Хроматография градиентное элюирование непрерывное

Жидкостная адсорбционная хроматография. Жидкостная адсорбционная хроматография применяется для группового разделения углеводородов на алкано-циклоалкановую и ареновую фракции, а также для разделения аренов по степени цикличности. Хроматографические колонки заполняют силикагелем или двойным адсорбентом — оксидом алюминия и силикагелем. В качестве десорбентов при анализе керосиновых и масляных фракций для вымывания насыщенных углеводородов используют н-алканы С5 — С7, для десорбции ароматических и гетероатомных компонентов — бензол, спиртобензольные смеси, ацетон, хлороформ. Применение ступенчатого или непрерывного увеличения полярности подвижной фазы позволяет значительно уменьшить время удерживания веществ. Этот метод называется градиентным элюированием. [c.130]

Градиентная хроматография, градиентное элюирование. Перемещение компонентов смеси происходит при одновременном воздействии потока элюента и движущейся концентрационной волны вытеснителя. Например, к азоту при проявлении углеводородов добавляют диоксид углерода, концентрация которого непрерывно или скачкообразно возрастает во времени. Этим достигается более эффективное разделение [219—221]. [c.93]

Изменение перечисленных условий хроматографии можно вести либо скачкообразно ступенчатое градиентное элюирование), либо непрерывно непрерывное градиентное элюирование). [c.556]

В некоторых случаях, в частности, в опытах, имеющих целью определение оптимального состава растворителя для метода, который затем будет использоваться повседневно, удобна методика градиентного элюирования. Состав смеси растворителей, входящих в подвижную фазу, во время хроматографирования непрерывно меняют с предварительно установленной скоростью, что дает возможность решать при помощи одной хроматограммы проблему разделения сложной смеси веществ, имеющих совершенно различные коэффициенты распределения. Коэффициент распределения К, как указано в разделе Газовая хроматография (см. ниже), является мерой количества растворенного вещества в неподвижной фазе то отношению к концентрации вещества в подвижной фазе. [c.104]

Подготовка системы для градиентного элюирования. В качестве смесителя используют колбу на 0,5 л со стартовым буферным раствором (0,02 М фосфатный буфер pH 8,0). Резервуар, образующий замкнутую систему со смесителем, представляет собой сосуд объемом 1 л, заполненный О,ЗМ буферным раствором. Непрерывную подачу буферного раствора на колонку осуществляют с помощью насоса. Открыв выходное отверстие, понижают уровень буферного раствора в колонке до уровня геля. Затем на ионообменник аккуратно, стараясь не взмутить верхний слой геля, наносят фракционируемую сыворотку, которую предварительно в течение суток диализуют против стартового буферного раствора. Нанесенный образец смывают тремя порциями стартового буферного раствора по 2 мл и приступают к хроматографии. Для фракционирования 3 мл сы- [c.216]

Взаимосвязь жидкостной хроматографии высокого давления с другими хроматографическими методами иллюстрирует рис. 7.19. Преимуществами жидкостной хроматографии высокого разрешения являются высокая скорость разделения, возможность многократного использования колонок, автоматическая непрерывная подача растворителя, возможность с высокой воспроизводимостью осуществлять программы изменения состава смешанного растворителя в процессе разделения (градиентное элюирование) и [c.447]

Для того чтобы повысить скорость движения медленно движущихся зон, элюирующую способность элюента можно повысить скачкообразно (ступенчатое элюирование) или непрерывно (градиентное элюирование). Принципы ступенчатого и градиентного элюирования, а также принципы разнообразных устройств для градиентного элюирования обсуждаются в обзоре Снайдера [24]. Для специалистов, использующих колоночную экстракционную хроматографию, может представлять интерес планирование эксперимента при градиентном элюировании. Этот вопрос рассмотрен Снайдером и Саундерсом [25]. [c.89]

Выше описано разделение путем восходящего элюирования. Возможны иные варианты элюирования [244] нисходящее элюирование горизонтальное элюирование (круговая хроматография [250]) — пробу наносят по кругу на квадратную пластинку с тонким слоем сорбента (на пересечение диагоналей), в центр подают растворитель, вещества разделяются с образованием концентрических зон многократное элюирование одним и тем же растворителем (после элюирования пластинку высушивают и операцию повторяют со свежей порцией элюента) ступенчатое элюирование — многократное элюирование разными растворителями центрифужное элюирование — под действием центробежной силы движение потока растворителей ускоряется в 2—3 раза градиентное элюирование — состав элюента непрерывно изменяется. [c.103]

Выбор методики анализа фракций определяется природой анализируемого материала причем выбрать методику анализа, а в некоторых случаях и испытать необходимо перед началом хроматографирования. Применяют физические, химические и биологические методики. Чаще всего измеряют показатель преломления. Пользуются также различными колориметрическими методами, а также тонкослойной или бумажной хроматографией и электрофорезом. Идеальным способом является детектирование радиоактивных изотопов. Измеряя pH и электропроводность отбираемых фракций, можно контролировать условия элюирования. Именно такой контроль позволяет воспроизводить условия градиентного элюирования. В ряде случаев очень полезно комбинировать несколько методов детектирования. Полезны также непрерывное автоматическое детектирование (с достаточно высокой чувствительностью) разделенных соединений и регистрация хроматограмм (см. разд. 8.6, 8.7). Результаты измерений записывают в виде кривой зависимости измеряемой величины от объема элюата или номера фракции. Исходя из распределения пиков на хроматограмме некоторые фракции можно объединить. При этом необходимо следить, чтобы объединялись совершенно чистые фракции, не содержащие примесей других компонентов, иначе потребуется повторное хроматографирование. Фракции, предназначенные для количественных анализов, хранят в темноте и на холоду с тем, чтобы не допустить нежелательных реакций. Фракции соединений, окисляющихся на воздухе или поглощающих диоксид углерода, следует хранить в герметически закрытых сосудах. [c.281]

В жидкостной хроматографии широко используется так называемое градиентное элюирование, т. е. непрерывное изменение состава элюента в процессе проявления хроматограммы. Так, если какой-то элюент один компонент вымывает очень быстро, а другие очень медленно, то, чтобы ускорить вымывание последних компонентов, желательно изменить состав элюента. Используя несложный прибор (рис. 180), позволяющий программировать состав элюента, можно смешивать два растворителя, постепенно меняя состав смеси таким образом, чтобы вначале преобладал один растворитель, а затем другой. [c.317]

Иногда уменьшение времени удерживания вещества можно достигнуть за счет увеличения температуры, однако изменение состава подвижной фазы является более эффективным. С этой целью в процессе анализа можно увеличивать ступенчато либо непрерывно ионную силу или полярность подвижной фазы. Такой метод называется градиентным элюированием. Он аналогичен программированию температуры в газовой хроматографии. [c.16]

В жидкостной хроматографии часто применяют прием, который называется градиентным элюированием. Чаще всего при градиентном элюировании осуществляют изменение химического состава подвижной фазы в процессе хроматографирования, в результате чего сокращается время удерживания сильно сорбируемых компонентов разделяемой смеси и улучшается ее разделение. Устройства для создания градиента 2 подразделяются на два класса 1) обеспечивающие непрерывное смешение двух потоков с переменным соотношением (рис. 28) и 2) использующие предварительно заполненную смесительную емкость. [c.76]

Методика элюирования, при которой состав элюента непрерывно меняется Элюирование на градиентном слое или градиентной насадке (с различными неподвижными фазами, различным содержанием неподвижных фаз и т. д.) (см. п. 8.13) Применяемая в жидко-жидкостной хроматографии методика элюирования, при которой не- подвижная фаза неполярна (например, бумага, пропитанная углеводородами или силиконами), а подвижная поляр-на [c.219]

Если в анализируемой смеси имеются компоненты, сильно различающиеся специфичностью адсорбции, а следовательно, и величинами удерживаемых объемов, то целесообразно применять ступенчатое элюирование, заключающееся в последовательном применении двух или более растворителей с повышающейся элюирующей способностью [112]. Дальнейшим развитием этого метода является метод градиентного элюирования [113—117]. В этом случае разделяемые вещества промывают в колонне жидкостью с непрерывно изменяющимся составом. Обычно в растворитель с небольшой элюирующей способностью с помощью специального устройства добавляется другой растворитель со значительно большей элюирующей способностью, концентрация которого будет постепенно возрастать. По возможности изменять времена удерживания градиентное элюирование можно сопоставить с методом программирования температуры в газовой хроматографии. При выборе смеси растворителей для ступенчатого и градиентного элюирования знание элюотропных рядов для разных адсорбентов весьма полезно. [c.232]

Для сокращения времени удерживания используется ступенчатое элюирование, заключающееся в последовательном применении двух или более растворителей с увеличивающейся элюирующей способностью. Дальнейшим развитием этой техники является метод градиентного элюирования. В этом случае разделяемые вещества промываются смесью жидкости с непрерывно изменяющимся составом. Обычно с помощью специального устройства в растворитель с небольшой элюирующей способностью добавляется увеличивающейся во времени концентрацией другой растворитель со значительно большей элюирующей способностью. По своему влиянию на характеристики удерживания этот метод можно сопоставить с методом программирования температуры в газовой хроматографии. [c.419]

Для элюирования смеси обычно применяют не индивидуальные растворители, а раствор одного или нескольких веществ в растворителе, который сам адсорбируется слабо, введенные же вещества адсорбируются сильнее нескольких, а возможно и всех компонентов анализируемой смеси. Состав подвижной фазы можно изменять так, что ее вытесняющая способность будет непрерывно возрастать. Это градиентная хроматография. [c.341]

В ионообменной хроматографии градиентное элюирование осуществляют с помощью градиента концентрации (концентрация элюирующего раствора непрерывно изменяется) или градиента pH (pH элюирующего раствора непрерывно изменяется). [c.61]

В некоторых случаях целесообразно проводить градиентное элюирование, при котором содержание более полярного растворителя в менее полярном повышают непрерывно. Градиентное элюирование проще всего осуществить, возвращая отогнанный от каждой фракции растворитель на колонку с добавлением к нему каждый раз одного и того же объема второго, более полярного растворителя. Если ход хроматографического разделения известен заранее, то можно использовать автоматическое гpaJ диентное элюирование, описанное в главе, посвященной ионообменной хроматографии. [c.364]

В области разделения малых молекул с помощью аналитической ЖХ градиентное элюирование стало ценным средством при исследовании сложных смесей или групп соединений с неизмеримой хроматографической полярностью. Успехи приборостроения, в частности создание систем подачи растворителя и систем смешения, совершенствование конструкции детекторов, а также контроль работы приборов на основе микропроцессоров сделали возможным высокий уровень воспроизводимости в схемах разделения с непрерывным градиентом. Микропрепаративное ЖХ-разделение, выполняемое на аналитическом оборудовании, может реализовать эти возможности. Однако при переходе в область препаративной и макропрепаративной хроматографии значительно уменьшаются возможности создания сложных градиентов и контрольных устройств, пригодных для работы с большими объемами и высокими скоростями подвижной фазы, которые бы воспроизводили точно градиенты, характерные при работе с аналитическими приборами. В таких ситуациях обычно рекомендуют использовать подходящую последовательность изокра-тического и ступенчатого градиентного элюирования, если оно вообще возможно (см. разд. 1.6.2.2.5). Выгоды такого подхода [c.67]

У большей части белков в процессе хроматографии сразу происходит изменение величины К[От О до 1.Это вызвано тем, что белки либо прочно сорбируются на ионообменнике, либо выходят с элюирующим буферным раствором, поскольку происходит одновременная взаимная нейтрализация многочисленных реакций взаимодействия между белком и ионообменником при данных pH и ионной силе раствора. Поэтому важно тщательно подбирать буферный раствор для ионообменной хроматографии белка. Ионообменную колонку обычно загружают при низкой ионной силе раствора. Для катионообменника оптимальная величина pH равна 4—5, для анио-нообменника 7—8- Элюирование с колонки катионообменника происходит при увеличении pH буферного раствора, а с колонки анионо-обменника — при уменьшении pH. В том и другом случае с изменением pH можно увеличивать ионную силу. Изменение pH и ионной силы элюирующего буферного раствора можно производить поэтапно (ступенчатое элюирование) или непрерывно (градиентное элюирование). [c.22]

Когда способные к обмену ионы элюента (Н+) имеют мень-,шее сродство к иониту, чем разделяемые ионы (N3+ и Ы+), в элюате в течение всего процесса элюирования обнаруживаются ионы элюента (Н+). Поэтому важно выбирать элюент так, чтобы его ионы легко отделялись от разделяемых ионов. В этом особенность элюентной хроматографии — когда все разделяемые ионы можно в принципе получить в виде отдельных фракций (в отличие от метода фронтального анализа). Однако полосы некоторых элементов могут быть сильно размытыми, и чистыми такие элементы можно получить лищь в виде очень разбавленного раствора. В этом случае полезно применять ступенчатое элюирование. Так как наибольшее размазывание наблюдается для наиболее сорбируемых ионов смеси, сначала элюируют не-, сколько ионов одним элюентом, а затем завершают элюирование другим раствором, более эффективно выделяющим ионы, оставшиеся в колонке. Можно применять непрерывное повышение концентрации элюента (градиентное элюирование). [c.159]

Для разделения конденсированных фосфатов применяют ионообменную хроматографию [947]. Орто- и пирофосфаты, содержащиеся в виде примесей в перекристаллизованном триполифосфате, разделяют путем градиентного элюирования 0,002 N HG1, к которой непрерывно добавляют 0,6 М R 1. Последовательно элюируются орто-, пирО и триполифосфат в элюатах объемом 100, 200 и 300—350 мл соответственно. Фосфат в элюатах определяют фотометрически в виде фосфорномолибденового комплекса. В качестве ионита применяют смолу дауэкс-1Х8. Для анализа более конденсированных фосфатов используют элюент с большей концентрацией KG1 (1 М или 2М раствор KG1). Выход фосфатов составляет >95%. [c.166]

Для нормальной работы жидкостного хроматографа жела тельно, чтобы соединение его с масс спектрометром не накла дывало слишком сильных ограничений на виды растворителей, применяемых для элюирования, величину потока растворителя не препятствовало возможности градиентного элюирования, при менения летучих и нелетучих буферов, реагентов в виде ион ных пар Для поддержания вакуума в масс спектрометре поток газа пе должен превышать 20 мл/мин, желательно иметь воз можность использовать разные методы ионизации, прежде все го ЭУ и ХИ, должна быть обеспечена возможность сканирова ния полного масс спектра и непрерывного детектирования вы бранных ионов, возможность выбора разных газов реагентов при ХИ, возможность анализа как положительных, так и отри нательных иоиов для обеспечения высокой чувствительности шумы и фон должны быть минимизированы а наложения от растворителя и от примесей в нем малы Интерфейс должен обеспечивать высокую степень обогащения образца по отношению к растворителю высокую эффективность переноса образца из колонки в ионный источник, отсутствие расширения хрома тографических пиков возможность испарения малолетучих об разцов [c.34]

Граоивнтное элюирование является наиболее ценным методом в жидкостной хроматографии. Этим термином называют процесс, предполагающий изменение состава элюента во времени. Элюирующая способность подвижной фазы при этом должна прогрессивно возрастать, так, чтобы из колонки за приемлемое время элюировались сильно удерживаемые разделяемые вещества. Градиентное элюирование можно рассматривать как аналог программирования температуры в газовой хроматографии. Изменение состава подвижной фазы обычно осуществляется непрерывно и бопее или менее линейно. Однако в определенных обстоятельствах может быть полезным резкое изменение состава элюента. [c.199]

Проявление тонкослойных или бумажных хроматограмм может осуществляться путем восходящего, нисходящего, горизонтального или радиального движения растворителя. При восходящей хроматографии ослол непия, связанные с образованием каналов при движении растворителя, сводятся к минимуму. При непрерывном проявлении растворитель продвигается до конца бумаги или тонкого слоя в одном опыте. При многократном проявлении после того, как фронт растворителя достигает края листа, растворителю дают испариться и повторяют проявление при том же направлении движения растворителя. Ступенчатое проявление включает проявление на пластинке в неполярном растворителе, испарение растворителя и второе проявление в более полярном растворителе. При двухмерном проявлении также последовательно применяют два растворителя сначала проводят хроматографирование в одном направлении, затем высушивают пластинку для испарения первого растворителя, поворачивают пластинку на 90° и проводят проявление вторым растворителем. При градиентном элюировании состав растворителя меняется в ходе проявления [94]. Эта методика, однако, сложна, в ней теряется простота тонкослойной или бумажной хроматографии. [c.553]

На рис. 9.6 доказана выпускаемая фирмой Phaгma ia камера для нисходящего хроматографирования [2], предназначенная для тонкослойной гель-хроматографии. Для горизонтального элюирования ири различных, но точно устанавливаемых условиях предварительного насыщения слоя сорбента можно использовать К5-жамеры (рис. 9.7). Оптимальные условия разделения в этих камерах можно быстро установить. Другие типы камер, используемые для специальных методов, например проточного (непрерывного) элюирования, градиентного элюирования или круговой хроматографии, описаны в монографиях по ТСХ ([2Э, [c.95]

Наиболее типичный пример ионообменной хроматографии — разделение ионов в соответствии с их сродством к ионообменным группам. Самый старый метод фронтальной хроматографии обладает лишь немногими преимуществами. Лучшие результаты дает вытеснительная хроматография, однако наиболее эффективен метод проявительной хроматографии. Небольшое количество смеси ионов В и С, обладающих большим сродством к иониту, вводят в колонку вместе с ионами А, обладающими малым сродством к иониту. Величина вводимой пробьЕ пренебрежимо мала по сравнению с полным объемом колонки Элюирование ведут ионами А. Разделение определяется коэффициентами распределения Ка Щ и /С<г(С) или фактором разделения /Сй(В)/Х<г(С). Коэффициент распределения — это отношение концентраций ионов в ионообменной фазе и в растворе, отнесенное к миллилитру раствора и к грамму (сухой массы) или миллилитру ионообменной фазы. При слишком большом Ка, например более 30, хроматографические зоны расширяются и увеличивается время, необходимое для разделения.. Этого можно избежать, меняя в процессе элюирования дискретно или непрерывно концентрацию элюента (градиентное элюирование). Оптимальное разделение достигается в равновесных условиях, поэтому благоприятное влияние на процесс оказывает уменьшение размера зерен ионита, повышение температуры и оптимальная скорость потока подвижной фазы (все эт меры способствуют достижению равновесного состояния). Размер зерен можно уменьшать лишь до некоторого предела, который зависит от механической прочности слоя ионита причем требования к стабильности формы зерен особенно жестки, когда элюент пропускают через колонку под действием избыточного давления (иногда до нескольких десятков атмосфер). Степень сшивки ионитов должна быть достаточно высокой, чтобьь их объем оставался неизменным, или это должны быть макропористые иониты. Благоприятное действие оказывает увеличение скорости потока элюента в колонке, способствующее более равномерному распределению пленки жидкости по поверхности зерен ионита, но слишком сильное увеличение скорости может увести систему из оптимального равновесного состояния. Величины коэффициентов распределения зависят от состава элюента, и их можно регулировать в значительных пределах, добавляя комплексообразующие компоненты например, при разделении лантанидов с этой целью используют органические оксикислоты. [c.243]

Система для создания градиента. При разделении компонентов нуклеиновых кислот с помощью колоночной хроматографии часто бывает необходимо изменять pH растворителя или концентрацию ионов в нем. При автоматической хроматографии состав растворителя удобнее изменять пе ступенчато, а непрерывно (градиентное элюирование), что упрощает метод кроме того, при этом не появляются дополнительные начальные пики, как это бывает при пропускании канлдого нового растворителя при [c.76]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология