Хроматография двумерная и электрофорез

Первую информацию о составе пептидной смеси и характере полученных фрагментов (без выделения пептидов в чистом виде) даст использование двумерного фракционирования на бумаге сочетание высоковольтного электрофореза в одном направлении и хроматографии в другом направлении, двумерная бумажная хроматография, двумерный электрофорез и др. На рис. 14 приведен пример такого разделения смеси пептидных фрагментов, образовавшихся при гидролизе трипсином лизоцима белка яиц. В качестве стандартов с / = 1 были использованы феноловый красный и аргинин. [c.83]

Специфичность, чувствительность и разрешающую способность хроматографического метода можно увеличить, если использовать двумерную хроматографию в сочетании с таким методом, как электрофорез, где разделение осуществляется в градиенте сильного электрического поля. Например, применяя двумерный электрофорез, можно разделить 2000 белков крови в одном эксперименте. Для этого сначала пятно, содержащее смесь этих белков, подвергают в определенных условиях обычному разделению по одному направлению. При [c.194]

Разделение сложных смесей на бумаге методами хроматографии или электрофореза в одном направлении не всегда приводит к получению чистых веществ. Очевидно, что для увеличения рабочего поля, на котором распределяются вещества, хроматографию или электрофорез (или их комбинацию) выгоднее проводить в двух взаимно перпендикулярных направлениях. При проведении такого двумерного разделения в одинаковых условиях по обоим направлениям все компоненты распределяются по диагонали рабочего поля. Для использования всего имеющегося поля условия разделения во взаимно перпендикулярных направлениях должны отличаться. Поэтому двумерный электрофорез проводят при различных pH, а двумерную хроматографию — в различных буферных системах. Комбинированный способ разделения веществ, когда в одном направлении проводится электрофорез, а в перпендикулярном ему — хроматография, по своему значению стоит на первом месте. Менее гибок метод двумерной хроматографии, еще меньшее значение имеет двумерный электрофорез. [c.234]

Для улучшения разделения многокомпонентных смесей применяются двумерные комбинированные методы хроматографии двумерная хроматография и комбинация хроматографии с электрофорезом. [c.300]

Сложные смеси аминокислот или пептидов можно разделять либо с помощью двумерного электрофореза на квадратных листах бумаги, либо проводя одномерный электрофорез в одном направлении, а хроматографию в перпендикулярном направлении (рис. 5.1). [c.134]

При одновременном проведении хроматограмм и электрофореза повышается во многих случаях степень разделения близких по свойствам веществ. Для препаративного разделения смеси веществ удобен метод непрерывного электрофореза. Этот метод сочетает достоинства двумерной хроматографии и электрофореза. Анализируемую смесь наносят на полосу бумаги на нижний ее конец и погружают в резервуар с раствором электролита так, что зона компонентов перемещается по бумаге снизу вверх. Под прямым углом, поперек полосы бумаги, подводят постоянный ток. Зоны достигают верхнего края бумажной полосы в различных точках, что объясняется, с одной стороны, неодинаковым распределением компонентов между двумя жидкими фазами, с другой, — различной миграцией в электрическом поле (рис. 33, а). [c.87]

При одновременном проведении хроматографирования и электрофореза во многих случаях повышается степень разделения близких по свойствам веществ. Для препаративного разделения смеси веществ удобен метод непрерывного электрофореза. Этот метод сочетает достоинства двумерной хроматографии и электрофореза. Анализируемую смесь наносят на нижний конец полосы бумаги и погружают его в резервуар с раствором электролита, так что зоны компонентов перемещаются по бумаге снизу вверх. Под прямым углом поперек полосы бумаги подводят постоянный ток. [c.111]

При двумерном разделении белков и пептидов возможны различные комбинации методов электрофорез с градиентным гелем и изоэлектрической фокусировкой [212], гель-фильтрация с изоэлектрической фокусировкой [213], гель-фильтрация с электрофорезом [214], двумерный электрофорез с различными буферными системами [215—218], двумерная хроматография с различными растворителями [219—221] и хроматография в сочетании с электрофорезом или изоэлектрической фокусировкой. Райт и др. [222] оценивали результаты одно- и двумерного разделения сложных смесей белков, подсчитывая число разделенных полос, и установили, что двумерный электрофорез на геле акриламида дает большее число полос, чем периодический или непрерывный градиентный электрофорез на геле акриламида, изоэлектрическая фокусировка или изоэлектрическая фокусировка, сопровождаемая непрерывным градиентным электрофорезом на геле. [c.518]

Используя различные методы окрашивания белков, а в случае радиоактивно меченных белков - метод радиоавтографии (см. разд. 4.5.2), можно выявить следовые количества практически всех полипептидных цепей. За один раз методом двумерного гель-электрофореза можно разделить до 2000 отдельных полипептидных цепей этого достаточно, чтобы выявить большинство бактериальных белков (рис. 4-52). Разрешение этого метода настолько велико, что позволяет разделить два практически идентичных белка, отличающихся одной заряженной аминокислотой. Таблица 4-9 знакомит нас с основными этапами развития методов хроматографии и электрофореза. [c.218]

Если нельзя провести полный анализ аминокислотной последовательности, то первичную структуру исходных белков можно сравнить по гомологии пептидов, полученных при ферментативном или химическом расщеплении. При структурном анализе чаще всего используют трипсин, так как действие его специфично он разрывает только те пептидные связи, в которых участвуют карбоксильные группы лизина и аргинина. Полученные триптические пептиды разделяют двумерным электрофорезом и хроматографией в тонком слое целлюлозы или силикагеля. [c.83]

Имеет ли значение в двумерной хроматографии н электрофорезе, какая операция выполняется в первую очередь [c.246]

В случае разделения смесей очень сложного состава используют двумерные комбинированные методы тонкослойной хроматографии после завершения хроматографического разделения в одном направлении проводят еще одно хроматографическое разделение в перпендикулярном к первоначальному направлении с использованием элюента другого состава. При анализе органических веществ с ионогенными группами целесообразно одно из хроматографических разделений заменить тонкослойным электрофорезом. [c.87]

М. отпечатка пальцев . Аналитический метод двумерного разделения смеси веществ в двух взаимно перпендикулярных направлениях хроматографией или/и электрофорезом на плоском носителе. [c.259]

Хорошие результаты получают при разделении сложной смеси веществ путем сочетания распределительной хроматографии на бумаге с электрофорезом при проведении их одновременно или раздельно. В этом случае, так же как и в двумерной хроматограмме, разделение веществ происходит на бумаге и осуществляется с одной стороны вследствие неодинакового распределения компонентов между двумя несмешивающимися жидкостями, с другой—различного движения компонентов смеси в электрическом поле . [c.119]

Для анализа стандартных смесей олигонуклеотидов, образующихся в результате действия эндонуклеаз на РНК или ДНК, в последнее время широко применяются двумерная хроматография на бумаге или комбинация электрофореза и хроматографии на бумаге [35] (рис. И). Первичную хроматографию, или электро- [c.330]

Рис. 11. фракционирование РНК-азного гидролизата РНК ВТМ [35] с помощью двумерной хроматографии — электрофореза. [c.331]

Подводя итог, следует подчеркнуть, что для идентификации низших олигонуклеотидов очень удобны методы электрофореза и хроматографии на бумаге, особенно в двумерном варианте. Для разделения высших олигонуклеотидов значительно эффективней ионообменная хроматография, требующая большего количества вещества, но дающая очень четкие результаты. [c.335]

О возможность получения двумерных разделительных систем г тем сочетания КЭСМ двух типов (например, хроматографии и электрофореза), трех- и четырехмерных разделительных систем за счет подключения детекторов спектрального типа [c.91]

После того как установлена первичная структура- какого-либо белка, обычно нет необходимости проводить полное изучение аминокислотной последовательности у гомологичных белков из близких (соответствующих) источников. Быстрый ответ можно получить, используя технику трипсинового фингерпринта . Для этого подвергают гидролизу трипсином белок с известной структурой и параллельно ему гомологичный белок полученные в результате гидролиза пептиды разделяют обычно с помощью двумерного электрофореза или хроматографии. Если разница в последовательностях невелика, то больщинство пептидов должны занимать идентичное положение на двумерном фингерпринте. Те немногие пептиды, которые отличаются по подвижности, необходимо элюи-.ровать и подвергнуть аминокислотному анализу по Эдману. Эта техника особенно полезна при изучении аномальных гемоглобинов, которые отличаются от нормального природой только одного участка. [c.276]

Двумерные разделения в настоящее время выполняются почти исключительно на бумаге, хотя известны подобные разделения на геле и комбинированные — на бумаге и геле. Ниже мы кратко опишем процедуру двумерного разделения на бумаге, не касаясь принципов методов хроматографии и электрофореза (см. соответствующие статьи настоящего сборника, а также работы [1, 2]), а затем приведем примеры применения двумерных методов разделения на бумаге. При разделении пептидов обычно используется Whatman 3 ММ или хроматографическая бумага с номи- [c.234]

Для выделения и идентификации С-концевых областей белков и пептидов предложено несколько методик. Все эти методики обеспечивают избирательное отделение С-концевого пептида от всех других пептидов методами ВЭЖХ, ионообменной хроматографии, двумерного высоковольтного электрофореза или специфического связывания ТФ-посителями. [c.482]

Быстрое развитие иммунологии нашло свое отражение в данной, третьей книге из серии Иммунологические методы , которая включает изложение экспериментального опыта, накопленного в Базельском институте иммунологии. В нее входят пять глав, посвященных применению рекомбинантных ДНК в иммунологии в двух главах описано использование высокоэффективной жидкостной хроматографии для разделения белков отдельные главы касаются следующих вопросов применение моноклональных антител для идентификации мембранных антигенов лимфоцитов, типирование антигенов гистосовместимости, новые методы анализа белков с помощью двумерного электрофореза, лимфокины, поддерживающие рост В-клеток. В четырех главах описано получение и ведение линий клонированных В- и Т-кле-ток и гибридом, а еще в четырех обсуждаются новые методы детектирования клеток, продуцирующих ревматоидный фактор. Две главы посвящены таким общим иммунологическим методам, как флуоресцентный сортинг клеток и анализ методом лимитирующих разведений, и наконец, четыре последние главы касаются сложных методов, используемых при работе с определенными видами животных (птицами, овцами и амфибиями) для изучения специальных иммунологических вопросов. [c.7]

В 34 главах изложены методы определения, выделения и очистки антител (включая дансилироваиие, двумерную хроматографию, изоэлектрофокусирование, электрофорез в полиакриламидном геле и изотахофорез) методы определения констант равновесия (равновесный диализ, равновесная фильтрация и седиментация) способы маркировки реагентов изотопами и флуоресцентными красителями и определение компонентов клеточной поверхности меры предосторожности при работе в изотопной лаборатории методы химической модификации белков, гаптенов и нерастворимых носителей приемы получения аитн-сывороток к аллотипам и антигенам гистосовместимости и получения антител доминирующего клонотипа методы оценки гистосовместимости и реакций в смешанной культуре лимфоцитов методы разделения клеток на гелях, несу- [c.7]

Особенно легко и быстро удается разделить смесь аминокисаот с помощью комбинации двумерного разделения, например тонкослойного электрофореза на целлюлозе и хроматографии (метод отпечатков пальцев ). Сначала проводят электрофорез (низковольтный электрофорез без охлаждения, 20 В/см, муравьиная кислота), а затем хроматографируют во втором направлении, например с элюентом состава /Г Ре/п-бутанол метанол пиридин муравьиная кислота вода (33 43 9,6 0,4 20). В слу- [c.58]

ТОГО, с ПОМОЩЬЮ ТСХ можно контролировать результаты разделения, проведенного другими способами, например перегонкой, колоночной хроматографией, рекристаллизацией и т. п. Можно также использовать ТСХ для предварительной оценки структуры хроматографируемого соединения. Область применения ТСХ, которая с самого начала ее развития была достаточно широкой [38, 76], еще более расширилась благодаря универсальности метода (непрерывное и двумерное элюирование, электрофорез и гель-фильтрация в тонком слое). Благодаря своим преимуществам метод ТСХ часто вытесняет, а во многих случаях уже вытеснил бумажную хроматографию, в которой также используется плоскостное расположение хроматографической системы. Одпако в последнее время количество опубликованных статей, посвященных ТСХ, несколько уменьшилось, несмотря на то что разработаны новые модификации метода, увеличивающие его разрешающую способность и чувствительность [22а, 54а]. [c.86]

Эффективность газохроматографического разделения подчас снижается, когда в анализируемых смесях присутствуют компоненты с б.тгизкими свойствами, что приводит к наложению ГХ-ников. В ТСХ, электрофорезе и хроматографии на бумаге используют двумерное разделение, позволяющее эффективно разделить бо-льшинство веществ. Использование в ГХ двух пли более стационарных фаз в одном определении также можно рассматривать как дву-или многомерное разделение. [c.150]

Смотреть страницы где упоминается термин Хроматография двумерная и электрофорез: [c.27] [c.245] [c.396] [c.27] [c.27] [c.300] [c.153] [c.120] [c.78] [c.82] [c.235] [c.99] [c.25] [c.490] [c.503] [c.53] [c.53] [c.149] [c.64]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология