Фосфолипиды, определение фосфор

Работа 76. Определение общих фосфолипидов в сыворотке крови по содержанию в них фосфора (УИРС) [c.238]

Определение содержания фосфолипидов осуществляется на основании анализа содержания липидного (липоидного) фосфора, т. е. фосфора, определяемого в экстракте липидов. Для этих целей возможно использовать многие методы, поскольку липиды во всех случаях подвергаются минерализации. Существенным моментом является лишь трудность минерализации образцов, в которых фосфолипиды составляют лишь небольшую долю в сравнении с триглицеридами. Часто для ускорения минерализации используют хлорную кислоту [2], однако, увеличив время минерализации, можно применять и серную. Полученные величины содержания липидного фосфора умножают на усредненный лецитиновый коэффициент 25 и находят суммарное количество фосфолипидов. [c.217]

Для определения фосфора в пятнах фосфолипидов, полученных после разделения в системе хлороформ — метанол — аммиак (65 25 5), силикагель с фосфолипидами переносили на фильтр аспиратора, как это описано в разделе 11, элюировали их [c.39]

Общее содержание фосфолипидов в масле облепихи, определенное по количеству фосфора [14], составляет 1%. Идентификация их произведена хроматографией в тонком слое силикагеля-гипса. Газо-жидкостной хроматографией исследованы жирнокислотный состав фосфолипидов. [c.374]

Для проведения количественного определения фосфолипидов по фосфату ну жно проверить силикагель на содержание в нем фосфора. Если фон фосфора значителен, силикагель промывают водой, многократно перемешивая суспензию, оставляют на 8—12 ч, после чего воду с самыми мелкими частицами осторожно сливают, а силикагель высушивают в кюветах на воздухе, сначала при комнатной температуре, а затем в течение 48 ч при 110—115°С. [c.72]

О количественном содержании фосфолипидов судили по молярному содержанию фосфора. Содержание фосфора определяли по методу Блэка и Хеммонда (Blak, Hammond, 1965) в модификации А. В. Жукова и А. Г. Верещагина (1970), которую мы полностью приводим ниже. Применяли колориметрический метод определения фосфора, используя его способность давать фос-форно-молибденовый комплекс, который при восстановлении по методу Блэка и Хеммонда хлоридом олова (Sn+ ) в кислой среде образует окрашивание гетерополикислот молибдена (Мо+ ). [c.37]

Составные компоненты фосфолипидов для количественного анализа вначале обрабатывают концентрированной серной кислотой, затем снимают слой силикагеля и сжигают для определения фосфора. Для этого хроматограммы опрыскивают 18 н. раствором серной кислоты, нагревают при 110° до обугливания пятен пятна соскабливают в пробирку. Рядом с последней фракцией соскабливают в пробирку пустой участок, равный обугленному. Добавляют 1 мл H IO4 (уд. вес 1,70), вводят две стеклянные бусины и нагревают на песчаной бане 3 часа. Охлаждают, вводят 5 мл дистиллированной воды, нагревают и фильтруют через ватман № 44. Пробирки и фильтр дополнительно смывают 1 мл теплой дистиллированной водой. Охлаждают и проводят реакцию молибденовой сини. Для этого добавляют 1 мл 2,5% раствора молибдата аммония и 0,4 мл восстанавливающего раствора (1-амино-2-нафтол-4-суль-фоновая кислота), перемешивают, нагревают на кипящей водяной бане в течение 7 минут. Фотометрируют при 830 ммк. Стандартная кривая строится в пределах 0,5—5 мкг фосфора. Наилучшие результаты получены при оптимальных условиях развития окраски [194], т. е. после нагревания растворов с концентрацией 1 н. раствора фосфора на кипящей водяной бане в течение 5 минут. Тонкослойная хроматография с успехом применяется для анализа липидов крови у больных с поражением печени [147] и др. [c.90]

Окрашивание фосфора сульфатмолибденовой жидкостью в присутствии олова, количественное определение фосфора - на колориметре. При этом сахарофосфаты извлекают слабым раствором хлорной кислоты, фосфолипиды - смесью спирт эфир при многократной обработке осадка в течение 38 ч при комнатной температуре фосфор нуклеиновых кислот [c.402]

Извлечение и определение фосфолипидов. Остаток в центрифужной пробирке после извлечения фосфора кислоторастворимой фракции последовательно обрабатывается 10—20 мл этанола в течение 5—6 минут при комнатной температуре, 10— 15 мл смеси этанола и серного эфира (1 1) на кипящей водяной бане в течение 10 минут с иопользованием обратного холодильника. Затем центрифугируют при 3000 об1мин в течение 10 минут. Центрифугаты переносят в мерную колбу на 100 мл. Остаток дважды промывают при тех же условиях, сначала 10 мл этанола, затем 10 мл спирто-зфирной смеси и эфиром (центрифугат 1). [c.28]

Митохондриальные фосфолипиды характеризуются особенно высокой степенью ненасыщенности в сердечной мышце на каждый атом фосфоли-нидного фосфора приходится в среднем 3,2 двойной связи. Эта ненасыщен-ность, видимо, имеет определенное функциональное значение, так как каталитическая активность любого из четырех комплексов при экстракции липидов жировыми растворителями резко снижается, а при добавлении ненасыщенных фосфолипидов (например, липидов из митохондрий, лецитина из яиц, мяса и сои или же синтетического о леи л лецитина) снова восстанавливается. При этом чем больше степень ненасыщенности добавляемых липидов, тем резче выражен их активирующий эффект. Роль фосфолипидов, по-видимому, двояка 1) они стабилизируют активные конформации белков дыхательной цепи, как каждого в отдельности, так и их комплексов, и 2) они способствуют взаимодействию активных белков с другими важнейшими компонентами — коферментом Q, факторами, необходимыми для окислительного фосфорилирования, а также со структурными белками. [c.392]

Пластинки с идентифицированными пятнами фосфолипидов фотографировали способом контактной печати (см. стр. 32). Количественное содержание этих веществ измеряли или при помощи денситометра, или элюированием пятен для определения содержания в них фосфора, которое в дальнейшем пересчитыйа-лось на фосфолипиды. [c.31]

Как можно видеть из данных табл. 4 и рис. 26 и 28, смесь фосфолипидов семян сои на пластинках с закрепленным слоем силикагеля делится на 13 пятен. Эти липиды были идентифицированы нами при помощи метчиков (фосфатидная кислота, фосфатидилэтаноламип, фосфатидилхолин, фосфатидилинозит, сфингомиелин) и при проведении специфических реакций (опрыскивание нингидрином для обнаружения азотсодержащих фосфолипидов, раствором Драгендорфа — для обнаружения фосфолипидов, содержащих холип, и т. д. см. стр. 30). Определение содержания фосфора в пятнах хроматограммы показало, что главными фосфолипидами семян сои являются фосфатидилхолин и фосфатидилэтаноламип. [c.39]

В суспензию 30 г силикагеля в 60 мл воды вводят 1,5 г сульфата аммония. После разделения пластинку сушат и помещают на 15 мин в камеру, атмосфера в которой насыщена парами 7рег-бутилгипохлорита. По окончании выдержки пластинки нагревают 15 мин при температуре от 150 до 180°С в зависимости от природы анализируемого соединения. Авторы работы [200] предлагают обрабатывать аналогичным способом слои, приготовленные обычным образом. После элюирования и сушки слои нагревали при ПО—150°С в закрытой камере с бикарбонатом или гидроксидом аммония. Для количественных определений на тонких слоях применяли рентгеновскую флуоресцентную спектрометрию. Разработано сканирующее устройство [201] для рентгеновского спектрометра, опробованное на различных соединениях фосфора, серы и галогенов, обеспечивающее специфическое обнаружение отдельных элементов с пределом обнаружения около 2 мкг. Либби [202], пользуясь этой методикой, исследовал фосфаты, фосфолипиды, бромсалициламиды и серосодержащие органические соединения и описал три метода калибровки. Рентгеновскую флуоресценцию применяли для определения фосфолипидов [203] и пестицидов [204]. [c.341]

Другой колориметрический метод, который можно применить к фосфолипидам, заключается в следующем образец растворяют в хлорной кислоте и определяют содержание фосфора с помощью раствора молибдата аммония. Курри и др. [161] обрабатывали пятна на силикагеле 0,4 мл 70 %-ной хлорной кислоты в специальной пробирке, осторожно выпаривая на маленьком огне до полного высушивания. Остаток растворяли в 12 %-ной хлорной кислоте и нагревали 10 мин на бане с кипящей водой. Такая обработка затрагивает не только фосфолипиды в результате ее силикагель переходит в нерастворимое состояние. После охлаждения определяли содержание фосфора по методу Вагнера [153, 264, 265] к пробе добавляли 0,3 мл 2,5 %-ного раствора молибдата аммония и 0,3 мл свежеприготовленного 10 %-ного раствора аскорбиновой кислоты. Смесь тщательно встряхивали и выдерживали 2 ч при 38°С, после чего раствор центрифугировали и определяли его коэффициент поглощения при длине волны 820 нм. Робинсон и Филлипс [266, 267] вместо аскорбиновой кислоты использовали в качестве восстановителя 1-амино-2-нафтол-4-сульфоновую кислоту, а Растоджи и др. [268]—раствор 2,4-динитрофенилгидразина в соляной кислоте. Дойзаки и Зиве [269] применили для подобных определений несколько другой метод они обрабатывали липиды серной кислотой с добавкой пероксида водорода. [c.99]

Иногда нужно элюировать фосфолипиды с адсорбционного слоя для последующего анализа, но в некоторых случаях это трудно сделать. Френч и Андерсен [270] чередовали двукратное элюирование смесью хлороформ—метанол (2 1) с двукратным элюированием смесью хлороформ—метанол—вода(3 5 2). Раузер и др. [271, 272] считают ненужным элюировать фосфолипиды с силикагеля для определения содержания фосфора, а Тихи [273] нашел, что для образования синего комплекса фосфомоли-7 [c.99]

Фосфолипиды (фосфатиды) представляют собой группу липидов, содержащих в качестве обязательного компонента фосфорную кислоту. По природе входящего в фосфолипиды спирта их разделяют на глицерофосфолипиды и сфингофосфолипиды. Общую концентрацию фосфолипидов определяют по содержанию в них липидного фосфора, на долю которого приходится 4% молекулярной массы фосфолипидов. В качестве унифицированного предложен метод определения общих фосфолипидов сыворотки по содержанию общего фосфора в липопротеинах, осаждаемых трихлоруксусной кислотой (способ Зильверсмита и Даниса, 1950). (У здорового взрослого человека концентрация липидного фосфора составляет 1,97-4,68 ммоль/л.) [c.238]

Принцип. Фосфолипиды и хо.пестерин экстрагируются смесью спирта и эфира. Часть экстракта используют для определения холестерина по Блюру, другая часть подвергается минерализации с последующи. определением концентрации фосфолипидов по неорганическому фосфору. [c.72]

Хроматограмму окрашивают парами йода, как описано ниже, для обнаружения пятен фосфолипидов. Ее слегка увлажняют над водяным паром и снимают силикагель в каждом пятне лезвием бритвы. Снятый силикагель переносят в отдельную пастеровскую пипетку с тампоном из стекловолокна в суженном ее конце. По пипетке слегка постукивают до тех пор, пока силикагель не осядет в виде слоя на тампоне из стекловаты. Такую колонку из силикагеля промывают 2 мл смеси хлороформ — метанол (1 1, по объему), а затем 2 мл метанола для элюирования фосфолипидов. Элюаты собирают в пробирки со стеклянными пробками. Каждый фосфолипид разливают поровну в две 15-мл пробирки со стеклянными пробками и в ампулу для лиофилизации и в дальнейшем анализируют. Растворители выпаривают при 37°С в токе азота. Одна пробирка предназначена для анализа на суммарный органический фосфор с целью определения количества каждого присутствующего фосфолипида. Две другие пробы можно подвергнуть кислотному или щелочному гидролизу с последующей идентификацией веществ для установления их возможной структуры. [c.315]

Разделение проводят на тонком слое силикагеля КСК (размер частиц 20—30 мкм) иа пластинках размером 20x20 см. Первая система растворителей представляет собой смесь хлороформа, метанола и 7н аммиака в отношении 60 35 5, а вторая — хлороформа, метанола, ледяной уксусной кислоты и воды в отношении 80 40 7.4 1.2. Угол между двумя направлениями хроматографирования равен 90°. По окончании хроматографирования пластинки высушивают и проявляют в парах йода. Полученные коричневые пятна обводят иглой и используют для определения количества и радиоактивности фосфолипидов. Количество и радиоактивность определяют с двух параллельных пластинок, на которые наносят липидный экстракт из расчета 40—60 мкг липидного фосфора на каждую пластинку, что соответствует количеству экстракта с одного среза весом 20—40 мг (для одновременного определения количества и радиоактивности необходимо брать [c.95]

Сжигание фосфолипидов до неорганического фосфата провс прямо на силикагеле в 1.0 мл 72%-ной хлорной кислоты при 20 в течение 40 мин. В охлажденные пробы добавляют 2—3 мл е и центрифугируют при 10 тыс g. Центрифугат переносят в npo6f с меткой на 5 мл и силикагель промывают еще 1—2 мл е с последующим центрифугированием для полного извлечения ( фора. Центрифугаты объединяют и проводят цветную реак для определения количества фосфора (Bartlett, 1959). [c.96]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология