Глюкозы спектрофотометрическое

Первый раздел Практикума должен помочь студентам освоить методические приемы и основы аналитической биохимии. Он содержит описание основных принципов и методов концентрационного анализа, принятых в биохимии (спектрофотометрического, колориметрического, манометрического), в частности, для количественного определения гликогена, глюкозы, неорганического фосфата, фосфорных эфиров углеводов, молочной и пировиноградной кислот. В раздел включены работы, посвященные анаэробному превращению углеводов. Каждая задача, выполняемая студентом, предусматривает анализ чистоты исходного препарата углевода или его фосфорного эфира, получение ферментного препарата (гомогената или экстракта ткани), постановку биохимического эксперимента, количественную оценку результатов. Количественное определение веществ проводится несколькими методами, результаты сопоставляются. Так, выполняя задание по теме Превращение фруктозо-1,6-дифосфата в молочную кислоту , студент анализирует фруктозо-1,6-дифосфат по фруктозе и по фосфату, молочную кислоту определяет спектрофотометрическим и колориметрическим методами. Подобным образом выполняются работы, связанные с превращением других фосфорных эфиров углеводов, гликогена, глюкозы. [c.5]

При спектрофотометрическом измерении скоростей реакции часто используют метод переменного времени. Этот метод заключается в нахождении времени по пересечению кинетической кривой двух пороговых значений поглощения (см. рис. 19-25). Поскольку время обратно пропорционально скорости реакции, то косвенно оно пропорционально начальной концентрации реагирующих веществ. При определении глюкозы (см. рис. 19-25), чему будет равно количество глюкозы в пробе, которая соответствует времени протекания, равному 42,0 с [c.675]

Пероксид водорода, образующийся в результате ферментативного окисления глюкозы, реагирует с иодидом в присутствии молибдена (VI) в качестве катализатора с образованием трииодида, который сильно поглощает свет при 360 нм. Спектрофотометрическое контролирование хода реакции при 360 нм дает кинетические кривые, подобные показанным на рис. 19-25. Начальную скорость реакции определяют изме- [c.669]

Как известно, точное определение глюкозы очень важно для диагностики диабета и ряда других болезней, именно поэтому интенсивно разрабатываются новые методы определения этого сахара [489 — 491]. В биологических средах глюкозу чаще всего определяют спектрофотометрическими [492 — 495] и электрохимическими методами [496 — 501]. В некоторых из новых методов используется сопряженная ферментативная система глюкозооксидаза — пероксидаза. В этом случае протекают следующие реакции [c.172]

При подобном же фотолизе глюкозы, )-глюконовой кислоты и метил-О-глюкопиранозида они наблюдали, что в кислых перхлоратных смесях (рН=1—2) спектрофотометрическая концентрация и(IV) возрастала в течение 15—30 мин после того, как прекращалось освещение. Эта реакция, проходящая в темноте, напоминает фотохимическую реакцию, наблюдаемую в системе уранил—оксалат (см. разд. 2). (Считается, что реакция медленного комплексообразования четырехвалентного урана, при которой образуются ионы с более высокой поглощательной способностью, не имеет места.) Эта реакция была [c.308]

Несмотря на большие надежды, возлагаемые на потенциометрические биосенсоры, и немалое количество интересных результатов, данная область ионометрии до сих пор не получила заметного распространения в практике аналитической химии [10а, 33а]. Единственное достойное упоминания исключение представляет глюкозный ферментный электрод, который, однако, будучи амперометрическим сенсором, по сути не является предметом обсуждения в настоящей книге. И даже в этом случае подавляющее число клинических анализов на глюкозу по-прежнему ведется спектрофотометрическим методом. [c.238]

В спектрофотометрическую кювету вносят следующие компоненты реакционной среды (указаны конечные концентрации) 30 мМ трис-НС1 буфер, pH 7,5, 10 мМ глюкозу, 15 мМ Mg l2, 2,5 мМ АТФ, [c.217]

Недавно для определения активности фермента был предложен экспресс-метод [74], позволяющий непрерывно регистрировать образование глюкозы непосредственно в спектрофотометрической кювете. При избытке глюкозооксидазы и пероксидазы в системе лимитирующей стадией сопряженной реакции является гидролиз целлобиозы и скорость образования окраски прямо пропорциональна скорости образования целлобиозы. Определение активности проводится в рН-оптимуме целлобиазы (pH 4,5-5,0), занимает 2-10 мин Метод позволяет в 10-20 раз повысить чувствительность определения целлобиазной активности. Недостатком данного способа является, прежде всего, нестабильность реагента при хранении даже в течение дня. [c.140]

В спектрофотометрическую кювету объемом 3 мл помещают следующие компоненты (указаны конечные концентрации) 40 мМ трис-НС1 буфер (pH 7,5), 2 мМ глюкозо-1-фосфат, 1 мкМ глюкозо-1,6-дп-фосфат, 0,2 мМ НАДФ, 10 мМ M.g l2, 0,5 ед/мл дегидрогеназы глюко-зо-6-фосфата (в объеме 50 мкл) и 0,02 ед/мл (в объеме 50 мкл) фосфоглюкомутазы. Реакцию начинают добавлением фосфоглюкомутазы. Смесь перемешивают и регистрируют нарастание оптической плотности при 340 нм. [c.228]

Активность глюкозофосфатизомеразы может быть определена двумя методами химическим — по измерению образующегося в прямой реакции фруктозо-6-фосфата (количество фруктозо-6-фосфата определяют по фруктозе) и энзиматическим — по измерению образующегося глюкозо-6-фосфата в обратной реакции (количество глюкозо-6-фосфата определяют в сопряженной системе с помощью дегидрогеназы глюкозо-б-фосфата). Скорость ферментативной реакции регистрируют спектрофотометрически по нарастанию НАДФН (см. с. 7). [c.233]

В спектрофотометрическую кювету вносят следующие компоненты (указаны конечные концентрации) 50 мМ трис-НС1, pH 7,2 1,0 мМ АДФ 30—10 мМ Мд(СНзСОО)г 2 мМ глюкозу 0,25 мМ НАДФ гексокиназу 0,5 ед/мл дегидрогеназу глюкозо-6-фосфата 0,5 ед/мл, креатинкиназу. Следят за изменением оптической плотности если из- [c.294]

Количественно К. и его компоненты определяют гравиметрически (осаждение иодом), амперометрич. и потенцно-метрич. титрованием, спектрофотометрически (комплексы с иодом), а также с помощью кислотного и ферментативного гидролиза. В последних случаях образующуюся глюкозу определяют хим. или ферментативными методами. [c.498]

Аналогичные выводы могут быть сделаны и на основании спектрофотометрического изучения комплексообразования в системе иолиол — германиевая кислота [561, 562]. Комплексы с фруктозой (О ), галактозой (О ), маннитом (О ), глюкозой (О ) и глицерином (О ) титруются щелочью как одноосновные кислоты. Оии могут быть описаны формулой НОеОз, и константы их ионизации (Ки) увеличиваются, а константы нестойкости (/( ) уменьшаются от глицерина к фруктозе [c.188]

При анализе полученных щелоков спектрофотометрическим методом выяснилось,что образующиеся из холоцеллшозы,хлопковой целлюлозы и глюкозы продукты интенсивно поглощают при 400 нм и имеют темаокоричневуи окраску,которая несколько умень -шается при добавлении [c.30]

Существует несколько методов определения глюкозы, из которых спектрофотометрический [12, 13] и электрохимический [14—16] часто применяют для измерения концентрации глюкозы в биологических жидкостях. Электрохимические методы проще и легче поддаются автоматизации. Большинство из них основано на измерении скорости реакции ферментативно-катализированной системы. Метод, используемый Апдайком, Хиксом [2], а также другими исследователями [17], заключался в том, что за изменением концентрации глюкозы в исследуемом образце следили по уменьшению значения ро,, измеряемого кислородным электродом [см. уравнение (XI.1)] Вильямс с сотр. [16] заменили кислород, служащий акцептором водорода, бензохиноном и определяли содержание глюкозы в образце, следя за протеканием реакции [c.326]

Заслуживает внимания спектрофотометрический метод определения растворимости целлюлозы в щелочи [23, 2,4], особенно для целлюлоз с низкой растворимостью. Метод основан на определении ионов хрома с помощью спектрофотометра при длине волны около 600 ммк, с последующим расчетом по калибровочным кривым содержания фрадций, перещедщих в раствор. Калибровочные кривые строят по простым сахарам, как правило, по глюкозе, либо по глюкозе и ксилозе. Спектрофотометрический метод имеет хорошую воспроизводимость он относительно прост, быстр по выполнению и может применяться для очень маленьких образцов с сохранением достаточной точности. [c.199]

К 0,4 мл раствора, содержащего от 10 до 50 у пентозы или эквивалентное количество сложных эфиров нентозы, добавляют 5 лл свеженри-готовленного реагента из 110 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл концентрированной соляной кислоты, 4,5 мл свежеприготовленного 5%-ного раствора флороглюцнна в спирте м i мл 0,8%-ного раствора в-глюкозы. Одновременно обрабатывают стандартный раствор (холостой опыт) с водой вместо раствора сахара. Реакционную смесь нагревают 15 мин на кипящей водяной бане. Появляется пурпурное окрашивание с максимумом поглощения при 552 ммк. Спектрофотометрические измерения проводят непосредствепно после охлаждения реакционной смеси водопроводной водой до комнатной температуры. [c.29]

Определение НАДФ" основано на специфическом восстановлении окисленного НАДФ в присутствии глюкозо-6-фосфатде-гидрогеназы. Количество НАДФН определяют по изменению оптической плотности при 340 нм. Для этого в спектрофотометрическую кювету помещают 1,0 мл нейтрализованного центрифугата, 0,5 мл [c.123]

Имеется большая группа специфических ферментов — ФАД-зависимых оксидаз. Они катализируют окисление кислородом воздуха специфических субстратов (глюкоза, холестерин, аминокислоты и др.). В этих случаях образуется один и тот же продукт — Н2О2. Таким образом, анализ различных субстратов сводится к определению Н2О2, которое можно проводить не только электрохимически или спектрофотометрически (о чем уже говорилось), но и с помощью флуори- или хемилюминесценции, используя следующие реакции, катализируемые пероксидазой [c.86]

В клинической практике большое значение имеет определе пие малых количеств восстанавливающих сахаров (особенно глюкозы) в крови, моче и т. д. Ранее для этой цели пспользо-вали микроволюмометрические методы, которые постепенно были вытеснены спектрофотометрическими методами, легко поддающимися автоматизации. [c.462]

Некоторые исследователи изучали вопрос о возможности автоматического определения углеводов. Из спектрофотометрических методов можно использовать окисление глюкозы гексацианоферратом (III) с последующим измерением уменьшения поглощения раствора. Из электрометрических методов определения глюкозы наиболее удобным является измерение окислительно-восстановительного потенциала системы феррицианид/ферро-цианид. Портер и Сойер [76] определяли содержание углеводов в кормах после гидролиза методом редокс-потенциометрии при окислении и гексацианоферратом (III). Этим методом можно проанализировать 40 образцов в час и определить содержание декстрозы в количестве 0,0025—0,5%. Ленадо и Рехниц [77] описали автоматический ферментный метод определения глюкозы в сыворотках, основанный на следующих реакциях [c.552]

Особого внимания заслуживают работы Като (Kato, 1956, 1958—1960). Пользуясь уже известными данными о появлении ряда промежуточных соединений в процессе меланоидиновой реакции, Като исследовал реакцию меланоидинообразования на моделях азотистых ароматических соединений. Он исследовал спектрофотометрически окраску, образуюш,уюся при взаимодействии восстанавливающих сахаров (D-глюкозы, D-ксилозы, лактозы, D-фруктозы) с аминосоединениями гликоколом, -аланином, Z-лизином, н-бутиламином, пиперидином, нара-аминобензойной [c.77]