Детектирование, методы колориметрический

Выбор методики анализа фракций определяется природой анализируемого материала причем выбрать методику анализа, а в некоторых случаях и испытать необходимо перед началом хроматографирования. Применяют физические, химические и биологические методики. Чаще всего измеряют показатель преломления. Пользуются также различными колориметрическими методами, а также тонкослойной или бумажной хроматографией и электрофорезом. Идеальным способом является детектирование радиоактивных изотопов. Измеряя pH и электропроводность отбираемых фракций, можно контролировать условия элюирования. Именно такой контроль позволяет воспроизводить условия градиентного элюирования. В ряде случаев очень полезно комбинировать несколько методов детектирования. Полезны также непрерывное автоматическое детектирование (с достаточно высокой чувствительностью) разделенных соединений и регистрация хроматограмм (см. разд. 8.6, 8.7). Результаты измерений записывают в виде кривой зависимости измеряемой величины от объема элюата или номера фракции. Исходя из распределения пиков на хроматограмме некоторые фракции можно объединить. При этом необходимо следить, чтобы объединялись совершенно чистые фракции, не содержащие примесей других компонентов, иначе потребуется повторное хроматографирование. Фракции, предназначенные для количественных анализов, хранят в темноте и на холоду с тем, чтобы не допустить нежелательных реакций. Фракции соединений, окисляющихся на воздухе или поглощающих диоксид углерода, следует хранить в герметически закрытых сосудах. [c.281]

Для детектирования катионов металлов, элюированных с бумажной хроматограммы в количестве 5—40 мкг, применяли колориметрический метод. Меньшие количества определяли непосредственно на бумаге по отражению окрашенных комплексов. [c.336]

Абсолютный предел определения в методе ТСХ в значительной степени зависит от навыка опытный хроматографист может определять меньшее количество вещества. Предел определения пестицидов Б методике с применением нитрата серебра для очищенных образцов изменяется от 0,05 до 1 мкг. Для неочищенных образцов минимальное определяемое количество пестицидов в 10 раз больше. Другими путями можно детектировать приблизительно 1,5— 5 мкг вещества. Предел определения зависит от реакционной способности исследуемых соединений. Необходимо помнить, что использование высококачественных ТСХ-пластинок и тщательно очищенных растворителей, а также и предварительная очистка анализируемой смеси позволяет снизить предел определения пО любой из ТСХ методик. Для того чтобы достичь максимальной точности и достоверности результатов определения, пестициды или другие компоненты почвы необходимо детектировать колориметрическим или другими инструментальными методами после экстрагирования их из слоя сорбента. Детектирование в ТСХ постоянно совершенствуется, поэтому перед проведением массовых анализов необходимо ознакомиться с последними достижениями в этой области. [c.348]

Ионообменную хроматографию углеводов можно успешно сочетать с большинством колориметрических методов детектирования, поддающихся автоматизации (разд. 7.2.7). Описано несколько полностью автоматизированных систем для анализа углеводов [74, 87, 98—101]. [c.25]

Принципы работы с этими оптическими метками во многом те же, что и с радиоактивными метками, за исключением того, что метод детектщ)Ования включает спектрофотометрическое измерение. Однако большинство прямых методов с колориметрической меткой, когда длины волн возбуждения и детектирования совпадают, редко достигают высокой чувствительшсти в иммунном анализе. Но можно получить улучшение на порядок величины, разделив эти длины волн. Существует дна основных класса меток, пригодных для этого флуорофоры и хемилюминесцеитиьш реагенты. [c.585]

При создании аминокислотных анализаторов были использованы все достижения аминокислотного анализа. Хроматография аминокислот на ионитах по существу осталась без изменений необходимо было только обеспечить подачу элюента с постоянной скоростью. Потребовалось также преобразовать нингидриновый метод детектирования в непрерывный процесс, что было достигнуто путем модификации двух хорошо известных методов. Вначале была разработана система, по которой реакцию с нингидрином проводили в проточном капиллярном реакторе [4]. Несколько позднее для проведения анализа был использован автомат для серийных колориметрических анализов, созданный фирмой Te hni on. Эти системы легли в основу двух основных моделей аминокислотных анализаторов. Таким образом, с учетом существования одно- и двухколоночных хроматографических систем возникло четыре типа аминокислотных анализаторов [c.315]

Общим методом детектирования нуклеиновых кислот в элюатах является измерение УФ-поглощения при 260 нм. В тех, случаях, когда нуклеиновые кислоты вследствие включения меченых предшественников содержат радиоактивную метку (Щ, или Р), спектрофотометрия дополняется более чувствительным методом определения радиоактивности. Кроме того, качественный и количественный анализы фракций можно проводить колориметрически, с реактивами, используемыми обычно для определения нуклеиновых кислот в экстрактах из тканей [32] орцина в случае определения РНК [33] и дифениламина в случае определения ДНК [34]. Для этих же целей используют специфические нуклеазы (ДНКаза, РНКаза, РНКаза Н, нуклеаза из Кеигоз-рога, фермент Лемана и т. п.) [c.68]

С 1957 г. начал серийно выпускаться автоанализатор фирмы Te hni on и занял господствующее положение во всех отраслях аналитической химии. Область его применения и аналитические возможности постоянно расширяются за счет введения дополнительных модулей. Модули этого анализатора выполняют следующие функции отбор проб, прокачивание растворов через систему, отделение нежелательных компонентов проб, нагревание, измерение и запись результатов. В настоящее время выпускаются блоки не только для видимой области спектра, но и для пламенной фотометрии, УФ-спектрофотометрии и флуориметрии. Используемый в этом автоанализаторе метод непрерывного потока не накладывает каких-либо ограничений на выбор метода детектирования. Требуется только согласовать измерительный прибор с автоанализатором, поэтому наряду с колориметрическим принципом, используемым в серийных приборах, могут использоваться и другие способы детектирования, например электрический,радиометрический или пламенно-ионизационный. Дифференциальные автоматические неравновесные колориметры для контроля и регулировки растворов в различных отраслях химического производства выпускаются, например, фирмой Вгап and Lubbe в Гамбурге, принципиальная схема которого показана на рис. 24 [60]. [c.252]

НОВ 126]. Используют специально сконструированную ионизационную ячейку (фирмы Jarrell-Ash Со. ) или применяют аргоновый детектор, поставляемый вместе с хроматографом фирмой Shandon S ientifi o. . Когда детектор работает на низком напряжении, соединения, содержащие атомы галоида, образуют отрицательные пики, а углеводороды дают очень малые положительные отклонения. Зто позволяет легко отличить указанные классы соединений один от дру гого [19]. Этим методом удается определить альдрин в концентрации 0,05 части на миллион и дильдрин в концентрации 0,1 части на миллион в гексановых экстрактах капусты, картофеля, помидор, крыжовника и чая без предварительной очистки. В экстрактах моркови нижний предел детектирования для альдрина составляет 0,3 части на миллион и для дильдрина 0,6 частей на миллион. Это объясняется более высоким фоном. По-видимому, для определения соединения в концентрации 0,1 части на миллион требуется частичная очистка пробы. Даже в этом случае метод значительно проще и более надежен, чем обычно применяемые колориметрические и биологические методы. [c.579]

Для стандартных измерений при более низкой чувствительности можнр использовать менее сложную методику [4]. Поток, выходящий из хроматографа, сжигают в кварцевой трубке для сжигания, а образующиеся газы пропускают через слой водной суспензии хлоранилата ртути в течение такого периода, который соответствует времени удерживания исследуемого компонента. При наличии хлористого водорода будет выделяться хлораниловая кислота, которую определяют колориметрически после удаления фильтрацией или центрифугированием нерастворимой ртутной соли. Для определения необходимо присутствие минимум 10 мкг ионов хлора. Этот метод обладает рядом недостатков. Если используют внутренний стандарт или если присутствует более одного пестицида, необходимо в течение одного опыта отбирать несколько проб. Это требует тщательного хронометрирования процесса для этого каждый раз, когда в результате хроматографического анализа известной смеси изменяются параметры, необходимо вновь измерять удерживаемые объемы, если смесь для анализа была взята в количествах, достаточно больших, чтобы получить сигнал от обычного термического детектора. Кроме того, уступы на пиках или пики, возникающие в результате присутствия в пробе непредвиденных соединений, могут нарушить детектирование. Основной недостаток заключается в низкой чувствительности при содержании веществ в количестве менее 1 мкг. [c.579]

Смит и Лихтенберг [29] с помощью ТСХ разделяли алкил-> хлор-, амино- и нитрофенолы, обнаруженные в поверхностных во- дах в концентрациях менее 1 мкг/л. Авторы утверждают, что их-метод характеризуется более высокой чувствительностью, чем детектирование с помощью измерения УФ- и ИК-спектров, а также более чувствителен и селективен, чем колориметрическое определение с 4-аминоантипирином. Более чувствительный метод ГЖХ в то время не использовали, так как считали его непригодным для анализа загрязнений поверхностных вод. Пробы объемом 1 л отбирали методом захвата или же проводили концентрирование 1000—20 000 л пробы адсорбцией на угле. Стеклянные емкости для проб отделяли друг от друга тефлоновыми листами и перевозили в лабораторию в ящиках из полистирола. Значения pH проб объемом 1 л доводили до 2 и экстрагировали эфиром или хлороформом тремя порциями по 100 мл каждая. Экстракт постепенно упаривали до объема 0,1 мл, причем окончательное упаривание проводили в центрифужной пробирке объемом 15 мл. Пробы, собранные вторым способом, сушили в сушильном шкафу в течение 2 дней при 40 °С, а затем экстрагировали 2500 мл хлороформа в аппарате Сокслета в течение 35 ч. Экстракт фильтровали через предварительно отмытый хлороформом бумажный фильтр и постепенно упаривали досуха (последнюю стадию проводили в предварительно взвешенном химическом стакане) и определяли массу остатка. Разделение проводили на пластинках размером 20X20 см, покрытых слоем силикагеля С толщиной 0,25 мм. Пластинки высушивали на воздухе и активировали в сушильном шка- фу при температуре 100 °С. Следует отметить, что пластинки, на которые наносили водную суспензию, высыхают за 5 мин недостаточно, и оставшаяся вода испаряется при активировании в сушильном шкафу, конденсируется на поверхности стеклянных подложек и капает на нижние пластинки, нарушая однородность слоя сорбента в месте падения. [c.591]

Биогель Р-2 и другие сорбенты, имеющие достаточно высокую механическую прочность, можно использовать в хроматографических системах типа ВЭЖХ с детектированием углеводов -с помощью автоматизированного колориметрического метода [98] или, если позволяет природа элюента, с помощью дифференциального рефрактометра [159, 160, 162]. Такого рода систе--мы находят все более широкое применение в СЭХ углеводов, особенно при анализе смесей олигосахаридов. [c.32]

Известно несколько стандартных колориметрических методов количественного определения углеводов [213], которые могут быть использованы в сочетании с автоматизированными аналитическими системами для детектирования углеводов, вымываемых с различного рода колонок. В первоначальном варианте углеводного анализатора фирмы ТесЬп1соп [74] реализован орцин-сернокислотный метод [73], который включает динамическое смешение реагента с элюатом, поступающим с колонки, при помощи перистальтического многоканального насоса. Поток жидкости, разделенный пузырьками воздуха, проходит затезм через нагревательную баню и после удаления пузырьков воздуха поступает в кювету проточного колориметра (420 нм). Предел обнаружения по сахарам для этой системы составляет около 10 моль. Использование насосов, изготовленных нз кислотоустойчивых материалов и обеспечивающих прецизионную подачу реагента (и, следовательно, низкий уровень шума нулевой линии), позволило отказаться от разделения потока жидкости пузырьками воздуха, что привело к значительному повышению чувствительности автоматизированного орцин-сернокислотного метода детектирования сахаров (в случае пентоз Ы0- ° моль, в случае гексоз З-Ю моль) [214]. Такого рода насосы в настоящее время широко используются в аналитических системах данного типа [80, 98]. [c.37]

Известны две работы, в которых прямо сравнивают колориметрический и флуориметрический варианты ИФА с использованием одних и тех же методик и реагентов, за исключением субстратов и систем детектирования. В одной из них (Yolken, Stopa, 1979) показано, что при тестировании ротовируса человека в образцах кала флуориметрический метод оказывается в 100 раз более чувствительным, чем РИА или колориметрический ИФА. Во второй работе (АН, АН, 1983) сообщается о 16-кратном повышении чувствительности при переходе от колориметрического к флуориметрическому методу ИФА антител против ДНК, являющихся маркером системной красной волчанки. В обоих случаях выявленные преимущества применения флуориметрии позволили значительно повысить эффективность клинического тестирования. [c.292]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология