Тизелиуса метод определения

В 1925 г. Тизелиус предложил метод определения подвижности заряженных частиц, основанный на измерении скорости перемещения подвижной границы, образующейся между растворенным веществом и фоновым электролитом. Хотя метод Тизелиуса в подавляющем большинстве случаев используют для анализа органических веществ с большим молекулярным весом [188], тем не менее Альберти и Кинг в 1951 г. применили метод подвижной границы для исследования иодидных комплексов кадмия [69]. [c.103]

Зная электрофоретическую подвижность белка, установленную в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы, и учитывая предполагающиеся условия опыта, можно вполне удовлетворительно предсказать поведение белка в приборе типа аппарата Коммонера. Относительные подвижности, измеренные в аппарате Свенссона, хорошо согласуются с соответствующими величинами, полученными другим методом. Поэтому оказывается удобным добавлять в случае необходимости в раствор окрашенный белок с целью определения траектории его движения, по которой можно рассчитать пути перемещения других белков. [c.72]

Оптические методы исследования распределения концентраций в процессе седиментации или в состоянии седиментационного равновесия довольно сложны. Обычно используется зависимость показателя преломления раствора от его концентрации. Этот способ регистрации используется и в других исследованиях — при определении коэффициента диффузии или в случае электрофореза по методу Тизелиуса, при обсуждении которых он и будет рассмотрен более подробно. [c.64]

В последнее время для установления чистоты белка приобрел большое значение электрофорез. Давно известно (Харди, 1899 г.), что белки мигрируют к аноду в щелочном растворе и к катоду в кислом растворе. Скорость, с которой происходит миграция белка, зависит от соотношения положительных и отрицательных зарядов в макромолекуле, а также и от формы последней следовательно, скорость миграции при определенном pH является характерной константой каждого белка. По методу А. Тизелиуса (1937 г.) раствор белка вводят в нижнюю часть и-образ- [c.417]

Оценка чистоты. — Шведские химики Сведберг и Тизелиус внесли большой вклад в развитие химии белка разработкой аналитических методов, чрезвычайно удобных для характеристики этих, высокомолекулярных соединений. Метод ультрацентрифугирования Сведберга служит для определения молекулярного веса. При вращении с очень большой скоростью ячейки, содержащей раствор белка, молекулы белка под действием центробежных сил движутся от центра со-скоростью, зависящей от величины молекулярного веса. Специальная оптическая система дает возможность наблюдать и фотографировать ячейку во время центрифугирования. Молекулярный вес может быть, найден либо из определения седиментационного равновесия, либо по-скорости седиментации- Хотя теоретически первый метод точнее, для достижения равновесия требуется длительное время, и поэтому более точные значения получают, исходя из определения скорости седиментации. При применении ультрацентрифуги можно установить также гомогенность молекул (по величине и форме). Тизелиус предложил (1937) электрофоретический метод разделения молекул белка в электрическом поле молекула белка движется со скоростью, определяющейся величиной молекулы, ее формой, количеством и типом ионизированных групп. Материал, кажущийся гомогенным по растворимости, может содержать компоненты, отличающиеся по электрофоретической подвижности. Жестким критерием чистоты является профиль кривой распределения, получаемой при противоточном распределении молекул (Крейг, см. 31.29). [c.674]

Фронтальный метод— старейший вариант хроматографии. Название метода было введено Тизелиусом [10], а первыми примерами его применения в газовой хроматографии служат работы [11, 12]. С развитием проявительной хроматографии фронтальный метод почти утратил свое значение в качестве аналитического метода. Сегодня он представляет интерес прежде всего для определения термодинамических характеристик, в частности для газохроматографического измерения изотерм (гл. XII, разд. 5). [c.369]

Тизелиус значительно улучшил метод подвижной границы, сделав его очень точным и изящным методом электрофоретического изучения белков. Фактически им создан новый метод, при помощи которого можно также разделить смесь белков на чистые компоненты. Сосуд Тизелиуса состоит из нескольких пришлифованных частей, которые могут перемещаться друг относительно друга при помощи особого механического устройства. Наблюдается движение фракций белка, и когда определенная фракция оказывается в данной части трубки, ее изолируют передвижением этой секции трубки. Как л в простой и-образной трубке, раствор белка находится в нижней части сосуда. Поверх раствора белка наслаивают буфер с той же концентрацией электролита, что и растворе белка. Между раствором белка и буфером должны получаться резкие границы. На рис. 37 изображен сосуд Тизелиуса. [c.208]

Элюентный анализ, фронтальный анализ и вытеснительное проявление. Кроме применяющегося обычно элюентного анализа, описанного выше, существует еще два основных метода проявления хроматограмм (хроматографического анализа) фронтальный анализ и вытеснительное проявление. Оба метода были разработаны Тизелиусом (в 1940 и в 1943 гг.). Условия работы с колонкой по этим трем методам соверщенно различны. Фронтальный анализ состоит в пропускании раствора через колонку из адсорбента, предварительно промытую чистым растворителем, в определении концентрации выходящего из колонки раствора и установлении зависимости между его концентрацией и объемом. Таким образом, получают характерные кривые с одной ступенью для каждого из растворенных веществ. При проявлении методом вытеснения вещества, подлежащие разделению, адсорбируются в верхней части колонки и через колонку пропускают раствор вещества, обладающего большей энергией адсорбции. Это вещество играет роль проявителя, вытесняющего вещества, подлежащие разделению, которые, в свою очередь, вытесняют друг друга. Определяют зависимость между концентрацией вещества в исходящей из колонки жидкости и ее объемом. Измерения высоты и длины каждой ступени кривой дают возможность провести качественный и количественный анализ составных частей смеси при условии, что проявитель количественно вытесняет исследуемую смесь. Методы Тизелиуса, усовершенствованные Клессоном и другими, особенно важны для разделения бесцветных веществ и при применении таких адсорбентов, как уголь. За концентрацией составных частей смеси в жидкости, исходящей из колонки, непрерывно следят по показателям преломления, электропроводности или других физических свойств. Клессон показал, что методом фронтального анализа можно осуществить количественный анализ смеси, состоящей из шести жирных кислот (на- [c.1490]

Уравнение [4] для различных компонентов дает зависимость между адсорбционными изотермами (определенными, например, при помощи фронтального анализа) и высотой ступеней в вытеснительном анализе. Уравнение может быть решено графическим методом, предложенным Тизелиусом. [c.287]

Альберти и Кинг [69] применили метод подвижной границы для определения констант устойчивости иодидных комплексов кадмия. Скорость миграции определяли с помощью прибора Тизелиуса. Ввиду того что при проведении электромиграции в свободном растворе весьма трудно сохранить четкую границу раздела между раствором, содержащим исследуемые ионы, и фоновым электролитом, авторам пришлось определять подвижность ионов кадмия при 0°С, т. е. при температуре, когда вязкость растворов максимальна. [c.113]

Определение электрофоретической однородности препаратов гамма-глобулинов может быть произведено также с помощью метода подвижной границы в аппаратах типа Тизелиуса. [c.990]

При этом методе можно наблюдать ряд ступеней концентрации вытекающего раствора. Скорость движения фронта данного растворенного вещества вдоль колонки является функцией количества, адсорбированного единицей веса адсорбента. Тизелиус выразил адсорбцию различных растворенных веществ через удельный задерживаемый объем , под которым понимается объем жидкости, проходящей через колонку, содержащую 1 г адсорбента, до тех пор пока определенное вещество не [c.74]

Для того чтобы обнаружить более низкие концентрации, чем это возможно при оптическом методе полос и в опытах с вымыванием (так как вследствие падения плотности вытекающего раствора создается нестабильность в кювете), Тизелиус и Клессон [238] применили интерферометрический метод для определения показателя преломления. Определение производилось в кювете емкостью около О, мл, через которую вытекающий [c.76]

В конце 30-х годов в области электрофореза наметилось новое направление, сыгравшее большую роль в изучении физикохимических свойств некоторых коллоидных систем и очень быстро развивающееся в настоящее время. Это направление связано с усовершенствованиями макроскопического метода электрофореза, сделанными Тизелиусом, Мак-Иннесом, Лонгсвордом и другими исследователями для применения электрофореза к анализу сложных белковых систем. Усовершенствования включали четыре основных момента 1) получение четкой границы между золем и боковой жидкостью, 2) подавление теплового эффекта в опыте, 3) выделение отдельных фракций белков в чистом виде, 4) применение метода Фуко—Тендера для определения границы движущихся в электрическом поле отдельных фракций белка по показателю преломления света. [c.132]

Как метод анализа хроматография была предложена русским ботаником М. С. Цветом для решения частной задачи — определения компонентов хлорофилла. Метод оказался универсальным. Годом возрождения его является 1931 год, когда Кун, Виптерштейн и Леде-рер стали проводить широкие исследования различных растительных и животных пигментов, используя про-явительный вариант хроматографии, при котором анализируемые веш,ества разделяются, перемещаясь по слою сорбента в потоке растворителя. В 1940 г. шведский ученый А, Тизелиус разработал фронтальный и вытеснительный методы хроматографического анализа. Фронтальный метод заключается в том, что исследуемая смесь непрерывно подается под некоторым давлением на колонку с сорбентом. Компоненты смеси по-разному сорбируются и потому передвигаются по колонке с различными скоростями. Вытеснительный метод основан на том, что более сильно адсорбирующееся вещество вытесняет с поверхности адсорбента слабо адсорбирующееся и занимает его место. Поэтому после введения в колонку определенного количества исследуемой смеси начинают подавать вытеснитель — жидкость, адсорбирующуюся сильнее, чем все компоненты смеси. Тогда зоны веществ распределяются на слое по степени адсорбируемости и каждое последующее вещество, вытесняя предыдущее, подтолкнет его вперед. Этот метод позволяет сконцентрировать компоненты на слое адсорбента и удобен, в частности, для определения примесей. Дальнейшее развитие метода привело к появлению бумажной, тонкослойной и ионообменной хроматографии. Наиболее крупным скачком в развитии метода является создание английскимп химиками А. Мартином и Р. Сингом распределительной хроматографии, за что они были удостоены в 1952 г. Нобелевской премии. [c.326]

Хроматография — наиболее часто используемый аналитический метод. Новейшими оматографическими методами можно опрвд шпъ газообразные, жидкие и твердые вещества с молекулярной массой от единиц до 10 . Это могут быть изотопы водорода, ионы металлов, сингетические полимеры, белки и др. С помощью хроматографии получена обширная информация о строении и свойствах органических соединений многих классов. Применение хроматографических методов для разделения белков оказало огромное влияние на развитие современной биохимии. Хроматографию с успехом применяют в исследовательских и клинических целях в самых разных областях биологии и медицины, в фармацевтике и криминалистике дпя терапевтического мониторинга в связи с ростом нелегального употребления наркотиков, идентификации антибиотиков и отнесения их к той или иной группе антибактериальных препаратов, дпя определения наиболее важных классов пестицидов и дпя мониторинга окружающей среды. Такие достоинства как универсальность, экспрессность и чувствительность делают хроматографию важнейшим аналитическим методом. Более десяти работ (1957—1980), выполненных с применением хроматографических методов, были удостоены Нобелевских премий среди авторов методических работ, удостоенных премий, А. Тизелиус (1948), А. Мартин и Р. Синдж (1956). [c.265]

К методам вытеснительной хроматографии примыкает основанная на том же принципе вытеснительная хроматография с носителем, предложенная Тизелиусом и Хегдалом [39]. Различие заключается в том, что во избешание перекрывания зон применяют так называемые носители, т. е. вещества с промежуточным сродством к иониту. Носители образуют свои полосы между полосами, соответствующими разделяемым веществам. В качестве носителей следует выбирать такие вещества, которые либо не влияют на определение разделяемых веществ, либо могут быть легко удалены после разделения, например, посредством выпаривания или экстракции. Главное ограничение этого метода заключается в том, что подобрать подходящие носители трудно, а для многих систем даже невозможно. Иногда выбор носителей облегчается тем, что более сильные органические основания вытесняют из ионообменных колонок более слабые это же замечание относится и к органическим кислотам. [c.111]

Электрофорез и электродиализ представляют собой полезные методы не только для пра1яической очистки глин, каолинов (см. А. 1Г1, 65) и других природных силикатов, но также и Для физического определения высокомолекулярных растворов. Электродиализ часто применялся при изучении сложных органических и физиологических систем. Брадфилд и Тизелиус получили прекрасные результаты количественного разделения высокомолекулярных лротеинов путем применения специального электродиализатора. Возможно, Что и другие смеси коллоидных силикатов могут быть соответствующим образом изучены и дифференцированы. [c.258]

О. М. Тодес [139] дал подробную теорию установившегося режима неравновесной динамики сорбции смесей веществ. Он показал, что скорости движения отдельных сорбционных волн по своим величинам располагаются в порядке, обратном относительной сорбируемости компонентов смеси. При этом каждая отдельная волна распространяется со скоростью, большей той, с которой распространялось бы каждое отдельное вещество при той же входной концентрации. В этом процессе проявляется десорбирующее действие сильнее сорбирующегося компонента смеси. Для случая динамики сорбции двух веществ, сорбция которых подчиняется изотерме Ленгмюра, даны ко.личественные закономерности процесса, выведены формулы скоростей движения фронтов, а также формулы для определения концентраций компонентов в зонах. Для более сложных систем дано решение в общей форме. С. Клас-сон и А. Тизелиус [77, 228], независимо от О. М. Тодеса [139], дали расчетные формулы для определения концентраций веществ в зонах первичной, фронтальной хроматограммы и на этой основе разработали экспериментальный метод хроматографического анализа смесей веществ, получивший название фронтального анализа. [c.24]

Представляет интерес определение подвижности и разделение микроколичеств ( 10 М) ионов неорганических веществ методом капиллярного электрофореза по Мартину и Эвериртсу [72]. Хотя в принципе этот вариант не отличается от классического метода Тизелиуса и метода Лонгсворта, некоторые детали заслуживают внимания. В частности, регистрация зон отдельных видов ионов осуществляется с помощью термопары, неподвижно фиксированной в одной точке капиллярной трубки, в которой происходит разделение (длина капилляра 1 м, внутренний диаметр 0,4 мм, внешний 0,7 мм). Так как тепловая емкость трубки мала, то ее температура по длине будет представлять собой ступенчатую функцию, пропорциональную градиенту потенциала в зонах. Высота ступени будет, очевидно, обратно пропорциональна подвижности иона, а расстояние между ступенями будет определять количество ионов данного вида. [c.51]

Пятый, наиболее простой способ получения хроматограмм в потоке был предложен в 1940 г. Тизелиусом [40, 41] и описан С. Классоном [8, 12]. Этот способ называется фронтальным анализом, и он заключается в том, что через столбик адсорбента пропускается только исследуемая смесь, и хроматограмма не проявляется. Это дает возможность произвести качественный и количественный анализ смеси без разделения ее на отдельные компоненты при этом наиболее слабо адсорбирующийся компонент может быть отделен от смеси в чистом виде, но не количественно. Указанный способ широко применяется для определения относительной силы адсорбционного сродства, т. е. адсорбируемости какого-либо вещества в растворе любого растворителя, по отношению к данному адсорбенту, и он весьма удобен для определения изотермы адсорбции. Обычно при определении адсорбируемости и снятии изотермы адсорбции метод заключается в том, что измеряется объем вытекшего чистого растворителя до проскока (т. е. до появления в фильтрате) исследуемого вещества на основании выделившегося объема чистого растворителя вычисляют количество адсорбированного вещества, которое характеризует силу сродства данного вещества к адсорбенту. О том, как экспериментально определять адсорбируе-мость веществ, будет сказано ниже. [c.47]

Для того чтобы анализировать хроматограмму в потоке, можно пользоваться различными методами. Обычно во время вытекания фильтрата из колонки его собирают в виде отдельных фракций, которые затем подвергают анализу. Тизелиус [41] предложил анализировать хроматограмму 1в потоке по изменению какого-либо свойства фильтрата, например его показателя преломления или удельного веса. Наибольшее распространение получило измерение показателя преломления ввиду быстроты определения и малого расхода фильтрата. Тизелиус, а также Классон [8, 12, 72] разработали и сконструировали автоматически действующий интерферометр для непрерывного определения показателя преломления фильтрата по мере его вытекания. Кривая, изображающая графически изменение показателя преломления, ак функцию вытекающего количества фильтрата (в виде объема или веса), носит название выходной кривой или адсорбциограммы. Именно этим способом в настоящее время широко пользуются для контроля за ходом адсорбционного разделения нефтяных продуктов в хроматографических колонках. Обычно вместо трудно доступного интерферометра Тизелиуса для измерения показателя преломления отдельных проб фильтрата, а иногда и отдельно собираемых фракций, пользуются широко распространенными рефрактометрами, например типа рефрактометра Аббе. Очень удобен проточный рефрактометр, который сконструировали [c.52]

В статьях настоящего сборника представлены основные современные методы анализа белков и аминокислот. Сводные обзоры этих методов даны в статьях П. Кирка Химическое определение белков и особенно А. Мартина и Р. Синджа Аналитическая химия белков . Последующие три статьи Э. Снелла Микробиологические методы анализа аминокислот , А. Тизелиуса Адсорбционный анализ смесей аминокислот и Г. Свенссона Препаративньи электрофорез и ионофорез , специально посвящены трем группам методов, получившим за последние годы особенно большое значение. Необходимо, однако, отметить, что теория хроматографических и электрофоретических методов анализа разобрана в этих статьях недостаточно. Кроме того, в статьях сборника неполно представлены изотопный и спектрофотометрические методы анализа. В статье С. Фокса Конечные аминокислоты в пептидах и белках рассматривается весьма важный для изучения структуры белков, но, как видно из материала статьи, еще очень слабо изученный вопрос о конечных группировках полипептидных цепей. Две заключительные статьи сбор- [c.10]

Следует упомянуть также еще об одной модификации вытеснй-тельной хроматографии, а именно методе вытеснения с носителем, предложенном Тизелиусом и Хегдалом [ Ч. Метод заключается в том, что во избежание перекрывания соседних зон разделяемых ионов используют вещества с промежуточными сорбционными свойствами, подбирая эти вещества так, чтобы их можно было бы легко удалить из конечного раствора, например упаривапием, если носители мешают определению разделяемых веществ. При развитии вытеснительной хроматограммы носители располагаются между соответствующими зонами и таким образом дают возможность получить чистые компоненты (в смеси с носителем, разумеется). Использование органических веществ с их широкой градацией кислотных и основных свойств дает возможность довольно тонко подбирать носители для соответствующих разделений. Тем не менее большинство исследователей предпочитают пользоваться элютивными методами, описание которых читатель найдет в следующем параграфе. [c.315]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология