Флуоресценция стероидов

Соляная кислота. Хроматограмму погружают в конц. НС1, помещают на стеклянную пластинку и прогревают при 60°С в течение 5 мин. 17а-Алкилированные стероиды дают характерную окраску и флуоресценцию. [c.421]

Треххлористая сурьма (реактив № 12) не дает со стероидами характерных различий в окраске. После опрыскивания и нагревания в течение 15— 20 мин появляются пятна, дающие неспецифическую флуоресценцию в УФ-свете. [c.270]

Для идентификации можно прежде всего использовать реактив № 151, ванилин — серная кислота. Реактив должен быть свежеприготовленным и его следует наносить на слой в не слишком больших количествах. При нагревании в течение 5—10 мин при 110° появляются окрашенные пятна стероидов, которые в УФ-свете не дают флуоресценции. Если покрыть хроматограмму второй стеклянной пластинкой, окрашенные пятна сохраняются продолжительное время. [c.270]

О специфичности методики свидетельствуют идентичность спектров возбуждения стандартов стероидов соответствующих фракций элюата плазмы крови и плазмы с добавлением стандартов анализируемых стероидов. Линейная зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации, характеризующая помимо прочего и специфичность методики, позволила при расчете концентрации гормонов пользоваться калибровочным графиком без введения поправочных коэффициентов, учитывая лишь флуоресценцию применяемых реактивов. [c.102]

Наиболее часто используют реагент Карра-Прайса (ОР-5), т. е. насыщенный раствор хлорида сурьмы(III) или сурьмы(V) в хлороформе. Этот реагент дает хорошие результаты, особенно при обнаружении А -стероидов, образующих окрашенные пятна, в основном красно-оранжевые. Распространен следующий метод обнаружения хроматограмму выдерживают в атмосфере паров иода или опрыскивают раствором иода в петролейном эфире или водным раствором иодида калия. В последнем случае некоторые стероиды, например холевая кислота, кортизон и др., образуют синие пятна. Соединения с карбонильными группами, особенно сопряженными с двойной связью, можно обнаружить с помощью динитрофенилгидразина (ОР-27). А -З-Кетостероиды можно обнаружить по их флуоресценции после опрыскивания раствором гидроксида натрия и нагревания или, еще лучше, по [c.117]

Исследование флуоресценции, появляющейся после обработки стероидов этими реагентами, позволяет обнаружить стероиды с родственными структурами при их совместном присутствии [17]. [c.269]

Реакция с концентрированной серной кислотой. Около 1 мг стероида растворяют без нагревания в 1 мл концентрированной серной кислоты. Полученный бесцветный или желтый раствор при добавлении 1 мл воды приобретает желтую (с переходами до красно-коричневой) окраску или интенсивную флуоресценцию. [c.448]

Идентификацию компонентов смеси проводят по величинам Rf. Количеств, определение в-в в зонах мож.но.осуществлять непосредственно на слое сорбента по площади хроматографич. зоны, интенсивности флуоресценции компонента или его соед. с подходящим реагентом, радиохим. методами. Использ. также автоматич. сканирующие приборы, измеряющие поглощение, пропускание, отражение света или радиоактивность хроматографич. зон. Разделенные зоны можно снять с пластин вместе со слоем, десорбировать компонент в р-ритель и анализировать р-р спектрофотометрически. С помощью ТСХ можно определить в-ва в кол-вах от Ю до 10 г ошибка определения не менее 5—10% число определяемых компонентов не более 20—30. ТСХ широко использ. для разделения и анализа как неорг.,,так и орг. в-в, в т. ч. синтетических полимеров, лек. ср-в, пестицидов, аминокислот, липидов, ПАВ, витаминов, стероидов. [c.584]

Детектирование по флуоресценции применяют в биологии, медицине, форма-кологии, при анализе пищевых продуктов и контроле загрязнения окружающей среды. Флуоресцентными свойствами, т.е. способностью излучать свет (в видимой области спектра) под действием ультрафиолетового излучения, обладают многие биологически-активные вещества лекарства, витамины, стероиды. Красители, соединения с сопряженными связями, в том числе полиядерные ароматические углеводороды, также можно определять с помощью флуориметрического удетектора, при этом чувствительность определения велика. [c.155]

Концентрированную Н2804 наносят тонким слоем на стеклянную пластинку, поверх кладут фильтровальную бумагу. Вещества, содержащие 11-гидроксильную группу, особенно соединения, содержащие Е, дают яркую зеленую флуоресценцию. Реакция пригодна для идентификации стероидов 1903. [c.420]

Согласно другому варианту методики, используется обработка дымящей (15% 80з) Н250 . Эстрогены дают в видимом свете окраску от оранжево-желтой до красно-коричневой, в УФ-свете флуоресценцию от желто-зеленой до красно-коричневой. Чувствительность 5 мкг. Этот метод чувствителен, но неспецифичен для С ,- и Сз стероидов. Предел обнаружения для прегнандиолов (оранжевые пятна) 5 мкг для андростандионов (розовые пятна) 50 мкг. [c.420]

Реагент 1 %-ный раствор НзЗО в этаноле. Хроматограмму погружают в реагент, промокают и прогревают при 100-120°С. Внимательно следят за хроматограммой и вынимают из печи при первых признаках обугливания. Красную окраску с оранжевой флуоресценцией дают ен-4-оны-З чувствительность 1 мкг. Подавляющее большинство стероидов вступает в реакцию, например в случае тетрагидрокортизона наблюдается желтая, а в случае тетрагидрокортизола-синяя флуоресценция чувствительность 2 мкг. [c.420]

Реагент 10 г ТХУ в 20 мл этанола. Хроматограмму погружают в раствор, промокают и прогревают при 70°С в течение 10 мин. Многие стероиды дают желтую или розовую флуоресценцию (360 нм), но прегнантриолы-3,17,20 дают характерную синюю флуоресценцию (2 мкг). [c.421]

Фенантрен ,4HJ2 выделяют из антраценовой фракции при переработке каменноугольной смолы. Бесцветные кристаллы, т. пл. 100 °С. Нерастворим в воде, растворим в этаноле, диэтиловом эфире, бензоле. Растворы имеют голубую флуоресценцию. Применяют в синтезе красителей. Фрагмент фенантрена, в том числе частично или полностью гидрированный, содержится во многих природных соединениях (алкалоиды, терпены, стероиды). ПДК 0,8 мг/м . [c.504]

Второй общий метод проявления для стероидов — опрыскивание насыищнным раствором треххлористой сурьмы п хлороформе. С большинством стероидов реагент дает яркие цветные нятна, окраска которых усиливается нри нагревании (100—120°С и выше). Цвет флуоресценции, вызываемый этим реактивом, различный. [c.140]

После впитывания экстракта в (верхние слои сорбента в колонку осторожно вводили 12—14 мл смеси бензол-абсолютный этанол в соотношении 8 2. Отбор фракций (по объему) производился при скорости элюции 0,25 мл мин. Первые 3,5 мл элюата отбрасывали, следующие 3,0 мл содержали кортикостерон, а последующие 3,0 мл — кортизол. Вторую и третью фракции, собранные в разные пробирки, выпаривали в токе азота, после чего к сухому остатку добавляли по 3,0 мл свежеприготовленной смеси, состоящей из концентрированной серной кислоты и абсолютного этанола, взятых в соотношении 3 1, энергично встряхивали в течение 20 сек и через 20 мин измеряли интенсивность флуоресценции при 470/540 ммк на нестандартном флуорометре, созданном специально для этих целей. Изучение спектров возбуждения и испускания стандартных растворов стероидов и соответствующих порций элюата при исследовании экстрактов плазмы крови производили на спектрофлуорометре модели МПФ-2А. [c.102]

Ядерно-физические методы детектирования в ТСХ широко применяются для решения различных прикладных аналитических задач. В хроматографии меченые соединения часто используют в качестве внутреннего стандарта для онределения разрешающе способности того или иного метода, а также для калибровок в методе гашения флуоресценции. В химии и биохимии радиоактивные метки вводят в состав синтезируемых продуктов для проведения различных исследований, в частности, при усгановлении структуры вещества, чистоты препаратов, выхода целевых продуктов. Наиболее широко тонкослойный радиохрома-тографический анализ используют для исследования аминокислот, протеинов, углеводов, стерипов, стероидов, нуклеиновых кислот и липидов. Ядерно-физические методы детектирования зон на тонкослойных хроматограммах применяются также и в неорганическом анализе [9]. Меченые продукты используют как для аналитических, так и для препаративных целей. [c.122]

Для этого ТСХ-пластинку (в слое сорбента не было флуоресцирующих веществ) помеща.ли в камеру объемом 18 л, в которую, добавляли 6 г карбоната аммония, и выдерживали. 3—12 час. при ПО—150° С. Исследовавшиеся стероиды образовывали флуоресцирующие производные после выдержки в течение 3 час. при 110° С. Измеряли флуоресценцию сканирующими устройствами. Такилг образом определяли вещества, у которых возникает флуоресценция под УФ-излучением. На линии подвода элюата был установлен фотометр, что позволило сравнить его показания и результаты сканирования. Предел обнаружения при использовании описываемого лютода равнялся нанограммовым ] оличествам. [c.157]

Метод бы.л пспробован в отношении других стероидов и оказался пригодным для некоторых из них. Приведен график, из которого видно, что в случае холестерина интенсивность флуоресценции продукта реакции строго проиорциона.чьпа его концентрации (от 1 до к Y в 10 м.л). [c.14]

Заслуживает внимания синяя флуоресценция, возникающая в результате реакции некоторых стероидов со щелочами. Особенно это относится к фенольным стероидам, таким, как эстрадиол, эквиленинацетат (Буш [2]), эквиленин, эквилин, эстрон, н к некоторым кислотам, например дегидро-холевой. [c.342]

К этой группе можно отнести упомянутые выше случаи образования желтого пятна при реакции с синим тетразолием и возникновение синей флуоресценции со щелочью у некоторых фенольных стероидов и стероидных кислот. [c.342]

Сначала получают суспензию сорбента в специфическом для него растворителе. Для очень маленьких хроматограмм предметное стекло микроскопа покрывают слоем сорбента, погружая его в суспензию. Для хроматограмм большего размера на стеклянную пластинку наносят несколько слоев узких лент по обоим краям таким образом, чтобы во время хроматографии они были вертикальными. Число слоев определяет толщину конечного слоя сорбента. Суспензию осторожно наливают на стекло, после чего выравнивают скользящим стеклянным стержнем, который захватывает при этом всю ширину пластинки. Затем пластинку высушивают и ленты удаляют. Пластинки обрабатывают так же, как при хроматографии на бумаге. Образец наносят микропипеткой и высушивают. Пластинку ТСХ помещают в камеру, содержащую растворитель, и проявляют восходящей хроматографие (рис. 8-11). После того как фронт растворителя почти достигнет верхнего края, пластинку вынимают из камеры и сушат. Для получения двумерной хроматограммы высушенную пластинку можно повторно хроматографировать под прямым углом в другом растворителе. Положение пятен, как и при хроматографии на бумаге, определяют по окраске, по флуоресценции или при опрыскивании различными реагентами, которые реагируют с веществами в пятне с образованием окрашенных продуктов. Обычно используют следующие реагенты нингидрин для аминокислот, родамин В для липидов, хлорид сурьмы для стероидов и терпенов, серную кислоту с последующим нагреванием практически для всех органических соединений (происходит обугливание), перманганат калия в серной кислоте для углеводородов, анисовый альдегид в серной кислоте для углеводов, пары брома для оле-финов и т. д. Вещества можно элюировать путем соскребания [c.188]

Реакция с п-толуолсульфокислотой [1]. Для обнаружения стероидов лучше применять п-толуоЛсульфокислоту, чем серную кислоту, так как при этом отсутствует обугливание и всегда получается более интенсивная окраска. К 10—100 мкг стероида присыпают сверху слой 20 мг кристаллической п-толуолсульфо-кислоты и нагревают до 110—120 °С. Стероиды дают при этом окраску от желтой до красно-коричневой и флуоресценцию. [c.448]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология