Рост бактерий в жидкой культуре

Исходная культура размножается в пробирках на агаре для засева колб с жидкой средой. Выращивание в колбах на качалке продолжается до 48 час. Титр бактерий колеблется от 10—24 млрд. в 1 мл. Культура клубеньковых бактерий в колбах используется как посевной материал для засева инокулятора (ферментера меньших объемов —100— 250 л), предназначенного для приготовления посевного материала для засева ферментеров больших емкостей (1000—3000 л.) Выращивание в инокуляторе продолжается 24—30 час. Количество бактерий в среднем 10 млрд. в 1 мл, а максимально— 25—30. Посевной материал из инокулятора передается в ферментер в количестве 5% от объема жидкости с внесением 100—130 млн. клеток бактерий на 1 мл среды. Продолжительность ферментации 36—48 час. Титр бактерий до 24 1мл,рд. в 1 мл (Бородулина и др., 1967). Посевной материал имеет большое значение при массовом размножении клубеньковых бактерий. Как будет показано ниже, от количества и (физиологического состояния клеток в посевном, материале зависят рост, и развитие микробной популяции. [c.201]

Характер роста бактерий в чистой культуре, выращенной на скошенном питательном агаре, может быть сухим, влажным, ползучим, складчатым, пигментированным. В жидкой питательной среде одни бактериальные культуры дают диффузное помутнение, другие характеризуются придонным, пристеночным ростом некоторые культуры образуют пленки на поверхности среды, другие — осадок на дне пробирки. [c.54]

Характер роста разных бактериальных культур на плотных и жидких питательных средах, различные типы колоний, пестрые ряды бактерий с разной ферментативной активностью. [c.48]

Аэрация. Всем облигатным аэробам в качестве акцептора электронов необходим молекулярный кислород. Для бактерий, растущих на агаре или в тонких слоях жидкости в присутствии воздуха, кислорода обычно вполне достаточно. В жидких средах при большом объеме жидкости аэробные бактерии могут расти только на поверхности, так как в более глубоких слоях по мере удаления от поверхности условия приближаются к анаэробным. Для нормального роста аэробных микроорганизмов в глубоких слоях жидкой культуры требуется аэрация. Микроорганизмы способны использовать только растворенный кислород. В то время как минеральные соли и органические вещества можно добавлять к среде в концентрациях, обеспечивающих рост бактерий на протяжении нескольких часов и даже дней, с молекулярным кислородом этого еде- [c.181]

Необходимо учитывать, что в реальных условиях, как правило, коррозионное воздействие оказывает группа бактерий, различающихся типом физиологической деятельности, питания, дыхания, механизмом воздействия на материал. Обычно такие смешанные популяции микробов являются гораздо более коррозионно-активными, чем чистые культуры, так как взаимно улучшают условия для развития. Например, растворенный в жидких средах кислород активно поглощается аэробными микроорганизмами (сапрофитами, тионовыми и др.). В результате на металлической поверхности оборудования, и прежде всего под слоем пристеночных отложений, образуются зоны, лишенные доступа кислорода, что, в свою очередь, создает условия для роста в таких зонах анаэробных микроорганизмов, например сульфатредуцирующих бактерий. Этим объясняется, например, тот факт, что сульфатредуцирующие бактерии очень часто [c.72]

При адаптации бактерий в три—пять параллельных емкости вносят 50-250 мл среды 9К без Fe , имеющей pH 1,8—2,2, 20-100 мл посевного материала (двух-трехсуточная культура), после чего добавляют 1-3% (от общей массы раствора) сульфидного концентрата. Рост и окислительную активность бактерий контролируют по изменению pH, Eh, Fe /Fe , количеству биомассы и целевых металлов в жидкой фазе пульпы 1-2 раза в сутки. Из засеянных колб для дальнейшей работы отбирают те, в которых отмечен наиболее активный рост бактерий и окисление сульфидных минералов. Из этих колб делают пересевы в свежую пульпу с равным или увеличенным количеством твердого, например, 5-7%. При последующих пересевах постепенно увеличивают количество твердой фазы в пульпе, доводя его до намеченного для выщелачивания. Культура считается адаптированной к сульфидному концентрату и подготовленной к исследованиям технологии чанового бактериального выщелачивания, если в течение ряда последовательных пересевов в пульпу с плотностью, на меченной для выщелачивания, получены удовлетворительные результаты по извлечению целевых металлов в раствор. [c.186]

Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь, потребляют питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий в такой системе называют периодическим культивированием, а культуру — периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным, а культура — непрерывной. [c.49]

Поскольку кислород плохо растворим в воде, рост аэробных бактерий часто лимитируется количеством растворенного в культуральной среде кислорода. Эта проблема особенно актуальна при большой плотности культуры или при крупномасштабной ферментации. Чтобы решить ее, биотехнологи попытались увеличить количество кислорода, поступающего в жидкую культуральную среду. Предложенные подходы состояли в следующем 1) подача в культуральную среду чистого кислорода вместо воздуха 2) подача воздуха (или кислорода) под давлением 3) добавление к культуральной среде хими- [c.355]

Рост культуры бактерий во времени подчиняется определенной закономерности. Для выявления этой закономерности клетки какого-либо вида помещают в жидкую питательную среду и через определенные интервалы времени ведут подсчет живых бактерий. Результаты выражают в виде зависимости логарифма числа клеток от времени. [c.33]

Наиболее простой для анализа бактериальной системой является чистая культура, растущая в виде дискретно диспергированных клеток по уравнению Моно в жидкой среде известного состава, в реакторе полного смешения, в котором нет влияния стенок на перемешивание, на субстрате, являющемся единственным источником энергии и углерода. Для такой системы можно предположить несколько температурных эффектов. Среди них явно обнаруживается влияние на максимальную удельную скорость роста, сродство бактерий к лимитирующему рост субстрату, эндогенный метаболизм и основные метаболические потребности, удельные скорости отмирания и лизиса культуры. [c.102]

В стерильный пакет с торфом вносят жидкий инокулюм клубеньковых бактерий. Эта операция выполняется инъекцией полой иглой (диаметр 5—8 мм) под давлением около 200—300 мм вод. ст. Давление и относительно большой диаметр иглы необходимы для быстрого введения инокулюма — 50—60 мл на каждые 140—150 г торфа (одна га/порция). Процесс может быть автоматизирован. Отверстие в пакете от укола заклеивается липкой лентой. Инокуляцию ведут в стерильном бо,ксе, соблюдая соответствующие меры предосторожности, исключащие попадание в препарат посторонних микроорганизмов. Норму засева выбирают так, чтобы исходный титр бактерий в инокулированном торфе составлял 0,5—1 млрд. клеток на 1 г препарата, влажность 55—60%. В торфе имеется небольшое количество углеводов, но этого количества недостаточно для получения высоких титров клубеньковых бактерий в готовом препарате. Поэтому до инокуляции в жидкую культуру вносят дополнительно стерильные растворы углеводов (мелассу, декстрин, молочную сыворотку), чтобы их количество составляло в итоге около 3% к массе сухого торфа. Для большинства клубеньковых бактерий лучшим оказалось внесение декстрина, хотя при их росте на жидких и агаризованных средах он не используется. [c.595]

В этой главе рассматриваются методы культивирования бактерий в жидких средах объемом от 10 мл до 100 л. Они пригодны для выращивания чистых культур бактерий в водной среде с различной степенью контроля за физическими условиями. После небольшой модификации методы можно использовать для смещанного культивирования двух или большего числа видов бактерий. Однако в задачи данной книги не входит обсуждение этого интересного раздела роста бактериальных культур. [c.374]

Ферментеры, или реакторы с мешалкой для культивирования бактерий, устроены таким образом, что обеспечивают постоянство среды. Рабочий объем ферментеров колеблется от 500 мл до тысяч литров. Обычные лабораторные ферментеры имеют рабочие объемы от 1 до 20 л. Поскольку они предназначены для того, чтобы максимально уменьшить температурный и химический концентрационный градиент в культуре, среда в них должна перемешиваться таким способом, чтобы достигалось быстрое и полное смешение всех компонентов жидкой фазы. В случае недостаточного перемешивания возникают застойные зоны, что приводит к появлению неконтролируемых локальных градиентов концентраций. Если перемешивание слабое, то популяция клеток будет сильно гетерогенной. Например, при слабом перемешивании аэробных культур контакт между кислородом воздуха и жидкой средой недостаточен, поэтому в некоторых участках ферментера могут создаваться почти анаэробные условия, что лимитирует рост культур. Если куль- [c.388]

В выживании бактерий после замораживания жидким азотом важную роль играет физиологическое состояние культуры. В основном в замороженном состоянии хранят активно растущие клетки из культур в середине или в конце экспоненциальной фазы роста [23]. [c.528]

При выращивании микроорганизмов в периодической закрытой системе, в которую после их засева в среду не вносятся и не удаляются питательные компоненты, размножение клеток поддерживается только на протяжении ограниченного времени. Наибольшим единообразием при этом отличается рост микробов в жидких питательных средах. Лучше всего растут в них факультативно-анаэробные виды, равномерно мутящие среду и образующие мягкие и влажные 5-формы колоний. Именно в этих культурах резче всего выявляются основные закономерности динамики роста бактериальной популяции. Хуже культивируются те бактерии, которые в закрытой системе на жидких средах растут придонно или формируют пленку, а на плотных - вырастают в виде сухих морщинистых Д-форм колоний. [c.82]

Для приготовления колонки Виноградского используют ил из пресных, солоноватых или морских водоемов, например из береговой части прудов, ручьев, озер или соленых болот. Смешивают 3 части этого ила с од-лой частью Са504-Н20 и добавляют немного нерастворимых органических веществ в виде фильтровальной бумаги или корней водных растений. Если используют фильтровальную бумагу, то добавляют также небольшое количество МН4М Р04. Смесь переливают в высокий стеклянный цилиндр диаметром не менее 5 см и высотой не менее 15 см к перемешивают ее так, чтобы не образовывались воздушные полости. Заполняют цилиндр водой (для выделения морских микроорганизмов используют морскую воду) и проводят инкубацию в темноте в течение 2—3 дней, чтобы свести к минимуму развитие фототрофных микроорганизмов, выделяющих кислород. Цилиндр оставляют при 18—25°С под лампой накаливания или при естественном освещении в течение всего периода инкубации. Анаэробный распад органического материала в колонке, сопровождающийся образованием СОг, спиртов, жирных кислот, оксикислот и других органических кислот и аминов, а также образованием Нг5 из Са504, обеспечивает рост многих микроорганизмов. При этом фототрофные серобактерии образуют характерные пурпурные, красные или зеленые пятна на стенках цилиндра либо слой или полосы в колонке над границей раздела фаз осадка и воды. При сборе бактерий со стеклянной поверхности или из отдельных слоев для микроскопирования, выделения или дальнейшего накопления в жидких культурах пользуются пастеровскими пипетками. Можно также последовательно снимать порции осадка ложечкой или шпателем. [c.293]

Обычно цель состоит в инокуляции участка поранения, который физически отделен от питательной среды так, что бактерии не контаминируют культуру, либо в инокуляции эксплантатов на твердой или в жидкой среде небольшим количеством агробактерий с последующим переносом инокулированных эксплантатов на среды, содержащие бактериостатические антибиотики (рис. 2.6). Первый подход позволяет проводить трансформацию без включения в питательную среду антибиотиков, которые могут повлиять на рост эксплантата, а также сводит к минимуму образование каллуса вокруг раны. Кроме того, он [c.107]

В богатых органическим веществом, хорошо дренированных и увлажненных почвах значительное место среди микроорганизмов занимает азотобактер, способный активно фиксировать молекулярный азот. Делались попытки применить культуры этих сво-бодноживущих бактерий в качестве землеудобрительиых препаратов. Но многочисленные исследования, проведенные с азотобактером, показали его низкую эффективность в качестве азотфиксатора. Тем не менее в некоторых случаях при выращивании овощных культур — салата, томатов, огурцов удавалось получить значительный эффект. Благотворное влияние азотобактера на растения в основном определяется образованием биологически активных веществ — антибиотиков, стимуляторов роста, витаминов. Жидкой культурой азотобактера обрабатывают корни рассады указанных растений. Но промышленной технологии получения препаратов этого микроорганизма не существует. [c.598]

Среды, уплотненные агар-агаром, при культивировании бактерий ие изменяют своей консистенции лишь очень немногие бактерии заметно разрушают агар-агар. Среды с желатином разжижаются очень многими бактериями с резко выраженными протеолитическими свойствами. Этот признак всегда используется для характеристики и определения вида бактерий. Определяется гидролиз крахмала. По характеру роста на жидких питательных средах также судят о некоторых свойствах изучаемой культуры. Образование пленки или кольца на стенках пробирки, равномерное помутнение или выпадение хлопьевидных или пылевидных осадков составляют дополнительную характеристику вида. Учитываются максимально физиологические и биохимические признаки окислительно-восстановительные функции, в частности редукция метиленовой сини и нитратов, образование индола, сероводорода, ам.миака, свертывание молока, иептонизация казеинового сгустка, сбраживание сахаров с образованием кислот и газов либо с образованием только кислот. Чем подробнее будет дана характеристика культуры, тем надежнее результаты ее идентификации. [c.53]

С помощью техники клонирования, описанной в разд. 21.3, из одной трансформированной клетки можно получить целое растение. Для этого клетки сначала выращивают в жидкой культуре, затем образовавшуюся недифференцированную массу, называемую каллусом, помещают на питательный агар. При правильном соотношении гормонов формируются побеги, корни и вырастает новое растение. Другой способ получения трансформированных растений подразумевает использование Agroba terium. Диски, нарезанные из листьев, заражают бактерией и раскладывают на питательном агаре. В процессе роста трансформированные кпетки формируют корни и побеги. [c.230]

Культуральные свойства характеризуют питательные потребности, условия и тип роста бактерий на плотньк и жидких питательных средах. Эти свойства устанавливаются по морфологии колоний и особенностям роста культуры. [c.48]

Экспериментально исследована возможность длительного проточного культивирования А. eutrophus Z-1 в автотрофных условиях с использованием жидких выделений человека. Установлено [Кеслер и др., 1973], что водородные бактерии, применяя в качестве источника азота жидкие выделения человека, растут при удельной скорости роста, равной 0,370—0,400 ч Ч Клетки, синтезированные на этом азотном субстрате, имеют обычный биохимический состав с высоким содержанием полноценных белков. Рост бактерий проходит с высокой степенью переработки азотистых компонентов из мочи культурой бакте- [c.118]

Придонный рост бактерий характеризуется обра--зованием осадка на дне пробирки с жидкой питательной средой. Осадок может быть скудным или обильным, крошковидным, гомогенным, волокнистым или в виде крупных рыхлых хлопьев, по консистенции вязким, слизистым, хрупким или пастообразным. Питательная среда над осадком может быть прозрачной или мутной. Цвет осадка и среды, находящейся над ним, определяется наличием пигмента, продуцируемого, культурой микробов. Если культура пигмента не образует, цвет среды не изменяется, а осадок приобретает, как прави ло, серовато-белый или желтоватый цвет. Придонный рост специфичен для бактерий с анаэробным типом дыхания. [c.59]

Отдельные группы микроорганизмов, например плесневые грибы, гораздо лучше развиваются и разлагают нефтепродукты в условиях поверхностного роста, на твердых средах, и практически не растут в жидких средах, в глубинных условиях [109]. Бактерии же, напротив, весьма активны в глубинной культуре, тогда ка на твердых средах растут плохо, и оценка результатов их деятельности в таком случае затруднительна. Так, Дж. Стевенсон [110] утверждает, что бактерии не разлагают нафталин, антрацен и фенантрен, основываясь на опытах с твердыми средами, однако большинство авторов, исследовавших усвоение бактериями ароматических углеводородов (см. гл. П), работали с глубинными культурами, а жидких средах. Пример этот свидетельствует о том, что неверный выбор методики и условий исследования приводит к ошибочным выводам. [c.42]

На чистых культурах испытание препаратов проводилось по методу введения ацетоновых растворов препаратор в жидкую агари-зированную питательную среду (КДА), после разлива и застывания которой, в чашках Петри, и на поверхность этой среды проводили посев соответствующих тест-объектов. Процент подавления микроорганизмов определяли по формуле Эббота в сравнении с контролем (посев микроорганизмов на питательную среду без введения препаратов), где рост мицелия грибов и чистых культур бактерий принимали за 100%. [c.82]

Баттерфилд идентифицировал эту культуру как разновидность Zoogloea ramigera, описанную ранее другими исследователями. Морфология этого организма следующая палочка с округленными концами, средняя длина 3 мк иногда встречаются клетки, имеющие длину 1—2 мк. Всегда имеется капсула, толщина стенки которой 1—1,5 толщины бактерии. Споры не образуются. Бактерии имеют один полярный жгут. По Граму, ни на одной стадии организм не окрашивается. Оптимальная температура 28—30°С оптимальная величина рН = 7,4—7,6 развивается при значениях pH = 5,6-f8,5. Культуральные признаки на стандартном агаре или желатине рост организма никогда не наблюдался слабый рост был получен на специальном иловом агаре и умеренный рост — на питательном агаре,, содержащем 10% бытовой сточной воды. В жидкой среде бактерии имели тенденцию к росту в виде рыхлого хлопка. При микроскопировании имели вид плотной сферической массы или массы с разветвленными лопастями. Бактерии хорошо развивались как при 20, так и при 37°С в питательных растворах, содержащих бульон, образуя при этом хлопья. Хорошо развивались в стерильной бытовой сточной жидкости при аэрации, образуя хлопьевидный ил, быстро оседающий при прекращении аэрации. Развитие прекращалось при повышении pH до 8,6—8,8. Организм — аэроб он не давал роста в течение [c.38]

Питательные среды для массового производства сапрофитных бактерий и грибов должны содержать, помимо основных питательных веществ (аминокислот или пептидов, сахара или других углеводов), стимуляторы роста и минеральные соли (включая микроэлементы). При этом следует создавать оптимальные условия культивирования с учетом возможностей производства. В основном массовое размножение саирофитов осуществляется двумя способами поверхностная культура (т. е. на полужидкой среде в чащках Петри) и глубинная культура (в жидкой питательной среде, например в культуральных флаконах или ферментерах). [c.152]

Следовательно, на разных отрезках кривой размножения бактерии отличаются неодинаковой потенцией роста. Число жизнеспособных особей микробов в разные фазы развития культуры определяют путем подсчета количества колоний, вырастающих на плотных средах после дозированных засевов бульонных культур, или общего количества клеток в определенном объеме жидкой питательной среды, например, на фо-тозлектроколориметре. [c.83]

Пробирки с посевным материалом на агаре или жидкой среде инкубируют при температуре, наиболее пригодной для оптимального развития клеток (обычно при 25—30°, хотя некоторым бактериям требуется 45°). После того как культуры достигнут удовлетворительного роста на агаре, их можно сохранять в холодильном шкафу. Некоторые бактерии можно сохранять в холодильном шкафу и в жидкой среде, в которой их выращивали. Спорообразуюш,ие бактерии сохраняются неограниченно долго, если суспензию клеток спор вылить на стерильную почву и затем высушить в вакууме при 45°. Почвенные культуры стрептомицетов и плесеней приготовляют аналогичным путем, за исключением того, что взвесь клеток до прибавления к стерильной почве инкубируют в течение двух дней и затем сушат при комнатной температуре. [c.12]

Пересевы культур микроорганизмов (главным образом асно-рогенных) проводятся на свежие питательные среды один-два раза в месяц (иногда еженедельно) снорогенные бактерии, актиномицеты, дрожжи и мицелиальные грибы пересевают через два-три месяца. Время инкубации до начала хранения не должно превышать периода экспоненциального роста культуры. Как правило, культуры, находящиеся в начале стационарной фазы роста, лучше переносят условия хранения. Частые пересевы, особенно на жидкие среды, вызывают изменение свойств, способствуют возникновению спонтанных мутантов, которые могут снижать активность продуцентов биологически вал<ных веществ. Для хранения следует использовать генетически однородную популяцию на плотной среде (если они на ней растут). Для предотвращения возможных изменений в популяции лучше приготовить серию субкультур, полученных из одной родительской культуры. Микроорганизмы между пересевами хранят в темноте при температуре от 5 до 20 °С. [c.150]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология