Агар BMS стандартных методов

Определение антимикробной активности антибиотиков основано на их способности угнетать рост микроорганизмов. Определение проводят методом диффузии в агар на плотной питательной среде путем сравнения размеров зон угнетения роста тест-микробов, образующихся при испытании растворов определенных концентраций Государственного стандартного образца и испытуемого препарата. [c.210]

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и другим ХТП необходимо определять в каждом случае инфекции и периодически — в ходе лечения. Главным показателем чувствительности является минимальная ингибирующая концентрация — МИК (мкг/мл), т.е. минимальная концентрация антибиотика, задерживающая рост микроба-возбудителя в стандартном опыте. Значение величины МИК определяют методом серийных разведений или методом диффузии в агар (дисками или Е-тестами). [c.42]

Определение активности лизоцима методом диффузии в агар, отличаясь относительно простой техникой постановки опыта, в то же время, при соблюдении стандартных условий, дает точные, хорошо воспроизводимые результаты, позволяющие рекомендовать его в практику. [c.153]

Агар для стандартных методов [6] [c.344]

Проведенная сравнительная оценка методов стандартного, прямого посева, мембранных фильтров и капельного на питательном агаре и агаре с ТТХ в концентрации 0,0005% показала, что получаемые результаты близки между собой, различия несущественны, за исключением метода прямого посева, при котором выделялось большее количестве сапрофитов. К недостаткам метода мембранных фильтров следует отнести случаи затягивания поверхности фильтра подвижными формами бактерий или споровыми микроорганизмами. [c.76]

Принцип. При санитарно-бактериологическом анализе сточных вод бактериальными показателями ее загрязнения чаще всего являются сапрофитные бактерии, способные расти на стандартных питательных средах и указывающие на наличие легко разлагающихся органических веществ, и бактерии — обитатели кишечника человека и теплокровных животных, указывающие на загрязнение воды фекальными массами. Метод заключается в определении в 1 мл воды общего содержания мезофильных аэробных и факультативных анаэробных бактерий, способных расти на питательном агаре при температуре 37 0,5°С в течение 24 2 ч, образуя колонии, видимые при увеличении в 5 раз. [c.184]

Для титрований по методу нейтрализации в качестве электродов сравнения применяют стандартные водородный, хингидронный, сурьмяный и другие электроды, которые можно использовать и как индикаторные электроды. Описание этих электродов дано ниже. Когда эти электроды используются в качестве электродов сравнения, их помещают в растворы с определенным pH, вследствие чего потенциал их становится определенным и может быть вычислен по приводимым выше формулам или определен экспериментально. Для того чтобы в процессе титрования потенциал не изменялся, такой электрод сравнения соединяют с исследуемым раствором при помощи л<идкостного мостика, заполненного раствором КС1 или KNO,, или через агар-агаровый мостик. Этим устраняется диффузия одного раствора в другой и изменение концентрации раствора. Например, для определения pH неизвестного раствора или при потенциометрическом титровании по методу нейтрализации, может быть применена такая система [c.349]

Чувствительность микробов к антибиотикам определяется методом диффузии в агар с применением стандартных бумажных дисков или методом разведения в ЖИДКИХ и плотных питательных средах. [c.68]

Определение чувствительности микробов к антибиотикам методом диффузии в агар с применением дисков. Стандартные ДИСКИ, выпускаемые отечественной промышленностью (Московский завод медицинских препаратов № 2), представляют собой кружки диаметром 5 мм, приготовленные из определенных сортов фильтровальной бумаги и пропитанные антибиотиками такой концентрации, которая обусловливает одинаковый диаметр зон задержки роста (28—32 мм) чувствительных тест-микробов. Для удобства работы диски с различными антибиотиками окрашивают в контрастные цвета (желтый, зеленый, голубой, сиреневый и др.). Метод диффузии в агар для определения чувствительности микробов к антибиотикам вследствие простоты и доступности выполнения в настоящее время используется всеми практическими лабо- [c.68]

Среда Сланеца и Бертли, М-энтерококковый агар (Стандартные методы США, 1975). ХТрожжевого экстракта 0,5 г, триптозы 2 г, глюкозы 0,2 г, фосфата калня двуосновного 0,4 г, азида натрия 0,04 г, ТТХ 0,01 г, агар-агара 1 г, воды дистиллированной 100 мл. [c.236]

KF стрептококковый агар (Стандартные методы США, 1975). Протеозного пептона пли полипептона 10 г, дрожжевого экстракта 10 г, хлорида натрия 5 г, -глицерофосфата натрия 10 г, мальтозы 20 г, лактозы 1 г, азида натрия 0,4 г, брохмкрезолового пурпурного 0,015 г, агара 20 г, дистиллированной воды 1000 мл. Расплавить ири нагревании, кипятить 5 мии. В охлажденную до 50—60°С среду добавить 10 мл 1% раствора ТТХ, довести pH до 7,2 с помощью 10% раствора карбоната натрия. Разлить в чашки. [c.238]

Понятие молекулярное сито с большим правом, чем к цеолитам, можно отнести к полупроницаемым мембранам. В первых работах по диализу мембранами служили пленки животного происхождения [7]. В настоящее время для диализа применяют преимущественно пленки из целлюлозы (Visking или Kalle). Эти пленки проницаемы в основном лишь для небольших молекул. Именно поэтому диализ вот уже в течение нескольких десятилетий используется как стандартный метод обессоливания высокомолекулярных соединений в водных растворах. Набухание мембран в растворе хлористого цинка или механическое растягивание значительно увеличивают их проницаемость [8]. Через такие мембраны довольно быстро могут диффундировать даже белки с молекулярным весом до 100 000 [8—10]. Из агара и агарозы получают мембраны, которые в набухшем состоянии полупроницаемы для белков [11] и даже для вирусов [12]. Изме- рение скорости диффузии через модифицированные мембраны из целлюлозы, обладающие ярко выраженной избирательностью, открывает новые возможности для изучения пространственной структуры сахаров [13], аминокислот [14] и пептидов [15]. Для такого тонкого разделения Крэйг предложил термин дифференциальный диализ [16]. [c.13]

Определение антимикробной активности антибиотиков с использованием трехдозного варианта метода диффузии в агар. Для проведения испытания готовят три раствора стандартного образца (Сь Сг, Сз) и три раствора испытуемого образца (Иь Иг, Из). Концентрации растворов, содержащих малую, среднюю и большую дозы, должны находиться между собой в кратном соотнощении (1 2 4). При необходимости это соотношение может быть изменено. Концентрация раствора Ся должна быть близка контрольной концентрации раствора стандартного образца, указанной в табл. 17. [c.213]

Бульон на вытяжке мозга и сердца для определения термоустойчивости (Стандартные методы США, 1975). Вытяжки из мозга теленка 200 г, вытяжки из сердца рогатого скота 250 г, протеозного пептона 10 г, глюкозы 2 г, хлорида натрия 5 г, фосфата натрия двуосновного 2,5 г, дистиллированной воды 1000 мл. Расплавить при нагревании, стерилизовать 15 мин при 112°С. После стерилизации pH 7,4. Среду рекомендуют в качестве питательной основы для определения тестов Шермена. Среда может быть использована в плотном варианте при добавлении 15 г агар-агара. [c.238]

Агар Чепмена — Стона (Стандартные методы США, 1975) дрожжевого экстракта 2,5 г, триптона 10 г, желатина 30 г, маннита 10 г, хлорида натрия 55 г, сульфата аммония 75 г, фосфата калия двуосновного 5 г, агар-агара 15 г, дистиллированной воды 1000 мл. Стерилизовать при 12ГС 10 мин, pH 7,0 после стерилизации. [c.243]

Количественные работы и успехи генетических исследований. Методы, с помощью которых можно выращивать в лаборатории микроорганизмы, разработали О. Брефельд, Р. Кох и его школа в прошлом веке. Введение в практику прозрачных питательных сред, уплотненных желатиной или агаром, позволило изолировать отдельные клетки, следить за их ростом в колонии и получать чистые культуры. Разработка стандартных методов стерилизации и приготовления питательных сред привела к быстрому развитию медицинской микробиологии. Хотя еще Кох описал количественные методы, их преимущества при работе с микроорганизмами были поняты только в последние 50 лет. Малые размеры микроорганизмов позволяют получать в одной пробирке или чашке Петри и исследовать популяции, состоящие из 10 -10 отдельных клеток, и благодаря этому выявлять такие редкие события, как мутация или передача приобретенного признака, не нуждаясь в сложных вспомогательных средствах и довольствуясь малым пространством. Огромные успехи биохимических и генетических исследований не в последнюю очередь достигнуты благодаря легкости обращения с бактериями. [c.21]

В настоящее время используются два стандартных метода определения хлоридов в нефти ГОСТ 2401 и ГОСТ 10097-62. Первый из них (объемный) весьма продолжителен и не обеспечивает полноты перевода С1 в водную фазу. Второй (потенциометрический) недостаточно точен, так как уже при титровании 0,01Ы AgNOз скачок потенциала составляет лишь около 15 мв. а обессоленные нефти требуют применения значительно более разбавленных рабочих растворов. Поэтому разработка точного и быстрого метода определения хлоридов является актуальной задачей химконтроля на нефтеперерабатывающих заводах. Нашими опытами установлено, что смесь этилового и изоамилового спиртов (1 8) может полностью растворять до 10% (по объему) нефти. При добавлении индифферентного электролита (Ь КОз или Мй(МОз)2) смесь оказалась пригодной в качестве фона для полярографического определения А +, а, следовательно, и для амперометрического титрования хлоридов. Разработка методики проводилась на установке для амперометрического титрования (О. А. Сонгина, амперометрическое титрование, 1957 г.) и самопищущем поляро-графе ОРИОН-КТШ типа 7—77—46 с диапазоном измерений от — 1 до —4 вольта. Индикаторным электродом служил платиновый вращающийся игольчатый электрод длиной 3 мм и диаметром 0,5 мм, электродом сравнения — насыщенный каломельный полуэлемент с большой поверхностью ртутного зеркала (около 30 см ). Соединение между ними обеспечивалось с помощью мостика, заполненного 3%-ным агар-агаром, содержащим 10% сульфата цинка. Постоянная заданная скорость вращения платино- [c.338]

Стандартный метод оценки мембранных фильтров при их использовании для очистки канализационных стоков, содержащих фекальные кишечные палочки (ФКП), описан в американском стандарте А5ТМ0 3508. Этот метод по существу состоит в сравнении числа ФКП, полученного из данной пробы сточных вод с использованием, с одной стороны, мембранной фильтрации и, с другой стороны, стандартного подсчета по методу высевания на чашки. Установлено, что этот метод применим для оценки любой мембраны, используемой в целях анализа канализационных стоков этот же метод можновприн-цппе применить для многих других испытаний. При проведении данного испытания берутся пять различных необработанных проб воды (четыре из них —пробы искусственно загрязненной воды и одна — проба сточной воды), разбавляют их, если необходимо уменьшить число ФКП до требуемого уровня, и фильтруют через испытуемые мембранные фильтры, причем каждую пробу фильтруют пять раз. Мембраны культивируют в стандартной среде, использующейся для анализа на ФКП (агар М-РС температура инкубации 44,5 °С время инкубации 22— [c.110]

Американское общество по испытанию материалов (ASTM) опубликовало стандартный метод оценки мембранных фильтров для выделения ФКП (Стандарт D 3508), которым можно пользоваться в лабораториях, чтобы убедиться, что применяемые мембранные фильтры вполне пригодны для проведения испытаний на ФКП. Согласно этому стандарту, пять разных необработанных водных проб (четыре из загрязненных исто -ников и одна из сточных вод) пропускают через мембранный материал, причем делают пять повторных операций для каждой пробы, а затем проводят инкубацию на агаре M-F при температуре 44,5 °С. Одновременно пробы этой же воды инкубируют чашечным методом равномерного посева при тех же самых условиях. Сравнивая число подсчетов при повторных операциях, полученных методом мембранной фильтрации, с числом подсчетов в чашечном методе, можно определить степень выделения ФКП на испытываемых мембранных фильтрах. Согласно ASTM, этот метод испытаний особенно полезен для выбраковки тех мембран, которые не годятся для теста на ФКП. Этим стандартом следует пользоваться изготовителям мембранных фильтров для контроля качества их продукции он применим также в программах по удостоверению качества мембранных фильтров. Однако до сих пор изготовители мембранных фильтров не указывают в своей технической документации, что их мембраны были подвергнуты испытаниям на соответствие Стандарту D 3508 ASTM, и не приводят данных, касающихся эффективности их мембранных фильтров по выделению ФКП в соответствующих испытаниях. [c.285]

Первый показатель дает представление об общей обсемененности воды аэробными сапрофитами, поэтому часто называется общим счетом аэробных сапрофитов или кратко общим счетом. Микробное число определяют методом посева на стандартную среду — мясо-пептонный агар (МПА). МПА готовят на мясном бульоне, добавляя на 1 л 10 г пептона, 5 г Na l и 20 г агар-агара, образующего плотный гель. МПА принят в качестве стандартной среды, так как его состав соответствует пищевым потребностям большинства сапрофитов. Посев инкубируют при температуре 37°С в течение 24 ч. Микробное число выражают числом клеток в 1 мл воды. В сточной, природной и водопроводной водах определение проводится одинаково, но при анализе сточных и большинства природных вод из-за высокого содержания в них микроорганизмов требуется предварительное разбавление пробы. [c.99]

Метод определения с использованием солевых сред. Готовят десятикратные разведення исследуемых продуктов в соответствии со стандартным методом. В качестве питательных сред используется молочно-солевой и желточно-солевой агары (сТй. табл. 148). По 0,1 мл исследуемых разведений наносят на поверхность питательной среды в чашки Петри и тшатель1ю растирают по поверхности среды, стерильным шпателем. Чашки с засеянными средами помещают в термостат при температуре 37°С на 24—48 ч. Просматривают посевы на чашках с молочно-солевым или желточно-солевым агаром и из отдельных типичных колоний готовят препараты, окрашивая их но Граму, и il Iipo кoпиpyют. [c.373]

Первый показатель дает представление об общей обсемененности воды аэробными сапрофитами, поэтому часто называется общим счетом аэробных сапрофитов или (кратко) общим счетом. Микробное число определяют методом посева на стандартную среду — мясопеп-тоиный агар (МПА). [c.36]

Диско-диффузионный метод. При определении чувствительности методом диффузии в агар чистую культуру возбудителя засевают газоном на питательный агар в чашке, например, тампоном, смоченном в стандартизованной (10 КОЕ/мл) суспензии микроорганизма. Затем на поверхность агара укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, которые диффундируют в агар, создавая градиент концентрации. На чашку диаметром 90 мм равномерно укладывают не более шести дисков с определенным количеством антибиотика. После инкубирования в термостате измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков и по специальным таблицам определяют степень чувствительности к тому или иному антибиотику (см. цв. вклейку, рис. 13). Поскольку опыт диффузии ставят в стандартных условиях (состав V) количество среды, количество засеваемых микробов, температура и сроки инкубирования, стандартные диски и др.), каждому значению диаметра зоны вокруг диска с ан1Ибиотиком соответствует определенное значение МИК. Исходя из этих значений, для каждого антибиотика рассчитаны величины терапевтического индекса, что позволяет по диаметру зоны определить степень чувствительности к тому или иному антибиотику чувствительные (S), умеренно устойчивые (/) и устойчивые (/ ). К категории S (от англ. sensitive, чувствительный) относят те, для которых использование средних терапевтических доз будет достаточным для трехкратного превышения МИК. В категорию / (от англ. intermediate, промежугочный) относят те микробы, для подавления которых потребуются максимальные терапевтические дозы. Категорию R [c.44]

В цилиндры или лунки каждой чашки вносят равные объемы рабочих растворов стандартного и испытуемого образцов. Основные растворы стандартных и испытуемых образцов готовят в стерильных растворителях с концентрацией 1 мг/мл. Затем из основных растворов в зависимости от применяемого варианта метода диффузии в агар (трехдозного или с построением стандартной кривой) готовят рабочие растворы трех или одной концентраций испытуемого образца и растворы трех или пяти концентраций стандартного образца. [c.213]

Расчет активности и дисперсионный анализ при использовании трехдозного варианта метода диффузии в агар осуществляется в соответствии со статьей Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний (ГФ XI, вып. I, с. 199). В разделе 11.5 данной статьи растворы определенных концентраций стандартного (С) и испытуемого (И) образцов обозначены О и соответственно. [c.214]

Во всех сомнительных случаях и при определении активности стандартных образцов должен использоваться только трехдозный вариант метода диффузии в агар. [c.217]

Зерна ДНК-геля переносят в термостатированную колонку со стеклянным пористым фильтром у дна и промывают несколькими порциями 4 X SS при 60°. Промытые зерна ДНК-агаро-вого геля хранят при 4° в 4XSS . Концентрацию ДНК в геле находят спектрофотометрическим методом после растворения навески геля путем кипячения в 5 М Na 104. Стандартные препараты ДНК-агарового геля содержат обычно 400 у ДНК на 1г сырого агара. I Для гибридизации берут 0,5—1 г ДНК-агара (сырой вес) и смешивают с 1 мл (20—50 у на 1 мл) денатурированной и фрагментированной непосредственно перед гибридизацией раствор фрагментированной ДНК денатурируют нагреванием, быстро охлаждают и доводят концентрацию растворителя с помощью 10 X SS до 4 X SS . [c.114]

Колориметрический метод с титановым желтым i . о, 4i основан на осаждении магния щелочью в присутствии титанового желтого. Последний адсорбируется осадком с появлением окраски (от оранжевой до кирпично-красной), интенсивность которой зависит от концентрации магния. Реакция проводится в щелочной среде при рН>12. Концентрацию магния определяют путем сравнения интенсивности окраски анализируемой пробы с окраской шкалы стандартных растворов магния, имеющих концентрацию от 0,2 до 2 лгг/л Mg2+. Для большей точности шкалы в стандартные растворы вводят стабилизаторы — растворы агар-агара, крахмала, декстрина или желатины. Этот метод отличается достаточной чувствительностью и позволяет определять содержание магния с точностью до 0,5—1 мг л. В присутствии кальция интенсивность окраски усиливается. Гипохлорит в количестве до 0,5 г/л не мешает определению при большем количестве гипохлорита его необходимо разрушать . В присутствии небольших количеств железа и алюминия определение не искажается. При большой концентрации Na l получается нерезкая окраска, поэтому при анализе концентрированные рассолы разбавляют водой в 5 раз" . Если в пробе содержится взвешенная гидроокись магния, то при анализе определяют сумму растворимых и нерастворимых соединений магния. [c.190]

Самым распространенным методом определения антигена и антител является преципитация в агаре (реакция двойной диффузии в геле по Оухтерлони). Преимуществами данной реакции являются относительная простота, высокая специфичность, отсутствие ложноположительных и ложноотрицательных ответов, небольшой расход материалов и возможность определения полноты антигенной идентичности. Недостатками реакции являются низкая чувствительность, длительность получение предварительного ответа через 24 ч, а окончательного—лишь спустя 48—72 ч. Для исследования берут кровь больного в количестве, необходимом для получения 0,3 мл сьшоротки. Реакции ставят на пластинах, в 1% агаре, в котором вырезают лунки для ингредиентов реакции. В качестве тест-системы используют стандартный австралийский антиген и соответствующую специфическую антисьшоротку. Учет реакции проводят через 1—3 дня по появлении дуг преципитации между лунками. [c.248]

Второй наиболее важный электрофоретический метод — это электрофорез в агаровом геле при pH 6,0—6,5 [ПОЗ]. В исходном методе рекомендуется наливать 1%-ный раствор агара в цитратном буфере на стеклянные пластинки размером 22Х Х13 см. Образцы наносят на маленькие кусочки фильтровальной бумаги, которые помещают в щели, вырезанные в агаровом геле, или просто накладывают на поверхность геля, и после того, как белки проникнут в гель, начинают электрофорез. Шнейдер [1141] описал метод электрофореза на предметных стеклах в агаровом геле, забуференном цитратом. Образцы наносят на гель в виде круглого пятна. Кроме того, на каждую пластинку следует наносить стандартный гемолизат (содержащий, как правило, НЬАЗ), поскольку положение компонентов варьирует в зависимости от величины электроэндосмоса. При перемещении к катоду гемоглобины располагаются в следующем порядке НЬР> НЬА>НЬ8>НЬС. Та же закономерность наблюдается и в отношении растворимости гемоглобинов при pH 6,0. Основное преимущество этого метода электрофореза состоит в том, что он позволяет отделять НЬС от НЬЕ и НЬ5 от НЬВ, а также определять малые количества НЬА в присутствии НЬР. Многие мутантные виды гемоглобина (О, В, Е, О, I [c.322]

Разливают раствор во флаконы с крышками по 20—40 мл и хранят при 4°С. Для иммунодиффузии и некоторых модификаций ИЭФ вместо агарозы можно использовать агар (см. разд. 4.1.4, п. 2). Для этого -готовят 1,0—1,5%-ный (вес на объем) раствор агара в PBS или 0,85%-ном растворе Na l с 3% ПЭГ. Однако удобнее приготовить стандартный агарозный гель, -который можно использовать при осуществлении любого метода. Агароза хорошо растворима, легкоплавка, не застывает при 56 °С, а при охлаждении быстро превращается в прозрачный гель, обладающий при концентрации 1 % достаточной прочностью. Подвижность крупных молекул зависит от концентрации геля. [c.201]

Количество антител или антигенов, смешиваемых с агаром подбирают таким образом, чтобы образовались кольца преципитации, диаметр которых можно измерить на еще влажной пластине, причем размер кольца вокруг лунки с максимальной концентрацией стандартного антигена (или контрольных антител) по завершении реакции должен быть порядка 1 см. Чувствительность метода можно увеличить, снижая концентрацию реагента, вносимого в агар, и пропорционально уменьшая количества образцов в лунках. При уменьшении количеств взаимодействующих реагентов образуются более бледные кольца преципитации во влажрюм агаре. Можно увеличить контрастность, если окрасить отмытые и высушенные иластины. Таким способом можно повысить чувствительность метода определения антигена до 1 мкг/мл. [c.210]

Главное преимущество описанного метода количественного определения антигенов по сравнению с РИД —это быстрое получение результатов. Однако ракетный ИЭФ применим только к тем молекулам, которые обладают средним или сильным отрицательным зарядом при pH 8,6, что исключает возможность определения иммуноглобулинов, для которых нужно подбирать специальные электролиты и агар. Отрицательный заряд исследуемых иммуноглобулинов можно увеличить кар-бамилированием как опытных, так и стандартных сывороток. Это достигается следующим образом [13] [c.225]

М КС1 и 0,015 М Mg b). Полноту насыщения контролируют, определяя наличие антител в надосадочной жидкости методом двойной диффузии в агаре (А. И. Гусев, 1968) или по реакции кольцепреципитации. Готовые сэндвич-сорбенты суспендируют в стандартном буфере из расчета 5 мг/мл. Сэндвич-сорбенты рекомендуется готовить небольшими порциями, рассчитанными на 1— [c.295]

При подсчете микроорганизмов с помощью мембранных фильтров в зависимости от различных условий роста для данной разновидности микробов могут быть получены либо более низкие, либо более высокие, либо те же результаты, что и при подсчете с использованием чашечного метода с агаром. Даубнер и Петер [57] в обстоятельном обзоре замечают, что число микроорганизмов, подсчитанных на мембранах, больше, чем на чашках. Однако Браун [40] показал, что для чистых культур Е. oli метод мембранных фильтров дает постоянно более низкие значения, чем стандартный чашечный метод, и что результаты подсчетов зависят от штамма (табл, 9,2), В этих опытах мембранные фильтры не были токсичными, но затруд- [c.248]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология