Электрофорез в аппараты

Рис. 484. Аппарат для высоковольтного электрофореза.

Рис. 95. Схема аппарата для электрофореза

Прямые методы сводятся к наблюдению за поведением частиц в электрическом поле при электрофорезе. При этом исследуемый белок подвергают электрофорезу в буферных растворах с разными значениями pH. В буферном растворе со значением pH, равным изоэлектрической точке белка, последний электронейтрален и не перемещается в электрическом поле. Эти наблюдения проводят либо макроскопически в особых электрофоретических аппаратах, либо микроскопически в кювете ультрамикроскопа. Помимо прямых методов наблюдения изоэлектричеекого состояния белков существуют и косвенные методы, которые сводятся к наблюдению максимума или минимума того или иного физического свойства, изменяющегося с изменением дзета-потенциала испытуемого раствора. Все эти методы подробно описаны в соответствующих руководствах. [c.340]

Электрофорез. Смоченные фитили обеспечивают контакт в электрической цепи крахмального блока с буферным раствором в резервуарах аппарата. Систему на 15 мин оставляют для уравновешивания и затем проводят электрофорез при напряжении 300 В и силе тока 30 мА в течение 24—30 ч, желательно с охлаждением. [c.84]

Паспорт-инструкция к использованию аппарата для вертикального гель-электрофореза. Таллинн, 1984 [c.101]

Ознакомление с устройством прибора для электрофореза. Аппарат для электрофореза изображен на рис. 26. Он состоит из выпрямителя (рис. 26, а) и камеры для электрофореза (рис. 26, б). На корпусе выпрямителя имеются выключатель — 1, сигнальная лампочка 2 (включающаяся при подаче тока на электроды), вольтметр и амперметр 5 и б и ручки регулировки напряжения, подаваемого на электроды, 3 н 4. Переключатель 3 предназначен для ступенчатой регулировки, а ручка 4 — для плавной. [c.227]

Широко применяется электрический метод, так называемый метод Коттреля. В электрофильтре Коттреля коронный разряд (70—100 кВ) ионизирует воздух и сообщает заряд (обычно отрицательный, вследствие преимущественной адсорбции отрицательных ионов) частицам аэрозоля, протекающим через аппарат. В сильном поле происходит электрофорез частиц и осаждение их на металлической положительно заряженной стенке движению частиц способствует и электронный ветер , возникающий в области коронного разряда. [c.302]

Наиболее совершенная и довольно сложная конструкция аппарата для электрофоретического разделения, предложенная Тизелиусом, основана на методе подвижной границы. Компоненты раствора (например, плазмы крови), обладающие различными подвижностями, пространственно разделяются в U-образном сосуде после длительного электрофореза. Оптическая система построена так, что свет, проходящий через сосуд в нормальном к нему направлении, преломляется на границах, которые разделяют растворы отдельных компонентов. [c.218]

Е. Буферные растворы следует хранить в холодильнике. Нецелесообразно запасаться готовыми растворами в объеме, превышающем недельную потребность, так как срок их хранения не более 8—10 дней. После каждого сеанса электрофореза необходимо сменить полюса либо тщательно перемешать в бутыли буферные растворы из анодного и катодного отсека и вновь залить в аппарат. Даже выполняя это требование, не следует использовать одну и ту же-порцию буферного раствора более 3—4 раз. [c.51]

В горизонтальных аппаратах для высоковольтного электрофореза одного типа охлаждение обеспечивается циркуляцией водопроводной воды в охлаждающей плите, изготовленной из металла. Металлическую плиту, разумеется, необходимо отделить от фильтровальной бумаги полиэтиленовой пленкой с соответствующими изоляционными свойствами. В аппаратах для высоковольтного электрофореза с водяным охлаждением фильтровальная бумага охлаждается и сверху и снизу двумя плитами, которые прижимаются друг к другу надувным резиновым кольцом. Если в ходе эксперимента применяли пришивание, то, для того чтобы обеспечить [c.113]

Аппарат для электрофореза в крахмальном блоке. В продаже имеется ряд специальных аппаратов для электрофореза в крахмальном блоке. Вместе с тем некоторые изменения конструкции позволяют приспособить для этой цели почти любой лабораторный прибор для электрофореза. Аппарат для электрофореза в крахмальном блоке имеет а) резервуары для буферного раствора и электродов (см. стр. 46), б) ванну для крахмального блока, которую можно сделать самостоятельно следующим образом. Вырезают две одинаковые пластинки из плексигласа (например, размером 50 х 13 х Х0,5 см). По кромке одной из них наклеивают плексигласовый бортик высотой 0,5 см. Вторая пластинка служит крышкой для этой ванны. По краям пластинок на расстоянии примерно 10 см одно от другого высверливают отверстия для того, чтобы крышку и ванну можно было скрепить винтами. [c.83]

Буферный раствор состоит из 32 мл уксусной кислоты, 18 мл пиридина и 1950 мл дистиллированной воды. Стартовая точка находится на расстоянии одной трети длины листа от катода. Гидролизат наносят на сухую бумагу, причем стартовое пятно должно быть как можно меньше. Электрофорез продолжается 110 мин при градиенте напряжения 80 В/см. Если нет высоковольтной аппаратуры, то можно работать при среднем напряжении, пропорционально увеличив продолжительность электрофореза. Аппарат с непосредственным жидкостным охлаждением нельзя применять для первого электрофореза, поскольку ДНС-производные Про, Вал, Иле, Лей, Фен и Тир могут быть экстрагированы органическими растворителями. [c.276]

Электрофорез. Полоску фильтровальной бумаги кладут на рамку в электрофоретической камере таким образом, чтобы оба ее конца, выходящие за рамку, были погружены в буферный раствор (фиг. 1). После укладывания полосок камеру закрывают стеклянной крышкой и аппарат включают в электросеть. Электрофорез продолжается от 12 до 16 ч при 110 В и силе тока около 1 мА на полоску. [c.48]

Аппараты для высоковольтного электрофореза обеспечивают градиент напряжения от 50 до 100 В/см. В них специальное охлаждение становится обязательным. В горизонтальных камерах оно осуществляется с помощью металлической охлаждающей плиты, а в вертикальных — с помощью эффективного контакта с органическими растворителями. [c.95]

Предложен способ отделения частиц парафина (Пф) и капель воды от смазочных масел с помощью электрофореза. Очистка масла проводится в вертикальном аппарате, в верхнюю часть которого вводится суспензия Пф в масле и пропускается через электрод, связанный с источником высокого напряжения (2-ой электрод с более низким напряжением по отнощению к земле — нижняя стенка впускной камеры с отверстием для прохода суспензии). Поток суспензии, имеющий свободный избыточный заряд, попадает в верхнюю коническую часть аппарата и в потоке циркулирующего газа —носителя (N2) вводится в цилиндрическую часть аппарата, заполненную слоем шариков из стекла, керамики и др. материала с низкой электропроводностью. В нижней части аппарата суспензия пропускается через заземленную металлическую решетку или irro. Коагуляция заряженных частиц Пф происходит на шариках, слой которых периодически заменяется. Приводятся другие варианты устройства аппарата. [c.189]

Описание аппарата. На фиг. 15 схематически изображен изготовленный в мастерской аппарат для горизонтального электрофореза с охлаждающей плитой из плексигласа размером 44 х44 см. Циркуляция охлаждающей жидкости внутри плиты направляется особыми перегородками. В качестве такой жидкости применяют 50%-ный этанол, охлаждаемый в специальном резервуаре смесью льда с ацетоном или с помощью холодильного агрегата. Температура охлаждающей плиты должна быть примерно +6° С. На плиту кладут смоченный буферным раствором лист фильтровальной бумаги, соединенный с электродными отсеками прибора бумажными фитилями, покрытыми целлофаном. Сверху лист фильтровальной бумаги закрывают пластинкой из плексигласа толщиной 15 мм, которая в трех точках плотно прижимается к охлаждающей плите. [c.96]

Передвижение разделяемых частиц с различной скоростью, которая во многих случаях определяет производительность аппарата. Повышение скорости возможно в некоторых случаях путем интенсивного перемешивания среды, создания отстойных зон в аппарате, наложения вибраций для разрушения структуры суспензий, сил Электрофореза. [c.143]

Нежелательные эффекты и интенсивность этих противоположно направленных потоков в принципе минимальны, так как в герметизированном приборе для электрофореза быстро создаются условия влажной камеры. Кроме того, конструкция некоторых аппаратов для электрофореза предусматривает впускной штуцер для введения пара в электрофоретическую камеру, что позволяет начать электрофорез в насыщенной паром атмосфере. [c.53]

Электрофорез на бумаге весьма часто применяют для разделения пептидов и качественного анализа аминокислот. Принцип, по которому классифицируются аппараты для электрофореза, обычно учитывает либо используемое напряжение, либо расположение листа бумаги в пространстве. [c.95]

Очистку воды I контура от коллоидных взвесей можно осуществить также, используя явление электрофореза. Через электродиализную ячейку с полупроницаемыми мембранами (см. рис. 52) проходит деионизованная вода, содержащая коллоидные взвеси. В зависимости от заряда частицы осаждаются на той или иной мембране и укрупняются. Через определенный промежуток времени аппарат следует остановить, смыть с мембран коллоидные осадки и удалить их в хранилище. Такой способ очистки воды I контура может оказаться весьма перспективным. Это подтвержается опытом, полученным при работе с электрофорезным фильтром, установленным на байпасной системе очистки воды в исследовательском реакторе ВВР-М Физико-технического института им. А. Ф. Иоффе АН СССР [264]. Производительность фильтра 0,5 м ч, габариты 400X224X935 мм. Расстояние между электродами 1 см, число анодов, изготовленных из платинированного титана, — четыре, катодов из стали марки 1Х18Н9Т — пять. Мембранами служат чехлы из капроновой ткани. Напряжение на фильтре ПО—120 в, плотность тока 7,56 а/см . Схема включения фильтра в I контур реактора приведена на рис. 59, а эффективность работы фильтра — в табл. 39. [c.192]

Существенное преимущество аппаратов для высоковольтного электрофореза заключается в том, что они позволяют значительно сократить продолжительность электрофореза, а следовательно, уменьшить диффузию и сделать границы зон более четкими. [c.114]

Электрофорез проводят в горизонтальном аппарате при градиенте напряжения 80 В/см. Сила тока при ширине пластинки 10 см должна быть 50— 60 мА. После 20—25 мин электрофореза пластинку вынимают, высушивают струей теплого воздуха и проводят идентификацию ДНС-аминокислот в ультрафиолете. [c.278]

Наиболее совершенная и довольно сложная конструкция аппарата для электрофоретического разделения, предложенная Тизе-лиусом, в принципе основана на методе подвижной границы. Компоненты раствора (например, плазмы крови), обладающие различными подвижностями, пространственно разделяются в /-образном сосуде после длительного электрофореза. Оптическая [c.215]

При испытании сконструированного нами аппарата (очистка от солей воды из водопроводной сети г. Ленинграда) выяснилось, что следует предварительно удалять из воды органические вещества, имеющиеся в ней в относительно большом количестве. При длительном электродиализе происходило отложение органических веществ (путем электрофореза) на анодной диафрагме, что увеличивало ее элёктросопротивление. Кроме того, анодная диафрагма становилась электрохимически активной, разница чисел переноса между диафрагмами уменьшалась, и это понижало эффективность процесса электродиализа. В результате предварительной коагуляции органических веществ добавлением коагулянта А12(304)з (в количестве 60 мг на. л воды) получалась вода, свободная от органических веществ. Однако электродиализ невской воды, прошедшей предвар ительную коагуляцию, не дал удовлетворительных результатов, так как вода имела повышенную кислотность (pH 4), Это объясняется, во-первых, слабой буферностью коагулированной воды, во-вторых, тем, что применение двух отрицательно заряженных диафрагм вызвало [c.186]

Для количественного измерения электрофореза сконструированы различные аппараты, основанные на визуальном или уль-трамикроскопическом наблюдении за скоростью передвижения коллоидных частиц. Особенностью современных приборов является устройство приспособлений для боковой жидкости, в которую помещены электроды, подводящие ток их делают затем, [c.90]

Аппарат для электрофореза подключают к соответствующим полюсам источника постоянного тока, учитывая величины изоэлектричес-ких точек разделяемых белков и pH буферной системы. При исследовании лабильных белков аппарат помещают в холодильник. В первые 5—10 мин электрофорез проводят при силе тока 1,5—2,0 мА на трубочку, затем силу тока увеличивают о 4—5 мА. Электрофорез заканчивают, когда окрашенная полоса достигнет нижнего конца трубочки . [c.96]

Для проведения электрофореза на порошкообразных носителях было сконструировано большое число различных приборов. Одним из наиболее эффективных является аппарат Пората [52], в котором разделение веществ осуществляется на вертикальной термостатированной колонке, наполненной целлюлозой. После окончания процесса разделения вещества элюируют буфером и собирают при помощи автоматического коллектора фракций. [c.537]

Чтобы поверхность геля была идеально гладкой, трубки по прсмя. полимеризации нсльая сдвигать с места. После окончания реакции поду осторожно отсасывают с по-мощг.ю тонкой пипетки, трубки вынимают т пробок и устанавливают в верхней части аппарата для электрофореза (см, рис. 0). [c.42]

Электрофорез. Нижнюю часть аппарата наполняют буфером, pH которого равен 8,1. Верхнюю часть переворачивают дном кверху и в трубки с гелем осторожно вводят буфер так, чтобы, не было пузырьков воздуха. После этого ее снова устанавливают на нижней, следи, чтобы в нижние концы трубок не проник воздух. Затем наливают буфер в верхнюю часть прибора. Слой жидкости должен быть на 1 см выше верхнего кран трубок. Поль уясь тонкой пипеткой, удаляют пузырьки воздуха из верхней части трубок. Микропипеткой вносит в каждую трубку по 15 мкл разведенной сыворотки, касаясь копчиком пинетки стенки трубки над самой поверхностью геля. Сыворотку вводят в трубку очень медленно и осторожно, следи за тем, чтобы пс произошло се смешения с буфером. [c.42]

Имеется ряд аналогичных конструкций, позволяющих осуществить разделение больших количеств смесей. К ним относятся конструкция Свенсона [651, прибор Машбефа [46] и препаративный аппарат для электрофореза конструкции Тизелиуса [74]. [c.535]

Приборы. Используют прибор для электрофореза, предназначенный для анализа белков jtpoBH (Институт им. А. А. Богомольца АН УССР, г. Киев), или прибор для электрофореза со специальными камерами, сконструированными на химическом заводе им. П. А. Войкова, с источником питания УИП-1. Также могут быть использованы аппараты для горизонтального и вертикального электрофореза, предназначенные для фракционирования протеинов, исследований по органической химии, биологических и фармакологических исследований, типа ОЕ-201 (фирма Labor, Будапешт). [c.56]

Аппарат для импульсного гель-электрофореза, прибор для секвенирования ДНК, устройство для микроинъеыирования генов в клетки [c.535]

Необходимое количество исследуемого материала весьма мало. Например, для электрофореза на бумаге требуется 0,5—0,8 мг белка, а для электрофореза в полиакриламидном геле — всего 100—200 мкг. В то же время свободный электрофорез даже в аппаратах длямикро-или полумикроанализа требует значительных количеств сыворотки. Это является одной из причин, по которым задерживается широкое использование свободного электрофореза [c.10]

Аппарат для электрофореза. Схема электрофоретического аппарата представлена на фиг. 1. Он состоит из пластмассовой камеры с плотно прилегающей стеклянной крышкой 1. Обе электродные камеры перегородкой из пластика 2 разделены на два отсека. В наружных отсеках 3 расположены платиновые электроды диа-метром0,5—0,8 мм. В каждый из двух внутренних отсеков погружаются концы фильтровальной бумаги 4. В середине перегородки, которая разделяет наружный и внутренний отсеки электродной камеры, на высоте 40 мм расположено соединяющее их отверстие. Это отверстие (0,5 см в диаметре) неплотно закрыто стеклянной ватой. [c.46]

Аппаратом для средневольтного электрофореза называют прибор, обеспечивающий градиент напряжения от 20 до 40 В/см. К достоинствам таких приборов относится сравнительно умеренное теплообразование при электрофорезе. Даже если камера изготовлена из плохо проводящего тепло плексигласа, при электрофорезе данного типа можно обойтись простым водяным охлаждением. В то же время плексиглас настолько легко обрабатывается, что одну из существенных деталей прибора, а именно, охлаждающую плиту (см. ниже), можно изготовить в любой хорошо оснащенной подсобной мастерской. [c.95]

Однако в ряде случаев, чтобы добиться необходимого разделения в аппаратах для средневольтного электрофореза, требуется значительно увеличивать продолжительность опыта. Этот недостаток в известной мере обесценивает ту легкость, с которой эти приборы можно изготовить даже в самой простой мастерской. С увеличением продолжительности электрофореза возрастает эффект диффузии, и границы зон теряют свою четкость. В то же время высоковольтный электрофорез при градиенте напряжения 50—100 В/см позволяет примерно в 2 раза сократить продолжительность опыта, что уменьшает диффузию и увеличивает четкость зональных границ. [c.95]

Аппараты для высоковольтного электрофореза, относящиеся к другой группе, устроены таким образом, что фильтровальная бумага погружена в охлаждающую жидкость, не смешивающуюся с водой тепло, воспринятое этой жидкостью, поглощается затем в системе водяным охлаждением. В таких аппаратах бумага помещается вертикально между двумя ваннами, содержащими буферный раствор. В связи с вертикальной укладкой бумаги важно правильно выбрать полярность электродов. Из-за электроэндоосмоса происходит перемещение буферного раствора от анода к катоду. Если, например, отрицательный полюс источника тока соединить с верхней ванной, то специфическое образование хвостов при электрофорезе, вызванное электроэндоосмотическим потоком снизу вверх,, будет полностью компенсировано неспецифическим образованием хвостов , обусловленным движением буферного раствора сверху вниз под влиянием силы тяжести. [c.114]

Все методы, описанные для средневольтного электрофореза, без каких-либо изменений можно воспроизвести на аппаратах для высоковольтного электрофореза. Исключение составляет двухбуферная система. Как известно, в аппаратах с непосредственным [c.114]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология