на различные расстояния. После опыта бумагу высушивают и прокрашивают красителем, проявляя компоненты смеси. [c.207]

Кроме самого белка, в растворе всегда имеются ионы электролитов буферная система, используемая для поддержания pH среды, противоионы, нейтрализующие заряд белка часто добавляют нейтральные соли. Ниже будет показано, что точный электрофоретический анализ белковой смеси возможен только в том случае, если концентрация электролита в растворе значительно превышает эквивалентную концентрацию белка. Этим ограничивается минимальная концентрация электролита в растворе, которая и определяет в основном его электропроводность и выбирается обычно в пределах 0,2—0,05 М. [c.49]

Для выполнения электрофоретического анализа применяли камеру (рис. 1), представляющую собой ванночку из винипласта, разделенную винипластовой перегородкой на две сек-лии (/ и II). Между секциями установлен держатель 1 со стеклянными перекладинами 2 для бумаги. В одной секции 250 [c.250]

Однако электрофоретический анализ аминокислотного состава растворов катодной и анодной камер свидетельствует [c.77]

Рис. 47. Диаграммы электрофоретического анализа по Тизелиусу

Электрофоретический анализ биологических жидкостей. [c.278]

Одним из свойств, резко отличающих лектины от иммунных антител, является их гомогенность. Я имею в виду не физическую гомогенность — в больщинстве случаев не удавалось очистить лектины до такой степени, чтобы можно было судить об их гомогенности по данным электрофоретического анализа или уль- [c.92]

Удивительно, однако, что соответствие получено и при определении молекулярных весов сывороточного альбумина, лактоглобулина и некоторых других белков, которые при электрофоретическом анализе оказались смесями из нескольких компонентов. В то время как молекулярные веса, определенные при помощи рентгеноструктурного анализа (табл. 5), прекрасно согласуются с молекулярными весами, полученными другими [c.65]

Электрофорез используется как для аналитического разделения белков, так и для препаративного выделения чистых белковых фракций так как и-образная кювета, применяемая для электрофоретического анализа, оказалась слишком мала для последней задачи, то для препаративных целей она была соответствующим образом видоизменена [83, 84]. [c.95]

Применение ионообменной хроматографии оказалось успешным для таких важных сравнительно низкомолекулярных белков, как лизоцим [123], )ибонуклеаза [60], цитохром С [83, 96], химотрипсиноген [61], инсулин 14] и папаин [73]. В каждом случае разделение производили на смоле R -50 в карбоксильной форме. Разделение смеси белков яичного белка на три компонента было произведено с помощью фронтального анализа на смоле дауэкс-50 [115, 116]. Одновременный электрофоретический анализ исходной альбуминовой фракции подтвердил присутствие трех основных компонентов. Бордман и Партридж [11—13] распространили ионообменную методику на разделение таких больших молекул, как СО-гемоглобин быка и СО-гемоглобин плода овцы. Денатурация была доведена до минимума тем, что работу проводили вблизи 0°. [c.331]

Изменение дзета-потенциала коллоидных частиц в зависимости от их скорости и температуры воды выражают графически. Проведенные измерения могут быть использованы для построения графика изменения этого потенциала (мВ) в зависимости от количества электролита. Перенос анализируемой воды от места отбора пробы в лабораторию не оказывает влияния на результат электрофоретического анализа. [c.375]

Рис. 46. Диаграммы электрофоретического анализа по Тизелиусу I— нормальная сыворотка, II—плазма крови при множественной миэломе III—сыворотка крови при нефрозе

Электрофоретический анализ на бумаге [751, 752] [c.99]

К сожалению, строго ограниченный объем учебника и крайне сжатая программа по физической и коллоидной химии для медвузов не позволяет значительно расширить изложение материала. Тем не менее было признано целесообразным несколько расширить описание хроматографического и электрофоретического анализов, потенциометрического определения pH. Основательной переработке подверглись следующие главы растворы, электрохимия, химическая кинетика, катализ. Значительно расширен практикум. [c.3]

Энзиматический метод секвенирования основан на энзиматическом введении нуклеотида, терминирующего полинуклеотидную цепь (рис. 5.4). В этом случае обычно используют дидезоксирибо-нуклеозидтрифосфаты, в которых дезоксирибоза-З -ОН, представленная в нормальных нуклеотидах, отсутствует. Такой модифицированный нуклеотид, внедряясь в цепь ДНК с помощью ДНК-полимеразы, блокирует присоединение следующего нуклеотида. Синтез in vitro молекулы ДНК в присутствии затравки (праймера) и небольшого количества одного из таких модифицированных нуклеотидов приводит к образованию фрагментов ДНК в виде лесенки . Если для получения таких фрагментов применять меченую ДНК (обычно проводят четыре реакции синтеза с использованием различных нуклеотидов, терминирующих цепь), а электрофоретический анализ проводить на четырех дорожках геля, то можно определить последовательность нуклеотидов. В настоящее время используют модифицированный метод, сводящийся к флуоресцентному анализу наборов фрагментов ДНК в процессе движения по одной дорожке геля. [c.109]

Электрофоретический анализ на бумаге. Для анализа препаратов арсеназо III методом электрофореза синтезируют эталонный образец арсеназо III и свидетели — возможные примеси моно- и бисазосоединения. Эталонный образец и свидетели очищают до такого состояния, чтобы на электрофТ>реграмме наблюдалась одна зона или в зоне содержалось не менее 907о основого вещества. [c.56]

Протеолипид, связанный с другим фактором — Ро, образует своеобразную пору, через которую протоны проникают через мембрану. Он взаимодействует с ингибиторами энергетического переноса, такими как Ы,Ы -дициклогексилкарбо-диимид (ОССО). Однако существует еще один менее устойчивый сопрягающий фактор Рг. Даже в самых очищенных препаратах АТРазы при электрофоретическом анализе в присутствии додецилсульфата натрия на полиакриламидном геле выявляются другие неиден-тифицированные полосы. Таким образом, ясно, что сопряжение движущей силы протона Митчелла и синтеза АТР обусловливает существование сложной биохимической структуры. По-видимому, потребуется провести еще значительное исследование, прежде чем мы поймем молекулярные механизмы данного процесса. [c.182]

А. В, К. Тизелнус положил начало работам в области электрофореза, в результате которых создал метод электрофоретического анализа биоколлоидов, [c.679]

Разделение гидроли.зата закончилось в момент, когда катодная камера по результатам электрофоретического анализа содержала только основные аминокислоты. Однако задачу получения основной фракции аминокислот с помощью четырехкамерного прибора нельзя было считать решенной, так как концентрация основных аминокислот была незначительной, а увеличение длительности электродиализа приводило к тому, что в катодной камере появлялись примеси нейтраль- [c.80]

Электрофоретический анализ по Тизелиусу получил широкое распространение, при исследовании нормальных и патологических сывороток (см. рис. 47), чистых белков и их смесей, нуклеопро-теидов, детергентов и др. Некоторые модификации прибора допу- [c.96]

Этим обстоятельством воспользовались для электрофоретического анализа белкового состава биологических жидкостей. Давно было известно, что сыворотка крови неоднородна и состоит, по крайней мере, из двух белков — альбумина и глобулина, причем последний также не является однородным компонентом крови. Наличие различных фракций сыворотки устанавливалось путем высаливания ртдельных белков различными концентрациями соответствующих солей. Анализ выделенных фракций показал, что альбумин и глобулин отличаются своими изоэлектрическими пунктами. Поэтому при электрофоретическом анализе сыворотки, имеющей pH выше 7, эти белки, заряжаясь отрицательно, должны передвигаться к аноду с различной скоростью в силу различной величины своих зарядов. [c.278]

Так как нзоэлектрическая точка большинства белков лежит в кислой среде, то водные растворы их обычно заряжены отрицательно. В крови и органах животных среда немного щелочная. Это свойство белков используется при электрофоретическом анализе белкового состава биологических жидкостей. Например, в состав сыворотки крови входит альбумин и глобулин, которые отличаются своими изоэлектрическими точками (табл. 55). Поэтому при электрофоретическом анализе сыворотки крови, имеющей pH выше 7, эти белки, заряжаясь отрицательно, должны передвигаться к аноду с различной скоростью в силу различной величины своих зарядов. Наибольший заряд будет у альбумина сыворотки, так как он при этих условиях наиболее удален от своей изоэлектрической точки. Отсюда сывороточный альбумин наиболее подвижен. Происходит расслоение ранее однородной системы на фракции, движущиеся к аноду с различной скоростью. [c.359]

Несмотря на то, что яичный альбумин образует прекрасные кристаллы, он не является однородным веществом и состоит, по данным электрофоретического анализа, по крайней мере, из двух фракций [148, 149]. Яичный альбумин составляет примерно 50% общего количества всех белков яичного белка курицы 15% приходится на долю кональбулшна — белка, остающегося в фильтрате после осаждения кристаллов яичного альбумина [150]. Ко-нальбумин можно получить непосредственно из яичного белка путем фракционирования разбавленным этиловым спиртом [151]. Он оказался флавопротеином с молекулярным весом 87 ООО и изоэлектрической точкой, лежащей при pH 6,1 с солями железа кональбумин образует комплекс красного цвета (см. стр. 239). Из яичного белка можно еще выделить глобулин, который получил название яичного глобулина, однако о его свойствах известно мало [152]. [c.194]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология