Михаэлиса константа кажущаяся

Рис. 36. Определение максимальной скорости и кажущейся константы Михаэлиса для гидролиза метилового эфира М-ацетил-Ь-ва-лина, катализируемого а-химотрипсином, в координатах Лайнуивера-Берка

Рис. 68. Влияние концентрации ингибитора на величину кажущейся константы Михаэлиса ферментативной реакции в случае связывания с активным центром фермента двух молекул конкурентного ингибитора

При избытке субстрата величина кажущейся константы скорости реакции с ингибитором определится в основном соотношением к 1к+х, с одной стороны, и суммой к+2 VI к-х — с другой. Если лимитирующим скорость реакции звеном (т. е. более медленным процессом) является образование свободного фермента из комплекса Михаэлиса, то кажущаяся константа скорости Ы при некотором избытке [5] станет постоянной и не зависящей от дальнейшего изменения [8]. Это значит, что предельное значение кажущейся константы скорости реакции с ингибитором в этом случае будет равно к-х + А+а). При соизмеримых значениях к и к-х + к+ ) зависимость от [8] при [8] Кт будет сложнее. [c.120]

Для определения кинетических и равновесных параметров уравнения (6.27) выражение для кажущейся константы Михаэлиса [c.223]

Уравнение (5.6) описывает зависимость скорости ферментативной реакции, протекающей по схеме (5.1), от начальной концентрации субстрата и позволяет определять на опыте значения констант йг и Кз, являющихся важнейшими характеристиками ферментативной реакции. В том случае, когда определяемые из эксперимента константы 2 и К являются эффективными величинами (зависящими от pH среды, присутствия в системе ингибиторов или активаторов, наличия дополнительных стадий в схеме (5.1) и т. д.), их называют соответственно каталитической константой ( кат) и кажущейся константой Михаэлиса (/(т(каш)) данной ферментативной реакции. Тогда уравнение (5.6) выглядит следующим образом [c.78]

Кинетические параметры У т — максимальная скорость и Кт(кят)— кажущаяся константа Михаэлиса ферментативной реакции— функции констант скоростей индивидуальных стадий (см. соотношения 5.10, 7.2, 7.3). Для раздельного определения этих параметров в общем случае нельзя использовать интегральные методы обычной неферментативной кинетики вследствие смешанного порядка ферментативных процессов. Например, метод Гуггенгейма (см. гл. 2) пригоден для обработки кинетики ферментативных реакций только в случае. т(каж)> [8]о или [Е]о>[8]о, т. е. только при наличии кинетики первого порядка по субстрату или продукту. [c.166]

Таким образом, роль диффузии в кинетике реакций, катализируемых иммобилизованными ферментами, сводится к увеличению кажущейся константы Михаэлиса [c.270]

Величина кажущейся константы Михаэлиса для всех трех случаев имеет одинаковый вид [128] [c.183]

Величины кажущихся констант Михаэлиса для субстратов колеблются в зависимости от природы используемого буфера, pH, температуры, источника выделения фермента и прочих условий. Кажущиеся константы Михаэлиса цитоплазматических креатинкиназ равны для Mg—АТФ—0,5—1,0 мМ Mg—АДФ—0,2—0,8 мМ для креатина — [c.292]

В этом случае значение кажущейся константы скорости ингибирования приближается к величине константы скорости реакции ингибитора с комплексом Михаэлиса и не зависит от дальнейшего увеличения концентрации субстрата. Это естественно, так как при избытке субстрата практически весь фермент находится в форме Е8. [c.122]

Кт — кажущаяся константа Михаэлиса (величина, обратная длине отрезка, отсекаемого на оси абсцисс при использовании метода двойных обратных величин) [c.12]

В случае ПА, для которой субстратом является анион бензил-пенициллина, желательно использование положительно заряженной матрицы. В этом случае сорбция субстрата носителем приводит к уменьшению величины кажущейся константы Михаэлиса, т. е. к улучшению связывания субстрата и фермента. Кроме того, при использовании анионитов происходит смещение рН-оптиму-ма каталитической активности фермента в область меньших значений pH раствора. Для большинства биологически активных веществ — лабильных соединений, используемых в качестве субстратов, смещение рН-оптимума каталитической активности фермента в область нейтральных pH является крайне желательным, поскольку это позволяет проводить ферментативную реакцию в более мягких условиях, уменьшающих инактивацию субстрата и продуктов реакции и увеличивающих общий выход процесса. [c.240]

Если имеется достаточно данных для построения кривых титрования при различных потенциалах, то можно вычислить кажущиеся константы ионизации/С1 и /Сг или значения р/С] и р/Сг- Как показано на рис. 4, где Во предполагается равным 0,2 в, К = 0 , /С2 = 10" . кривая зависимости Еср от pH имеет форму, изображенную на рисунке, и приводит к указанным значениям р/С. Чтобы детально проанализировать этот и другие случаи, необходимо обратиться к работам Кларка [13], Михаэлиса [68] и других исследователей. [c.75]

Константа Михаэлиса для субстрата Коэффициент, связывающий вязкость с длиной цепи Коэффициент, связывающий седиментацию с длиной цепи Кажущаяся константа равновесия для перехода от полностью нативного к полностью денатурированному состоянию К- Макроскопическая константа равновесия. Константа равновесия для об- [c.521]

При этом из зависимости скорости реакции от концентрации субстрата при различных концентрациях ингибитора можно было бы наблюдать кажущийся эффект неконкурентного ингибирования (влияние концентрации ингибитора на максимальную скорость при постоянном значении наблюдаемой константы Михаэлиса). В реакции ингибирования РОН-синтетазы индометацином такой кажущийся эффект неконкурентного ингибирования действительно имеет место. В раствор РОН-синтетазы вводили индометацин в различных концентрациях, смесь фермента с ингибитором инкубировали около часа для установления равновесия, замораживали равновесие понижением температуры до 4°С, после чего изучали зависимости скорости от концентрации арахидоновой кислоты, вводя в реакционную ячейку смесь фермента с ингибитором. Действительно, наблюдаемые закономерности формально эквивалентны случаю неконкурентного ингибирования. Однако смысл этой зависимости для системы индометацин — РОН-синтетаза совершенно отличен от смысла механизма классического неконкурентного ингибирования. В обсуждаемой системе ингибитор блокирует часть активных центров фермента, при этом, естественно, характеристики свободной формы фермента, такие, как наблюдаемая константа Михаэлиса, остаются без изменения. [c.11]

Преобразуя выражение для кажущейся константы Михаэлиса, получим [c.226]

Рнс. 83. Зависимость кажущейся константы Михаэлиса от концентрации ингибитора Ii (при [1а] = onst) в присутствии двух взаимозависимых конкурентных ингибиторов [c.228]

Зависимость кажущейся константы Михаэлиса от начальной концентрации субстрата для гидролиза бензилпенициллина, катализируемого пенициллинамндазой. [c.175]

Из этого уравнения ясно видны особенности ингибирования уравнение имеет тот же самый вид (линейность графиков сохраняется), максимальная скорость реакции не изменяется, но кажущаяся константа Михаэлиса возрастает по сравнению с Кт для неингибиро-ванной реакции в (СЯд-ЬО раз. На этом основании значение Кд можно определить экспериментально, поскольку определение в отсутствие Q дает Кт, а в присутствии Р получается /(т(<Э/Сд1)4 Если Р = 0 или /С<з очень мала, что указывает на низкое сродство р к ферменту, то ингибирования не наблюдается и кажущаяся Кт имеет нормальное значение. Далее, если Ао настолько велико, что определяет значение знаменателя в уравнении (17), т. е. если концентрация субстрата достаточна для достижения максимальной скорости реакции, то член QKQ опять-таки не влияет на величину знаменателя и максимальная скорость реакции не изменяется. Таким образом, ингибирование носит конкурентный характер оно выражено в наибольшей степени при высокой концентрации ингибитора или низкой концентрации субстрата и исчезает при очень низкой концентрации ингибитора или очень высокой концентрации субстрата. Это весьма наглядно видно на графиках, изображающих кинетику нормальной и конкурентно ингибированной ферментативных реакций (фиг. 8). [c.69]

В таблице 3 приведены результаты кинетического исследования ацилирования папаина ж-нитрофениловым эфиром карбо -бензоксиглицина [10] в условиях [E]oS>[S]o. При изучении этой реакции в стационарном режиме было найдено, что величина кажущейся константы Михаэлиса равна (1,894=0,17) -10 М, а вели-чина кат //Ст(каж) равна (1,15+0,08) -105 сек-. Принимая трехстадийную схему протекания ферментативной реакции (9.7), найти, [c.191]

Во всем исследованном интервале pH значение кажущейся константы Михаэлиса постоянно (см. табл. 40), в то время как рН-завиеимости каталитической константы и константы скорости вто- [c.198]

Кажущаяся величина константы Михаэлиса для субстратов (фрук-тозо-6-фосфата и АТФ) зависит от pH реакционной среды, в которой проводится определение ферментативной активности и от концентрации второго субстрата. В зависимости от условий эксперимента она может изменяться в широких пределах для фруктозо-6-фосфата — от [c.238]

Величины кажущихся констант Михаэлиса колеблются в зависимости от используемого буфера, pH, температуры и других условий. В трнс-НС1 буфере, pH 7,4, Кт для АДФ — 0,25 мМ, для фосфоенолпирувата — 0,048 мМ. [c.270]

Если использовать допущение о стационарности и учесть в уравнении материального баланса для фермента не только свободный фермент и комплекс Е5, но и ком)плекс Е1, то нетрудно убедиться в том, что в случае конкурентного ингибирования зависимость скорости от концентрации субстрата аналогична по виду уравнению (6-15). Однако константа А"м долж1на быть заменена на кажущуюся конста1нту Михаэлиса (/См),. зависящую от концентрации ингибитора [c.27]

Если константа скорости Ьа, в схеме (6-47) не равна нулю, может-иметь место либо ингибирование, либо активация. При = модифи катор либо увеличивает кажущуюся константу Михаэлиса (ингибирование), либо уменьшает ее (активация). Максимальная скорость остаетс неизменной. Моно и др. [35] называют ферментные системы с подобными кинетическими свойствами /С-системами. Если же K = Ki, а то мы имеем истинную К-систему. В общем случае в присутствии модификатора происходит изменение как кажущейся константы Михаэлиса,. так и кажущейся максимальной скорости. [c.31]

Измерение кинетических констант иммобилизованных ферментов не дает истинных констант, эквивалентных полученным в гомогенных растворах, потому что на измеряемые параметры оказывают существенное влияние физические факторы, такие как диффузия. По этой причине максимальная скорость реакции и константа Михаэлиса должны расматриваться как кажущиеся величины V=Vksm и Кт=Кт каж). Кт каж) опрсделяется, следователь-но, как концентрация субстрата, при которой скорость реакции соответствует половине Укаж- Другие кинетические константы должны быть представлены также как соответствующие кажущиеся величины. [c.421]

Поверхность нерастворимого носителя с ковалентно связанным ферментом в водной суспензии окружена неперемешиваемым слоем растворителя [15]. При ферментативной реакции в неиереме-шиваемом слое перпендикулярно к нему устанавливается градиент концентрации субстрата. Насыщение иммобилизованного фермента происходит при концентрации субстрата, более высокой, чем это требуется для насыщения соответствующего нативного фермента в растворе. Это приводит к возрастанию кажущейся константы Михаэлиса Кт(каж). [c.423]

Иммобилизация позволяет изучать ферменты в условиях, которые обычно приводят к нх агрегации. Иммобилизация химотрипсина на стекле позволила Танизава и Бендеру [49] исследовать влияние апротонных дшюлярных органических растворителей на кинетику катализируемого химотрипсином гидролиза в условиях, приводящих к агрегации свободного химотрипсина. В ходе этого исследования было найдено, что кажущиеся константа Михаэлиса Кт(каж) и константа скорости деацилирования з(каж) существенно зависят от концентрации органического растворителя. [c.437]

Несмотря на кажущуюся сложность реакции, вне зависимости ог числа и природы интермедиатов, принимающих участие в механизме реакции, стационарная кинетика процесса будет описываться уравнением Михаэлиса. Для характеристики ферментативных реакций обычно определяют оба параметра входящие в уравнение Михаэлиса — Ментен максимальную скорость Ут и константу Михаэлиса Кт- Важно отметить, что без детального знания механизма реакции интерпретация йкат и Кт как констант связывания фермента субстратом и константы скорости превращения фермент-субстратного комплекса неправильна, поскольку для разных кинетических схем константы ккат и Кт могут отражать совершенно различные процессы (ом. табл. 1), тем не менее эти характеристики легко определяются экспериментально и в ряде случаев несут весьма важную информацию о свойствах каталитической реакции. [c.14]

Мы видим, что весь эффект конкурентного торможения на кинетике реакции заключается в кажущемся росте второй константы Михаэлиса в (1-[-ЛГ 1) раз. Следовательно, подавляющее действие ингибитора снимается путем соответствующего увеличения концентрации субстрата. В этом и заключается смысл конкуренции молекул субстрата и ингргбитора за места в активном центре фермента. В диаграмме Лайнуивера и Бэрка появле- [c.160]

Эти уравнения определяют кажущиеся константы диссоциации /Сд которые могут быть отнесены к наблюдаемому потенциалу по способу, предложенному Кларком [12, 13] и другими исследователями [27, 33, 68, 83, 85]. Михаэлис и Шуберт [67] приводят теоретические кривые образования димеров типа ВО (рис. 5). Цифра на каждой кривой соответствует величине 5Кл, которая является произведением константы диссоциации на 8 8 выражает сумму молярных концентраций восстановленных и окисленных молекул, т. е. 8 = [0]+[В]+2[В0]. Из этих кривых видно, что если степень димеризации достаточно мала, то экспериментальная кривая окажется почти такой же, как и для неосложненного случая. Если же степень димеризации достаточно велика, то кривая имеет две ступени. Как отмечали Михаэлис и Шуберт [67], само собой разумеется, [c.81]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология