Концентрирование вирусов

ОЧИСТКА И КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ВИРУСОВ [c.245]

Эта сорбция носит, по-видимому, ионный характер и происходит за счет отрицательно заряженных силанольных групп на поверхности стекла. Здесь трудно ожидать надежной воспроизводимости, поэтому, вероятно для фракционирования сорбцию на стекле применяют редко (заметим, однако, что сорбция на пористом стекле широко применяется для очистки и концентрирования вирусов). Были исследованы эффективность и условия сорбции аминокислот [c.247]

Методы концентрирования вирусов из воды [c.280]

Сравнительное изучение методов концентрирования вирусов [c.282]

Факт существования разнообразных методов концентрирования вирусов пз воды указывает на отсутствие единого эффективного дешевого метода, доступного для всех исследований в полевых условиях. [c.282]

Оценка методов концентрирования вирусов [c.283]

Постоянный мониторинг проб воды на вирусы пока не доступен большинству местных лабораторий, контролирующих качество водоисточников. Однако существует возможность вирусологического исследования замороженных проб воды, содержащих концентрированный вирус, которые могут длительно храниться при температуре -20°С. [c.285]

При отборе проб для вирусологического анализа следует выполнять все требования, установленные для отбора проб для микробиологического анализа. Однако в данном случае могут потребоваться большие объемы пробы. Здесь могут потребоваться методы концентрирования пробы, однако следует помнить, что даже самые новейшие методы концентрирования вирусов в воде все еще находятся в стадии совершенствования. [c.555]

Вирусологический анализ воды. Прежде всего вирусы должны быть сконцентрированы материал газ, применявшийся длительное время, сейчас не используется. Процедура концентрирования вирусов состоит в следующем фильтрование через мембраны (растворимые и нерастворимые ) или применение патронов, электрофорез или электроосмос, коагуляция — флокуляция, центрифугирование (в присутствии адсорбента, не смешивающегося с водой, или без не- [c.412]

Существующие методы концентрирования и изоляции вирусов из проб воды можно условно подразделить на несколько групп, сформированных по принципу используемых процессов. Это методы концентрирования вирусов с преимущественным использованием адсорбции или седиментации метод выпаривания исследуемого образца лсидкости [8] диализ его [69], а чаще комбинацией различных процессов. Однако из-за недостаточной эффективности методы диализа и выпаривания не нашли широкого применения нри проведении санитарно-вирусологических исследований. [c.70]

Белки вирусов, как и любые другие белки, обусловливают отрицательный заряд вирусных частиц. В связи с этим, некоторые ионообменники основного типа оказались способными адсорбировать и удалять вирусы из воды. В настоящее время уже апробированы ионообменные смолы в качестве адсорбентов для концентрирования вирусов при выделении их из зараженной воды [12, 34, 64]. Наиболее активными оказались Дауэкс-1, Амберлайт Ш-45, а также смолы АВ-17 и ЭДЭ-10П. Развитие исследований в этом направлении весьма перспективно при создании эффективных адсорбентов для концентрирования вирусов Б воде. [c.72]

Для выделения вирусов из воды применяют н седи-ментационные процессы. Установлено [86], что ультрацентрифугирование образцов бытовых сточных вод можно рассматривать как наиболее эффективный метод концентрирования вируса. Он позволяет чаще, чем при использовании других методов, выделять вирусы из инфицированной воды. Возможность выделения вирусов из воды с низким содержанием в ней болезнетворных агентов реальнее, по нашему мнению, при использовании материалов, обладающих адсорбционными свойствами и последующим осаждением их на центрифугах с ускорением до 15 ООО g. [c.73]

Антигенные варианты, селекционированные с моноклональными антителами, очевидно, утратили антигенный сайт на НА, так как в каждом случае моноклональное антитело (которое связывается очень эффективно с НА дикого типа) совершенно неспособно связываться с антигенным вариантом. Были проведены эксперименты для ответа на вопрос, появляется ли новый антигенный сайт на молекуле НА вариантов при потере первоначального сайта. Гипериммунные антисыворотки к молекулам вариантов абсорбировали с очищенным концентрированным вирусом дикого типа до тех пор, цока титры антисывороток для вируса дикого типа в реакции ингибиции гемагглютинации не обнаруживались. Абсорбированные сыворотки затем испытывали с вариантами вирусов. Когда сыворотки против вариантов, отобранных с моноклональными антителами Н14/А2 и Н14/А21, для которых изменения последовательности заключались в замене аспарагина 53 на лизин и серина 205 на тирозин соответственно [62], абсорбировали с вирусом Меш/71 дикого типа, не оставалось активности ингибиции [c.138]

Осветленный и концентрированный вирус еще недостаточно чист для большинства биохимических и биофизических исследований. Дополнительной очистки достигают зональным (скоростным) или равновесным (изопикническим) центрифугированием. Теоретические и практические аспекты центрифугирования детально изложены в другом руководстве [7]. Для вирусов растений можно использовать следующие методы дополнительной очистки. [c.16]

Осадок растворяют в боратном буферном растворе (BBS см. приложение), используя 1% исходного объема среды. Таким образом достигается 100-кратное концентрирование вируса. [c.92]

На первой стадии очистки вирус необходимо отделить от клеток и клеточного дебриса, содержащегося в культуральной жидкости. Как правило, для этого используют низкоскоростное центрифугирование при 600 g. На второй стадии вирус, находящийся в осветленном супернатанте, концентрируют и освобождают от большинства низкомолекулярных и высокомолекулярных примесей с помощью любого из известных методов концентрирования вирусов при низкой температуре (4—10°С), pH 6,8—8,0 и средних значениях ионной силы. Ниже рассматриваются два метода осаждение вируса высокоскоростным центрифугированием и преципитация ацетатом цинка, сульфатом аммония или полиэтиленгликолем. Преципитация удобна для получения вирусов как в малых, так и в больших количествах и обладает тем преимуществом, что обеспечивает отделение вируса от большей части посторонних белков. [c.124]

В основе этого исключительно простого и быстрого метода концентрирования вируса гриппа лежит его способность связываться с поверхностью эритроцитов (см. разд. 3.1), что можно использовать как одностадийный метод очистки вируса (см. разд. 4.3.4). [c.184]

Концентрирование вируса ультрацентрифугированием [c.208]

Концентрирование вирусов 0,1 Нитроцеллюлоза [c.158]

Методы концентрирования вирусов 335 [c.335]

МЕТОДЫ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ ВИРУСОВ [c.335]

Исключительно важное значение химия поверхности адсорбентов и носителей имеет в газовой и жидкостной хроматографии для анализа сложных смесей, препаративного выделения чистых веществ и управления технологическими процессами. Химия поверхности играет важную роль и в процессах, протекающих в биологических системах. К ним относится, в частности, взаимодействие биологически активных веществ, в том числе лекарственных препаратов, с рецепторами — местами их фиксации в организме. Изучение модифицирования поверхности необходимо для решения вопросов совместимости искусственных материалов с биологическими. Химическое модифицирование адсорбентов применяется при разработке эффективных методов вывода из крови разного рода токсинов (гемосорбция). Прививка к поверхности крупнопористых адсорбентов и носителей соединений с определенными химическими свойствами необходима для иммобилизации ферментов, их хроматографического выделения и очистки, а также для иммобилизации клеток. Иммобилизованные ферменты и клетки эффективно используются в промышленном биокатализе, обеспечивая высокую избирательность сложных реакций в мягких условиях. Очистка и концентрирование вирусов гриппа, ящура, клещевого энцефалита и других для получения эффективных вакцин требует применения крупнопористых адсорбентов с химически модифицированной поверхностью. [c.6]

Исследования Д. Г. Звягинцева по адсорбции микроорганизмов на модифицированной поверхности стекла, содержащей преимущественно либо гидрофильные (NH+2, С00 , 0Н ), либо гидрофобные — (СНз) — группы, еще раз продемонстрировали роль природы поверхности адсорбента во взаимодействии мел<ду микробными клетками и твердыми материалами, а также всю сложность этого процесса [101, 103, 198]. Определенную селективность по отношению к вирусам проявляют некоторые синтетические полиэлектролиты. Например, сополимер стирола и малеинового ангидрида, сшитый дивинилбензолом, способен адсорбировать из воды вирус табачной мозаики (палочки длиной 3000 А и диаметром 160 A) на 100% и вирус полиомиелита (шарообразные, диаметром 350 А с большим содержанием РНК) —на 99,99%, в то время как ионообменная смола Амбер-лайт ХЕ-119 поглощает только 97о вируса табачной мозаики. Поперечносшитый сополимер азобутилена и малеинового ангидрида РЕ 60 в виде порошка с размером частиц 100 меш адсорбирует вирусы в присутствии других микроорганизмов и органических веществ, что позволяет обходиться без дополнительного фильтрования или обработки жидкости ионообменными смолами при концентрировании вирусов и выделении их из различного рода сточных и природных вод [509, 511]. В ионообменных смолах аниониты, поверхность которых заряжена положительно, адсорбируют микроорганизмы значительно лучше, чем отрицательно заряженная поверхность катионитов. В последнем случае определенное значение имеет природа катионов, насыщающих смолу сравнительно хорошо сорбируются отдельные микроорганизмы (например. Вас. my oides, Sar ina Sp.) водородной формой смолы, хуже — катионитами, насыщенными Си +, Ее + и А1 +, и еще хуже при насыщении ионами кальция, магния и бария. Формы смолы, содержащие одновалентные катионы (К+, Na+, NH+4), практически не сорбируют [c.190]

Получаемые путем культивирования вируссодержащие жидкости представляют сложную смесь, в которой кроме вирусных частиц содержатся осколки животных или растительных клеток, белки, нуклеиновые кислоты, полисахара и др. По этой причине очистка и концентрирование вирусов является сложной многоплановой задачей. [c.122]

При сборе вирусных частиц из природных проб необходимо применять специальные методы их концентрирования. Вирусы можно сконцентрировать из водных образцов при неоднократной ад-сорбции/элюции подкисленных проб при пропускании их через эпоксидные, фиберглассовые или нитроцеллюлозные фильтры. Сорбированные частицы затем элюируют щелочными растворами. Процедуру можно неоднократно повторять, тысячекратно концентрируя вирусные частицы, например из морской воды или проб осадков. [c.254]

К упоминавшемуся методу концентрирования вирусов при помощи ватно-марлевых салфеток можно было бы отнести недавно предложенный Г. А. Багдасарьян и В. Ф. Жевержеевой [3] метод ненной флотации. В качестве адсорбента вирусов применяли нативную бычью сыворотку по 0,1 мл на 100 мл испытуемой воды. Одновременно белки сыворотки крови выполняли функцию пенообразователя. При продувании исследуемого образца воды на поверхность жидкости воздухом выносилась пена, состоящая из сыворотки с адсорбированными на ней вирусами. В экспериментально зараженной воде Г. А. Багдасарьян и В. Ф. Жевержеевой удавалось сконцентрировать энтеровирусы в 50 раз. Этот метод перспективен для выделения энтерозирусов из открытых водоемов при условии значительного увеличения первоначального объема пробы. [c.70]

В. П. Широбоков [69], в частности, использовал крымский бентонит Курцивского месторождения. Автору удалось показать, что на геле бентонита адсорбируется больше 99% исходной инфекционности вирусов Коксаки. При этом требуется очень небольшое количество бентонита, даже при концентрации его в 0,025% происходит практически полная адсорбция вируса Коксаки В1 из вируссодержащей суспензии. Учитывая, что предлагаемый бентонитовый метод концентрирования вирусов прост, не требует сложного и дорогостоящего оборудования и поэтому доступен любой вирусологической лаборатории, он может оказаться перспективным при разработке методов индикации вирусов из воды. В этом убеж- [c.72]

Вирусологическими, бактериологическими и санитарно-химическими исследованиями процесса очистки бытовых сточных вод на лабораторных моделях сооружений подземной фильтрации и в естественных условиях ими установлено, что бытовые стоки хорошо освобождаются от вирусов. В качестве тест-организмов использовались вирусы Коксаки А5, А14 и бактериофаг кишечной палочки № 163. Хотя после искусственного инфицирования сточная жидкость содержала Ю ИДбо вируса мл, в 0,1— 1,0 жл фильтрата сточной жидкости, полученного после сооружений, обнаружить вирусы не всегда удавалось. Поэтому исследователи для концентрирования вирусов использовали ионообменники, в частности ЭДЭ-10П. Однако выделить вирусы из фильтрата позже 20 дня со времени внесения не удавалось. В то же время случаи выделения в упомянутый срок составляли не более сотых долей процента (0,042% и близкие к этому цифры). [c.83]

Впервые препаративная центрифуга была использована в 1936 г. Бауэром и Пикельсом [49] для выделения и очищения вируса желтой лихорадки. С того времени этот метод стал обычным для отделения и концентрирования вирусов и других биологических веществ субмикроскопических размеров. На рис. 144, Б (стр. 546) показан пример с разделением смеси двух глобулинов. [c.510]

ПО радиоактивности содержащие вирус фракции объединяют. Дополнительным преимуществом ультрацентрнфугирования является достигаемое при этом концентрирование вируса. Объединенные фракции градиента разводят буферным раствором по крайней мере вдвое для уменьшения плотности и центрифугируют 2,5 ч при 80 000—100 000 g и 4°С. Супернатант удаляют по возможности полностью образующийся осадок вируса должен быть бесцветным и прозрачным. Его ресуспендируют в УЗ-дезинтеграторе при этом образуется голубовато-белая опалесцирующая суспензия, которую хранят при —70°С. [c.104]

Поскольку вирус гриппа обычно содержится в большом объеме аллантоисной жидкости или культуральной среды, перед очисткой его необходимо сконцентрировать. Существуют различные методы концентрирования вирусов, и выбор одного из них определяется оснащенностью лаборатории. [c.183]

Титрование и концентрирование вируса Сендай 1) срезают скорлупу с тупого конца яйца, содержащего 9—13-суточный куриный эмбрион 2) перерезают ножницами крупные кровеносные сосуды, питающие эмбрион, собирают пастеровской пипеткой или шприцем аллантоисную жидкость с вытекшей в нее кровью 3) разбавляют аллантоисную жидкость раствором Хэнкса в 5—10 раз и центрифугируют 5 мин при 700 g 4) сливают супернатант, ресуспензируют осадок эритроцитов в 10 мл раствора Хэнкса без индикатора фенолового красного 5) вносят автоматической пипеткой в круглодонные ячейки 96-ячеечной пластиковой платы для титрования (Ленинградский завод медицинских полимеров) суспензию эритроцитов в первые ячейки каждого ряда вносят по 90 мкл суспензии, в остальные — по 50 мкл (имеются в виду длинные ряды, по 12 ячеек в каждом) [c.180]

Если не считать первого, ни один из этих методов не подходит для анализа очень больших объемов воды. Ультрафильтрация страдает от быстрого забивания мембран, методы осаждения недостаточно эффективны при низких концентрациях вирусов, а гидроэкстракцию можно использовать лишь при работе с малыми объемами. Мембранная фильтрация либо сама по себе, либо в сочетании с глубинными фильтрами, импрегни-рованными полимерами, представляет собой один из наиболее пригодных методов концентрирования вирусов. [c.336]

Методики для концентрирования вирусов первоначально были проверены на полиовирусах. В этих опытах определенные небольшие количества полиовируса были добавлены к обычной питьевой воде, которая затем была обработана и подвергнута анализу. Якубовский и др. [116] использовали для первой стадии концентрирования фильтры фирмы Болстон , а на второй— дисковые фильтры фирмы Кокс после фильтрации 380 л водной пробы с низким содержанием вируса было достигнуто выделение около 50%. В табл. 12.1 приведены данные, полученные в нескольких разных экспериментах. [c.338]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология