Градиентное элюирование ряд элюентов

Наибольшим достоинством жидкостной хроматографии является градиентное элюирование — изменение состава элюента во времени, позволяющее разделять смеси различной полярности за счет изменения коэффициента распределения. Градиентное элюирование можно рассматривать как аналог программирования температуры в газовой хроматографии. [c.204]

Устройство для градиентного элюирования. Как уже указывалось, значительного эффекта разделения смесей, состоящих из. близких ио свойствам компонентов, можно достичь при помощи непрерывно изменяющегося состава элюента в сторону возрастания его элюирующей способности. Для этой цели применяются специальные устройства, которые сводятся в основном к двум типам. [c.86]

Слабо удерживаются сильнополярные вещества, они элюируют раньше менее полярных и неполярных (близких по молекулярной массе и геометрической структуре) если на полярном адсорбенте сильнополярные вещества удерживаются сильно и для их десорбции необходимо градиентное элюирование с увеличением полярности элюента, то из колонны с неполярным адсорбентом при применении полярных элюентов сильнополярные вещества выходят достаточно быстро. [c.307]

Для ступенчатого градиентного элюирования хроматографических групп была использована возможность разделения смеси элюентов по способу фронтальной хроматографии [3, 5], согласно которому разделение элюентов должно идти по схеме, представленной на рис. 1. При разделении смеси, например, из трёх растворителей различной адсорбционной активности в предварительной колонке (см. рис. 1, а) первым из колонки выйдет некоторое количество наиболее слабо адсорбирующегося растворителя А в чистом виде, затем смесь растворителя А с более сильно адсорбирующимся растворителем В и, наконец, исходная смесь растворителей А, В и С. Поступая в разделительную колонку, растворитель А вытесняет с силикагеля слабо адсорбирующуюся часть образца (компонент а) и движется вместе с ним к выходу из колонки. Затем по этой же схеме десорбируются компоненты Ь и с. [c.6]

Рефрактометр представляет собой недеструктивный концентрационный детектор средней чувствительности. Последняя определяется разностью показателей преломления элюента и анализируемых веществ и часто может быть повышена за счет правильного выбора подвижной фазы. В оптимальных условиях предел обнаружения для рефрактометра достигает 5 10" г/мл. Основные недостатки рефрактометрических детекторов— практическая невозможность использования при градиентном элюировании и необходимость тщательной стабилизации температуры. Для работы на максимальной чувствительности нужно поддерживать температуру элюента и обеих ячеек кюветы, с точностью до 10 -10 °С, что затруднительно даже при помещении кюветы в металлический блок с большой теплоемкостью и использовании эффективных теплообменников. Последние, в свою очередь, увеличивают мертвый объем между колонкой и кюветой детектора, что приводит к дополнительному размыванию хроматографических зон и снижению эффективности разделения. [c.153]

УФ детектор можно использовать при градиентном элюировании, а также для определения в-в, не поглощающих УФ излучение. В этом случае в элюент добавляют в небольщой концентрации в-во, поглощающее УФ излучение, тогда анализируемое в-во, не поглощающее УФ излучение, дает отрицат. пик. Иногда используют ИК и сканирующие ИК спектрофотометры. [c.27]

Регистрацию хроматограмм и обработку данных проводят с помощью самописца или мини-ЭВМ, к-рая также рассчитывает количеств характеристики и в нек-рых случаях, качеств состав смесей Микропроцессор обеспечивает автоматич ввод пробы, изменение по заданной программе состава элюента при градиентном элюировании, поддержание т-ры колонки [c.153]

Аппаратура для градиентного элюирования используется для приготовления смесей с возрастающей силой элюирования. (Градиентное элюирование в жидкостной хроматографии аналогично температурному программированию в газовой хроматографии.) Устройства для программирования состава элюента можно разделить на два основных типа [c.33]

Фракционирование полисахаридов на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой (31] проводят следующим образом. В колонку полисахариды вводят в виде водного раствора максимальной концентрации. Вначале ДЭАЭ-целлюлозу в колонке промывают водой, чтобы определить, удерживаются ли полисахариды этой целлюлозой. После этого проводят ступенчатое или непрерывное градиентное элюирование. Непрерывное градиентное элюирование позволяет определить число фракций и концентрации электролитов, необходимые для ступенчатого элюирования каждой из этих фракций. Ступенчатое вымывание позволяет лучше разделить полисахариды на фракции, чем непрерывное градиентное элюирование. Скорость протекания элюента через колонку не должна превышать 1,5 мл в минуту. Фракции объемом 10—20 мл собирают обычно с помощью автоматического коллектора. [c.47]

Самый простой вариант элюирования — изократический, при котором состав элюента не меняется. Его используют при разделении соединений с близким сродством к неподвижной фазе. В некоторых случаях, используют градиентное элюирование, при котором состав элюента в процессе разделения компонентов изменяют по заданному закону. В этом случае элюирующая сила подвижной фазы возрастает, в результате чего сокращается время удерживания сильно сорбируемых веществ и улучшается разделение смеси. [c.269]

Применяя различные элюенты, можно изменять параметры удерживания и селективность хроматографической системы. Возможно использование градиентного элюирования. Селективность в ЖХ в отличие от ГХ определяется не одним, а двумя факторами — природой подвижной (элюент) и неподвижной фаз. [c.307]

Обычно хроматографию начинают при pH 7,5—8,0 и при концентрации иона С1 или СН зСОО 0,01—0,005 М и заканчивают при pH 8,0—8,5 и концентрации элюента 0,5—0,75 М. Определенные преимущества имеет градиентное элюирование. [c.203]

Г. Подбор условий хроматографии. Можно применять как ступенчатое, так и градиентное элюирование. Ступенчатое элюирование удобно только в тех случаях, когда компоненты фракционируемой смеси элюируются при существенно различающихся значениях pH и молярности элюента. [c.212]

Градиентное элюирование можно осуществлять тремя способами 1) увеличивать молярность элюента при постоянном pH, 2) менять pH элюента при постоянной молярности, 3) вести элюирование в градиенте как pH, так и молярности элюента. [c.212]

Выбор оптимальных условий,фракционирования в каждом данном случае делается на основании предварительных опытов хроматографии. Однако, как правило, для фракционирования природных полимеров с катионными свойствами, таких, как полипептиды и белки, удобнее градиентное элюирование с увеличением молярности элюента при постоянном pH. [c.213]

Наиболее широко применяется метод элюентной хроматографии. Элюирование выполняют разбавленными водными или водно-органическими растворами минеральных кислот, главным образом соляной или азотной. Метод градиентного элюирования с повышающейся концентрацией элюента имеет ряд преимуществ. Разделение можно улучшить введением в элю- [c.155]

В больщинстве насосов возвратно-поступательного типа применяют шаговые двигатели, скорость которых легко контролируется с помощью электронной схемы управления. Появляется возможность достаточно простого программирования расхода потока элюента, т. е. применения системы градиентного элюирования. Эффект создания градиента в наиболее простом случае достигается путем контролируемого смешения двух растворителей разной полярности, причем в одних случаях полярность элюента увеличивается (адсорбционная ЖХ), а в других уменьшается (обращенно-фазовая ЖХ). [c.261]

Благодаря высокой чувствительности детекторов, применяемых в современных жидкостных хроматографах, для анализа достаточно нескольких микролитров вещества. Разделение осуществляется в короткие промежутки времени за счет использования колонок малых размеров и высоких скоростей элюирования (давления на входе в колонку до нескольких сотен атмосфер). При применении некоторых типов детекторов (спектрофотометрических, транспортных и др.) можно управлять ходом разделения путем регулируемого изменения температуры, давления или состава элюента в ходе анализа. Программируемое изменение состава элюента (градиентное элюирование) плодотворно реализовано, например, в уже отмечавшейся методике ЛЭАХ [123, 124] (см. рис. 1.1). На применении транспортного детектора и смеси трех растворителей в качестве подвижной фазы основан способ [c.33]

При осуществлении элюентной хроматографии в верхнюю часть хроматографической колонки, наполненной, например, катионитом в водородной форме (Н-ф9рме), вводится смесь разделяемых ионов. Для получения компонентов в чистом виде элюирование проводят раствором кислоты или другим элюентом при постепенно возрастающей его концентрации (градиентное элюирование). Если исследуют смесь элементов разных групп периодической системы, то разделение при помощи элюирования растворами электролитов облегчается тем, что элементы разной валентности обладают различным сродством к иониту. Сорбируемость ионов возрастает от одновалентных к двух- и трехвалентным. Приблизительную закономерность сорбируемости ионов с одинаковой валентностью MOHiHO представить в виде сорбционных рядов [c.285]

Если компоненты разделяемой смеси имеют близкие значения к хроматографируют одним элюентом (изократич режим), если отдельные компоненты смеси сильно удерживаются сорбентом, используют серию элюентов возрастающей силы (ступенчатое или непрерывное градиентное элюирование) [c.153]

Существуют два вида элюирования — изократическое и градиентное. При изокрйтическам методе работают с одним растворителем постоянного состава, например, 30% метанола и 70% воды. Лучшее разделение достигается с использованием градиентного элюирования. При этом состав элюента непрерывно изменяется по опреде та1ной программе. Обычно используют растворители различной полярности. Например, в водно-метанольном элюенте доля метанола увеличивается с 30 до 70% (об.) линейно или по другой программе (см. рис. 5.3-3). Эффект градиента растворителя сравним с эффектом температурного градиента, известного в ГХ. Достигается сокращение времени анализа, а пики можно обрабатывать с одинаковой точностью по всей хроматограмме. [c.267]

При разделении многокомпонентных смесей одна подвижная фаза в качестве элюента может не разделить все компоненты пробы за приемлемое время, в этом случае применяют метод ступенчатого или градиентного элюирования. Для увеличения силы элюента в процессе хроматофафирования последовательно применяют все более сильные элюенты. Это позволяет элюировать все более сильноудерживаемые вещества за меньшее время. [c.311]

У ф. Детектор работает при одной и той же длине волны, соответствующей наиболее интенсивной линии ртутной лампы низкого давления Я = 253,7 им. Флуоресцентная приставка позволяет возбуждать излучение с X = 280 нм. УФ-Детектор наиболее чувствителен, если молярные коэффициенты светопоглощения компонентов высоки, а элюент не поглощает в ультрафиолетовой области спектра. В последнем случае можно использовать метод градиентного элюирования. Объем проточной кюветы этого детектора меньше 10 мкл. При Я = 254 нм можно отфеделять шобые ароматические соединения, большинство кетонов и альдегидов ( = 20 -10 ). УФ-Детектор [c.330]

С помощью ВЭЖХ можно определять [22] вещества, содержащиеся в вулканизованных резинах (вулканизующие агенты, проти-востарители и др.), а также продукты их химического превращения в процессе вулканизации. При анализе метанольного экстракта из резин используют обра1цённую ВЭЖХ, при этом реверсивная фаза работает с метанолом как элюент. Чтобы с помощью этого метода выделять содержащиеся вещества с различной полярностью, необходимо градиентное изменение состава элюента. При этом хроматографическое разделение начинается с относительно высокой доли водного буферного раствора, обладающего слабой элюентной способностью, чтобы отделить ранее вымытые полярные компоненты. Повышая содержание метанола и соответственно элюирующую способность элюента, можно выделить неполярные составляющие экстракта в зависимости от продолжительности анализа. Например, вначале содержание метанола в элюенте - 60% об., затем в первые 10 мин его содержание равномерно возрастает до 80%, а в последующие 30 мин - до 90%. В большинстве выпускаемых приборов имеется устройство для градиентного элюирования. [c.89]

Недостатки двух предыдущих элюирующих агентов существенно устраняются при использовании а-оксиизомасляной кислоты. Водные растворы этой кислТ5ты чаще всего применяют при разделении лантаноидов. Это наиболее эффективный элюент, применимый даже при температуре 20°С [16—19]. Однако для разделения более сложных смесей редкоземельных элементов необходима повышенная температура (87 °С). Обычно используют 0,2—0,4 М растворы а-оксиизомасляноЙ кислоты (pH 4,0—4,6) и градиентное элюирование (для уменьшения хвостов на кривых элюирования). В табл. 5.21 сравниваются факторы разделения редкоземельных и трансплутониевых элементов, полученных для указанных выше оксикислот. Представленные данные показывают более высокую разделяющую способность производных масляной кислоты. Многочисленные примеры применения оксикислот при разделении лантаноидов даны в табл. 5.28. [c.199]

Другой метод измерения основан на законе отражения света (закон Френеля), согласно которому интенсивность отраженного света, падающего на поверхность границы раздела жидкости и стекла, пропорциональна углу падения и разности показателей преломления двух сред. Преимуществом детекторов, работающих на этом принципе, является меньший объем ячеек (<3 мкл), в связи с чем они могут работать при небольших расходах элюента и с высокоэффективными колонками. Oднal 0 yв твитeль-ность таких детекторов в 50—100 раз ниже вствительности других типов РМД, поэтому они более пригодны для градиентного элюирования. Так как детектирование проиЬходит на границе раздела жидкости и стекла, для получения стабильной работы детектора необходимо следить за чистотой стекла. [c.273]

Недостатками ЭХД являются уменьшение чувствительности со временем в связи с изменением характеристик электродов, применение ртути некоторых типах ЭХД, значительная зависимость сигнала от расхода элюента и ограниченное применение в ВЭЖХ с градиентным элюированием. [c.280]

Преимуществами РАД являются хорошая воспроизводимость показаний, большой линейный диапазон детектирования, нечувствительность к изменениям потока элюента и в связи с этим применимость при градиентном элюировании, низкий предел детектирования (около 100 счетных единиц в 1 мин для С), применимость в препаративной хроматографии и для большого числа (5-, а-, и у-радиоактивных элементов. РАД применяют для анализа 1, Sb с использованием счетчика Гейгера [56]. [c.283]

Когда способные к обмену ионы элюента (Н+) имеют мень-,шее сродство к иониту, чем разделяемые ионы (N3+ и Ы+), в элюате в течение всего процесса элюирования обнаруживаются ионы элюента (Н+). Поэтому важно выбирать элюент так, чтобы его ионы легко отделялись от разделяемых ионов. В этом особенность элюентной хроматографии — когда все разделяемые ионы можно в принципе получить в виде отдельных фракций (в отличие от метода фронтального анализа). Однако полосы некоторых элементов могут быть сильно размытыми, и чистыми такие элементы можно получить лищь в виде очень разбавленного раствора. В этом случае полезно применять ступенчатое элюирование. Так как наибольшее размазывание наблюдается для наиболее сорбируемых ионов смеси, сначала элюируют не-, сколько ионов одним элюентом, а затем завершают элюирование другим раствором, более эффективно выделяющим ионы, оставшиеся в колонке. Можно применять непрерывное повышение концентрации элюента (градиентное элюирование). [c.159]

Для разделения конденсированных фосфатов применяют ионообменную хроматографию [947]. Орто- и пирофосфаты, содержащиеся в виде примесей в перекристаллизованном триполифосфате, разделяют путем градиентного элюирования 0,002 N HG1, к которой непрерывно добавляют 0,6 М R 1. Последовательно элюируются орто-, пирО и триполифосфат в элюатах объемом 100, 200 и 300—350 мл соответственно. Фосфат в элюатах определяют фотометрически в виде фосфорномолибденового комплекса. В качестве ионита применяют смолу дауэкс-1Х8. Для анализа более конденсированных фосфатов используют элюент с большей концентрацией KG1 (1 М или 2М раствор KG1). Выход фосфатов составляет >95%. [c.166]

Одним из наиболее эффективных способов повьш1ения качества разделения смесей является ГРАДИЕНТНОЕ ЭЛЮИРОВАНИЕ. Смысл приема заключается в увеличении по определенному закону элюирующей силы элюента в процессе одного анализа. [c.59]

В связи со сравнительно простой регенерацией, для проведения градиентного элюирования используются колонки, заполненные обращенно-фазовым адсорбентом. В этом случае увеличение элюирующей силы происходит за счет увеличения концентрации метанола или ацетонитрилз в элюенте в процессе одного анализа. Градиентное элюирование полезно в том случае, когда при использовании изократического элюирования невозможно добиться разделения всех компонентов, сильно различающихся по временам удерживания (рис. 5.9 и 5.10). [c.59]

Рис. 7.2. Хроматограммы опиума. Градиентное элюирование, Л-смесь 0.05 М КН2РО4 и 0.02 М ДЭА подкислена фосфорной кислотой до рН=2.6, В - ацетоиитрил. 5,10, 20,30 и 40% (об.) "В" в "А" за 25 мии. колонка 80x2 заполнена Сепароном SGX С18, расход элюента 100 мкл/мии., длины воли 218 и 228 нм

Для проведения анализа используются хроматографические колонки 120x2, заполненные Диасорбом С16 Т (16% углерода) или аналогичным по свойствам адсорбентом. Анализ проводится в режиме градиентного элюирования. Ступени элюента ацетонитрил -вода состава 60 40 (ступень А), 70 30 (ступень Б), 80 20 (ступень В), 90 10 (ступень Г). Программа ступенчатого градиента А Б В Г -1200 400 700 300. Для регенерации колонки используются 400 мкл ступени А. В случае УФ-детекции определение осуществляется на длинах волн 284, 296 нм. В случае флуориметрической детекции длина волны возбуждения - 282 нм, эмиссионный фильтр - от 360 нм. [c.102]