АТФаза АТФаза

Особое место среди них занимают ионные насосы (транспортные АТФазы) — белки, способные за счет энергии гидролиза АТФ переносить одно- и двухвалентные катионы (или анионы) через клеточные и внутриклеточные мембранные структуры против градиента концентрации. Так, Са-АТФаза саркоплазматического ретикулума (СР) регулирует процессы сокращения-расслабления в мышцах разных типов, аккумулируя Са2+ из цитоплазмы внутрь СР. [c.358]

Реактивы для определения активности Са—АТФазы. [c.363]

ИССЛЕДОВАНИЕ РЕГУЛЯТОРНЫХ СВОЙСТВ Са АТФазы [c.358]

Случай 3 фермент-субстратная реакция приводит к изменению pH среды. Пример — гидролиз АТФ митохондриальной Н+АТФазой. Изменение pH среды можно с помощью подходящего индикатора преобразовать в изменение оптической плотности в области длин волн, характерных для данного индикатора. На рис. 2 Б приведена последовательность границ седиментации полосы Н+АТФазы в присутствие субстрата Mg-АТФ и рН-индика-тора нейтральный красный . В обоих секторах полосовой ячейки находились и субстрат, и индикатор. [c.179]

АТФазы и Mg—АТФазы расчет энергии активации [c.364]

Миозин, будучи АТФазой, относится к числу так называемых энергопреобразующих ферментов, так как при его непосредственном участии осуществляется трансформация энергии химических связей в механическую работу. Для ферментов такого типа характерна тесная связь катализа с конформационными перестройками. За счет этога возможна регуляция активности фермента путем воздействия на группы, не входящие непосредственно в активный центр, а также при воздействии на него веществ, влияющих на конформацию белка. Совершенно очевидно, что субстрат (АТФ) должен в большинстве случаев оказывать защитное действие, стабилизируя структуру в области активного центра. [c.398]

При работе с мембранными препаратами Са—АТФазы СР целесообразно поставить следующие эксперименты [c.362]

Ка+К+-АТФаза АТФаза митохондрий [c.249]

В то же время нельзя не учитывать роль Н+-АТФазы, откачивающей ионы Н+ из клетки, в борьбе с закислением цитоплазмы, тенденция к которому всегда существует в бактериях-анаэробах, сбраживающих нейтральные сахара до кислых конечных продуктов. Последняя функция присуща также и Н+-АТФазе плазмалеммы растений и грибов, которая активируется при падении цитоплазматического pH ниже 7,0. По-видимому, при кислых pH не генерация Д(яН для совершения осмотической работы, а откачка протонов становится ведущей функцией этой Н- -АТФазы. [c.128]

ФИТЦ — флуоресцентная метка, ковалентно модифицирующая аминогруппы белка. Максимум возбуждения ФИТЦ — 490—495 нм, максимум флуоресценции — 525 нм. Обработку препаратов Са—АТФазы данной флуоресцентной меткой проводят в среде, содержащей [c.366]

ООО, 37 ООО, 25 000, 21 ООО и некоторые другие. Большинство этих полос соответствует различным фрагментам тяжелых цепей. Следует обратить внимание на то, что, несмотря на наличие разрывов в полипептидных цепях, активность тяжелого меромиозина как АТФазы в полной мере сохраняется. АТФазную активность определяют так же, как и для миозина (с. 393). [c.392]

Анализ инактивации Са—АТФазы ретикулума НБД-хлоридом [c.362]

Здесь Е — Са—АТФаза, Ь — лиганд (АТФ или АДФ) /С д — кажущаяся константа диссоциации комплекса фермент — лиганд (ЕЬ), а к1 — константа скорости инактивации фермента. Считая, что скорость образования комплекса ЕЬ значительно выше скорости инактивации фермента, убыль немодифицированной формы фермента мож но описать следующим уравнением [c.364]

Для определения константы скорости инактивации Са—АТФазы НБД-хлоридом проводят модификацию 5Н-групп в той же среде, которая используется для определения кинетических характеристик 5Н-групп (с. 360). Реакцию начинают добавлением НБД-хлорида. По ходу реакции каждые 0,5—5 мин в зависимости от условий реакции отбирают аликвоты объемом 20—50 мкл и вносят их в 1 мл среды для определения активности Са—АТФазы (с. 359). Пробы инкубируют 1— [c.363]

При исследовании влияния различных веществ на скорость инактивации Са—АТФазы их вносят в среду для модификации 8Н-групп в нужных концентрациях (с. 360). [c.363]

Измерение констант скорости инактивации Са—АТФазы НБД-хло-ридом в присутствии разных концентраций лигандов (например, АТФ или АДФ) проводят, как описано выше. Расчет значений /С д возможен по схеме реакции инактивации, согласно которой с ингибитором может взаимодействовать фермент, свободный от лиганда (схема справедлива в случае Са—АТФазы и НБД-хлорида) [c.363]

Для получения графика температурной зависимости активности Са—АТФазы определяют линейность ферментативной реакции во вре- [c.364]

В окружающей среде, характерным для работы данных насосов в норме (высокое сродство в пресно воде, низкое — в морской). Другие проблемы адаптации к солсг ости, связанные, например, с переходом рыб из пресной воды в соленую или обратно, требуют выработки различных функциональных вариантов солевых АТФаз в процессе акклимации. Так же как и при эволюционной адаптации, ключевыми изменяемыми параметрами являются 1) сродство к Ма , 2) специфичность в отношении противоионов и 3) полярность все эти признаки специфичны для АТФаз организмов, адаптированных соответственно к пресной или к морской воде. [c.165]

На примере миозиновой АТФазы рассматривается случай химической модификации с помощью некоторых сульфгидрильных реагентов, доказывается участие SH-rpynn в регуляции активности миозина (SH-группы непосредственно в активный центр этого фермента не входят), а также устанавливается важная роль гидрофобных взаимодействий в осуществлении регуляторного влияния на АТФазную активность миозина. Демонстрируется также стабилизирующее действие АТФ на структуру активного центра миозина. [c.398]

Поскольку препараты СР обладают не только Са-зависимой, но и Mg-зaви имoй АТФазной активностью, необходимо помимо общей АТФазной активности в соответствующие моменты времени определить Mg-зависимую АТФазную активность, которая измеряется в отсутствие добавки в среду инкубации СаСЬ. Активность Са-АТФазы рассчитывается как разность между общей и Mg-зaви имoй активностью. [c.363]

Активация миозиновой АТФазы может быть также достигнута путем внесения в среду инкубации неполярных или слабополярных органических растворителей, что свидетельствует о важной роли гидрофобных взаимодействий в осуществлении регуляции активности миозина. [c.398]

Анализ реплик замороженных сколов мембран саркоплазматического ретикулума, предварительно обработанных ванада-том, показал, что на выпуклых полумембранах (см. рис. 16) возникают своеобразные вмятины, или углубления. Создается впечатление, что полипептид АТФазы был глубже утоплен в липидный матрикс. В то же время с помощью негативного окрашивания мембран установлено, что ножка АТФазы (см. рис. 16) после обработки саркоплазматического ретикулума ванадатом становится короче и основная часть фермента, выступающая в цитоплазму, локализуется ближе к мембране. Эти данные косвенно свидетельствуют о том, что при кон-формационном переходе АТФазы, связанном с изменением сродства к Са +, происходит ее перемещение в глубь мембраны. [c.61]

Хотя кинетические аспекты Са-АТФазы исследованы достаточно детально, полный механизм функционирования фермента может быть установлен лишь на основании знания его первичной структуры, во многом детерминирующей более высокие уровни организации белка. Работу по выяснению первичной структуры Са-АТФазы саркоплазматического ретикулума скелетной мышцы путем анализа аминокислотных последовательностей отдельных фрагментов фермента осуществляли в течение ряда лет в нескольких группах США, Канады и Великобритании и ученые, казалось бы, были совсем близки к решению поставленной задачи. Из 1017 аминокислотных остатков, составляющих молекулу АТФазы, в общую последовательность не было включено лишь 180 аминокислот (G. Allen et al., 1980). Область белка с неустановленной первичной структурой являлась крайне [c.64]

Иную роль играют Н+-АТФазы плазматических мембран некоторых типов клеток в почках и эпителии мочевого пузыря. Они участвуют в трансклеточном переносе кислотных эквивалентов. Для выполнения этой функции также необходим переход Дгр АрН. В случае Н+/К+-АТФазы слизистой желудка, тоже специализированной на функции транспорта кислотных эквивалентов, проблема решается за счет электронейтрального эквивалентного обмена Н+ на К+. [c.128]

М) поступают ионы кальция, вызывающие различные биореакции, и в том числе сокращение гладких мыщц сосудов (рис. 7). Нормальный обратный отток отработавших ионов кальция против фадиента концентраций обеспечивается ферментом кальций-АТФазой (кальциевым насосом, использующим энергию АТФ, получаемую по реакции Enz +АТФ Enz-Ф + + АДФ + Е). При нарущениях их обратного транспорта из клетки или при слишком интенсивном их поступлении внутрь ее возникает гипертония, увеличивается нафузка на сердечную мышцу, что может привести к инфаркту миокарда. Дигидропи-ридины (ДГП) взаимодействуют со своими рецепторами (ДГП-рецепторы), которые, по-видимому, расположены в непосредственной близости к кальциевым каналам и блокируют последние. Это приводит к резкому уменьшению поступления ионов кальция в клетку и, таким образом, к расслаблению мышцы кровеносного сосуда, снижению давления и облегчению работы сердца при ишемической болезни и инфарктах. [c.127]

После получения меченных ФИТЦ препаратов СР определяют количество включенной метки. Для этого измеряют оптическую плотность образца, содержащего модифицированный белок, при 490 нм и рассчитывают концентрацию ФИТЦ, используя коэффициент молярной экстинкции метки, равный 64-10 М см . Для учета вклада светорассеивания в качестве контроля используют раствор везикул СР той же концентрации по белку, но не обработанных ФИТЦ. После этого рассчитывают включение метки в белок Са—АТФазы, зная, что молекулярный вес фермента равен 100 000, а содержание белка Са— АТФазы в препаратах легкой фракции СР составляет 807о- Для приведенных условий обработки включение метки составляет 1 моль/моль Са—АТФазы. [c.366]

Удобным объектом для изучения свойств мембранных ферментов является Са-АТФаза (КФ 3.6.1.38) СР скелетных мыщц кролика, поскольку содержание этого белка в легкой фракции мембран ретикулума достигает 80—90% выделяемые препараты СР стабильны при хранении и имеют постоянный белковый и фосфолипидный состав. Цель работы — знакомство с методическими подходами к изучению взаимодействия мембранных ферментов с субстратами и регуляторами, к анализу конформационной подвижности мембранных белков, а также характера и роли белок-липидных взаимодействий в биологических мембранах. [c.358]

Реакцию модификации 5Н-групп Са-АТФазы препаратов ретикулума НБД-хлоридом проводят в среде следующего состава 100 мМ КС1, 1 мМ ЭГТА, 30 мМ имидазол (pH 7,0), белок СР 0,2—0,3 мг/мл, [c.360]

Предлагаемая схема постановки эксперимента позволяет исследовать также влияние на конформационное состояние мембранного фермента Са—АТФазы различных мембранотропных соединений — локальных анестетиков, фармакологических агентов, органических растворителей и т. п. [c.362]

Бессонов В. А, Болдырев А. А., Ко Чже Чжун и др. Na, К-АТФаза температурная зависимость активности при гидролизе разных субстратов//Вестн. Моск. ун-та. Сер. биол. 1977. № 4. С. 17. [c.367]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология