Градиентное элюирование использование детектора

Вода представляет собой важнейший растворитель в обращенно-фазной и ионообменной хроматографии. Основными примесями в воде, которые мешают проведению хроматографического процесса, являются различные соли и микропримеси углеводородов и других органических соединений. Присутствие солей недопустимо в ионообменной хроматографии, а примеси органических соединений вызывают существенные затруднения в обращенно-фазной хроматографии (особенно в градиентном элюировании) при использовании флюоресцентного и УФ-детекторов. [c.134]

Рефрактометр представляет собой недеструктивный концентрационный детектор средней чувствительности. Последняя определяется разностью показателей преломления элюента и анализируемых веществ и часто может быть повышена за счет правильного выбора подвижной фазы. В оптимальных условиях предел обнаружения для рефрактометра достигает 5 10" г/мл. Основные недостатки рефрактометрических детекторов— практическая невозможность использования при градиентном элюировании и необходимость тщательной стабилизации температуры. Для работы на максимальной чувствительности нужно поддерживать температуру элюента и обеих ячеек кюветы, с точностью до 10 -10 °С, что затруднительно даже при помещении кюветы в металлический блок с большой теплоемкостью и использовании эффективных теплообменников. Последние, в свою очередь, увеличивают мертвый объем между колонкой и кюветой детектора, что приводит к дополнительному размыванию хроматографических зон и снижению эффективности разделения. [c.153]

Следует заметить, что необходимость использования подвижных фаз с довольно высокой ионной силой ограничивает применение потенциометрических детекторов в жидкостной хроматографии практически только анализом неорганических соединений и не позволяет использовать градиентное элюирование. По этой причине потенциометрическим детекторам трудно конкурировать с детекторами других типов. [c.574]

Дифференциальный рефрактометр представляет собой в значительной степени универсальный детектор (исключая его использование при градиентном элюировании). Его применяют главным образом в тех случаях, когда образцы не поглощают в УФ-области или когда элюент сильно поглощает в этой области. Детектор этого типа измеряет разность показателей преломления элюента и раствора анализируемого вещества в элюенте. В рефрактометре френелевского типа луч света отражается от границы раздела стекло — жидкость и разность углов падения и отражения является функцией угла падения и показателя преломления. В другом типе рефрактометра измеряется интенсивность света, которая пропорциональна разности пока зателей преломления двух жидкостей. Каждая из жидкостей проходит через отдельную часть одной и той же ячейки, которая разделена стеклянной пластиной под диагонали. Такие приборы способны обнаруживать соединения при концентрации их до [c.71]

Третьей важной характеристикой детекторов, применяемых в жидкостной хроматографии, является возможность их использования при градиентном элюировании. Градиентное элюирование, при котором производится плавное изменение состава растворителя во времени, приобретает все более важное значение в жидкостной хроматографии, и для его осуществления необходимы детекторы, нечувствительные к изменению состава растворителя. Некоторые детекторы, такие, как ультрафиолетовый и пламенно-ионизационный, в основном не чувствительны к составу растворителя, в то время как другие (например, рефрактометрический) можно приспособить для градиентного элюирования за счет примене-рря сравнительной колонки и растворителей с добавка- [c.119]

Подавляющее большинство опубликованных результатов по жидкостной хроматографии с применением градиентного элюирования было получено при использовании детекторов, измеряющих поглощение света. [c.150]

В принципе в системе пламенно-ионизационного детектора с транспортирующей проволокой удаление растворителя происходит до того, как проба попадает в пламя. Поэтому сигнал этого детектора в основном не зависит от состава растворителя. На практике же растворитель редко удаляется полностью. Одностадийный процесс, применяемый для удаления растворителя с транспортирующей проволоки, может обеспечить полное удаление растворителя без улетучивания анализируемого вещества только в том случае, если существует огромная разница в летучести вещества и растворителя. Перенос растворителя в детектор вместе с анализируемым веществом делает этот детектор чувствительным к изменениям состава растворителя. При работе с буферными солевыми растворами применение пламенно-ионизационного детектора с транспортирующей проволокой невозможно в связи с их нелетучестью. В то же время, градиентное элюирование с использованием солевых бу- [c.150]

Рис. 7-18. Разделение с использованием градиентного элюирования примесей, содержащихся в деионизованной воде. Колонка 200 мм X 0,26 мм (внутр. диам.) неподвижная фаза силикагель, модифицированный ОДС (5 мкм) подвижная фаза ацетонитрил/вода обьемная скорость 2,08 мкл/мин предварительная колонка 10 мм X 0,2 мм (внутр. диам.) неподвижная фаза силикагель, модифицированный ОДС (15 - 30 мкм) обьем смесительного сосуда 109 мкл проба 3 мл деионизованной воды детектор УФ, длина волны 235 нм.

Хроматография является многокомпонентным методом анализа, поэтому использование универсальных детекторов в этом методе предпочтительно. В ионной хроматографии распространенным универсальным детектором является кондуктометрический. Для него разработаны различные варианты метода (двухколоночный, одноколоночный, косвенный). Как уже говорилось, кондуктометрический детектор позволяет определить за 20 мин до 10 ионов, а с градиентным элюированием — более 20 ионов [43]. Чувствительность определения с кондуктометрическим детектором максимальная, особенно в двухколоночном варианте (до [c.91]

Благодаря высокой чувствительности детекторов, применяемых в современных жидкостных хроматографах, для анализа достаточно нескольких микролитров вещества. Разделение осуществляется в короткие промежутки времени за счет использования колонок малых размеров и высоких скоростей элюирования (давления на входе в колонку до нескольких сотен атмосфер). При применении некоторых типов детекторов (спектрофотометрических, транспортных и др.) можно управлять ходом разделения путем регулируемого изменения температуры, давления или состава элюента в ходе анализа. Программируемое изменение состава элюента (градиентное элюирование) плодотворно реализовано, например, в уже отмечавшейся методике ЛЭАХ [123, 124] (см. рис. 1.1). На применении транспортного детектора и смеси трех растворителей в качестве подвижной фазы основан способ [c.33]

Для создания определенного pH и поддержания на необходимом уровне готовят соответствующий буферный раствор. Если это возможно, то буферный раствор подбирают таким образом, чтобы его функциональная группа была похожа на функциональную группу образца. Так, ацетатный буферный раствор приемлем для анализа карбоновых кислот, фосфатный — для люирования нуклеотидов. Большое значение имеет чистота буферного раствора, так как он не должен детектироваться выбранным детектором, что особенно важно при работе в режиме градиентного элюирования. Чистота буферного раствора зависит от фирм-производителей, и даже разные партии одной фирмы могут различаться по составу. Каждая новая партия буферного раствора тестируется двумя холостыми хроматографическими опытами перед использованием. Второй опыт показывает, существуют ли вещества, отложившиеся в колонке в процессе регенерации или в течение последних стадий предыдущего градиента. Хотя большинство разделений проводят в водных буферных растворах, иногда добавляют органический растворитель (метанол, этанол) в количестве 3-10% для повышения селективности и улучшения растворимости образца. При этом концентрация растворителя не должна быть велика, чтобы не выдать осаждения буферной соли, о чем будет свидетельствовать появление течи в системе и увеличение сопротивления в колонке. [c.38]

Нередко в состав системы для ГВЭЖХ приходится добавлять дорогое устройство для эффективной дегазации растворителей продуванием гелия, действием вакуума на растворитель, подаваемый через специальные полупроницаемые трубки и т.д. Это связано с тем, что при смешении плохо дегазированных растворителей всегда выделяются пузырьки, так как растворимость газа в смеси растворителей обычно отличается от суммы растворимостей в чистых растворителях. Это особенно опасно при градиенте низкого давления, так как пузырек газа, попавший в клапанную систему и в насос, полностью нарушает их работу. Наконец, в градиентной системе существует довольно заметный объем от места формирования градиента растворителя до места его поступления в колонку обычно этот объем составляет от 1 до 3 мл или больше, поэтому состав растворителя, поступающего в колонку, отличается от того, который формируется в это же время. При работе на колонках малого диаметра (1—2 мм) и при небольших расходах растворителя (10—200 мкл/мин) это приводит к еще большим отличиям. Затруднительно гомогенное смешение сильного и слабого растворителей, поступающих в смеситель недостаточно эффективное смешение и неоднородность потока вызывают заметное увеличение шумов, что мешает использовать чувствительные шкалы детектора. Наконец, при градиентном элюировании практически исключается использование рефрактометрического детектора, так как изменение показателя преломления при изменении состава растворителя приводит к нарушению его работы. [c.66]

Рис 7-17 Разделение с использованием градиентного элюирования примесей содержащихся в дистиллированной воде находившейся в контакте с порошком угля Колонка 0,5 м х О 22 мм (внутр диам) неподвижная фаза силикагель модифицированный ОДС (5 мкм) подвижная фаза ацетонитрил/вода, измене ние состава фазы в процессе разделения показано на рисунке, обьемная скорость 1 04 мкл/мин проба 2 5 мл дистиллированной воды, находившейся в контакте с порошком угля Предколонка 10 м х О 2 мм (внутр диам ) непоя вижная фаза силикагель модифицированный ОДС (15-30 мкм), детектор УФ> длина волны 225 нм [c.174]

Другим недостатком детекторов по теплоте адсорбши является то, что при использовании метода градиентного элюирования из-за адсорбции некоторых компонентов градиентных элюентов неизбежно возникает дрейф нулевой пинии. [c.218]

Абсорбция в ИКобласти спектра также может быть ишользована для детектирования в жидкостной хроматографии. По своей чувствительности ИК-детекторы близки к дифференциальным рефрактометрам, но выгодно отличаются от них нечувствительностью к изменению моле куляршй массы разделяемого вещества. Выбор подвижных фаз при использовании ИК-де-тектора ограничен, так как трудно найти растворитель, не поглощающий в анализируемой области длин волн. В табл. 17 приведены области поглощения различных типов связей. При по ре соответствующих растворителей возможно использование ИК-детекторов и при градиентном элюировании. Для анализа нефтепродуктов ИК-детекторы применяют редко [44,45] ив основном для получения качественной характеристики о составе выделяемых групп. [c.64]

Ограничения метода градиентного сканирования. Основной недостаток описанного выше метода градиентного сканирования состоит в необходимости использования селективных детекторов. Универсальные детекторы, т. е. регистрирующие любой компонент, обязательно будут давать гигантский сигнал при смене состава подвижной фазы. Из-за этого фона обнаружение компонентов образца окажется невозможным. Поэтому необходимо применять детектор, не реагирующий на смеиу состава подвижной фазы. Наиболее обычным в ВЭЖХ является детектор, регистрирующий изменение поглощения в УФ-области. Естественно, что он может быть применен в условиях градиентного элюирования, если выбранные растворители не поглощают при рабочей длине волны детектора. Обнаружение по поглощению в УФ-области может, однако, быть практически универсальным, если мы выберем более короткие длины волн (например, 210 нм). В таком случае мы можем говорить о почти универсальном обнаружении [34]. Возможность применения коротких длин волн зависит от природы и чистоты растворителя. В связи с этим в ОФЖХ ацетонитрил следует предпочесть метанолу. Однако, как указывалось выше, водно-метанольные градиенты позволяют оценить поведение компонентов в изократических условиях на основании единичного опыта, так как в данном случае соблюдается уравнение (3.46). Применительно к смесям тетрагидрофурана и воды уравнение (3.46) выполняется лишь приблизительно, а для смесей ацетонитрила и воды вообще становится неверным (см. табл. 3.1). [c.248]

Микроадсорбционный детектор является наименее пригодным из всех четырех типов детекторов для использования при градиентном элюировании. Аналогично рефрактометрическому детектору он реагирует на изменение состава растворителя. Однако в отличие от рефрактометрического детектора изменение композиций, соответствующих определенному конечному составу при градиентном проявлении, проводимое с целью исключения дрейфа нуля детектора, затрудняет разделение анализируемой смеси. [c.151]

Проба 0,3 мкг гидролизата рибонуклеиновой кислоты хроматограф мо дели ЬС8-1000 с ультрафиолетовым детектором шкала самописца соответствует 0,08 ед. оптической плотности способ разделения — анионообменная хроматография с использованием градиентного элюирования колонка длиной 300 см, внутренним диаметром 1 мм заполнена твердыми инертными частицами, покрытыми тонкой пленкой анионообменной смолы температура колонки 80 °С подвижная фаза — раствор КН2РО4, концентрация которого изменяется во времени от 0,01 М (pH 3,30) до 1,0 М (pH 4,3) скорость потока 12 мл/ч давление перед колонкой 35 ат [4]. [c.205]

Чувствительность транспортного детектора по сравнению с ПИД применяемым в газовой хроматографии, не очень велика, однако находится в той же концентрационной области, что и чувствительность почти всех детекторов в жидкостной хроматографии, т. е. составляет 1—3 мкг/мл. Если учесть, что на проволоке остается очень незначительное количество пробы, то эта чувствительность отличная. Не следует упускать из виду, что часть пробы при испарении растворителя теряется. При этом различия в летучестях компонентов пробы могут исказить количественный результат. Кроме того, не все сгорающие газы подходят для ПИД. Этот детектор был бы идеальным для жидкостной хроматографии при высоких давлениях, так как с его похмощью можно определять свойства собственно пробы, не содержащей элюента, и при этом были бы возможны без особых осложнений разделения с использованием градиентного элюирования. [c.72]

При использовании ионообменников на основе ППМ или силикагелей с модифицированной поверхностью такие проблемы не возникают. Хо1я са.м фосфатный буфер не должен поглощать в УФ-области, при градиентном элюировании может наблюдаться смещение нулевой линии УФ-детектора (254 нм из-за присутс вия в фосфатных буферах полифосфатов. [c.197]