Хроматография микропрепаративная

Анализ ферментативных гидролизатов белков. В 1957 г. Ингрэм [61 впервые показал, что двухэтапным разделением с помощью хроматографии и электрофореза на бумаге можно анализировать сложные пептидные смеси, ферментативные гидролизаты и т. п. Такой анализ выявляет самые незначительные различия, с которыми можно встретиться, например, при изучении видовой специфичности или в других сравнительных исследованиях. Метод отпечатков пальцев можно назвать одним из важнейших методов современной биохимии, молекулярной биологии и иммунохимии, так как он позволяет выделить в чистом виде определенный пептид или провести микропрепаративное разделение сложной смеси. [c.103]

Классические методы исследования полимеров — светорассеяние, седиментация, осмометрия, вискозиметрия и другие сталкиваются с существенными трудностями при анализе разветвленных и неоднородных по составу полимеров. Еще более сложен, а зачастую и невозможен анализ этими методами смесей таких полимеров с линейными полимерами. Подобные смеси часто возникают при синтезе сложных полимерных систем — блоксополимеров, привитых сополимеров и разветвленных гомополимеров, когда наряду с основным продуктом получаются соответствующие линейные гомополимеры. Сочетание ГПХ с классическими методами анализа полимеров и с другими хроматографическими методами (адсорбционной и пиролитической газовой хроматографиями) позволяет проводить анализ и таких сложных систем. При этом адсорбционную хроматографию можно с успехом использовать в тонкослойном варианте (ТСХ), что позволяет осуществлять качественный и количественный анализ структурной и химической неоднородности фракций, полученных микропрепаративным ГПХ-фракционированием. С помощью пиролитической газовой хроматографии (ПГХ) можно находить брутто-состав полимеров, а классические методы дают сведения о таких средних макромолекулярных характеристиках, как характеристическая вязкость, среднемассовая и среднечисленная молекулярные массы. [c.230]

Для предварительного разделения пептидов на фракции часто применяют так называемый четырех- или пятикамерный электрофорез. Он позволяет отделить основные, кислые н нейтральные пептиды друг от друга. Каждую из фракций можно подвергнуть затем разделению яри помощи ионообменной хроматографии, микропрепаративным электрофорезом на бумаге или противоточным распределением, ограничиваясь при этом несколькими миллиграммами вещества. В качестве примера представлена схема разделения химотрипсиногена, проведенная Шор-мом с сотрудниками (см. схему на стр. 517). Прекрасные результаты дает метод Хирса, Мура и Штейна— автоматическое разделение пептидов на смоле Дауэкс-50. Строение пептидов, полученных в результате разделения, устанавливают. описанными выше методами. [c.519]

В качестве аналитического или микропрепаративного метода в последнее время используют хроматографию в тонком слое. [c.354]

Этот новый метод объединяет в себе ряд достоинств хроматографии на бумаге и адсорбционной хроматографии. При хроматографии в тонком слое адсорбента, нанесенном на стеклянную пластинку, так же как и при хроматографии на бумаге, удается быстро разделить небольшие количества смесей, причем на одной пластинке можно одновременно хроматографировать несколько образцов. Вместе с тем хроматография в тонком слое имеет по сравнению с хроматографией на бумаге ряд преимуществ. К ним относятся короткое время проявления (10—30 мин), образование сравнительно небольших, отчетливо различимых пятен и простота оборудования,-Большая емкость тонких слоев адсорбентов позволяет применять этот вид хроматографии и для микропрепаративных целей. Для обнаружения пятен, помимо способов, применяемых в хроматографии на бумаге, можно благодаря большей устойчивости неорганических адсорбентов использовать и ряд других методов. [c.365]

Микропрепаративная тонкослойная хроматография [c.368]

По сравнению с хроматографией на бумаге хроматография в тонких слоях значительно удобнее для проведения микропрепаративных работ. [c.368]

ПРОВЕДЕНИЕ ХРОМАТОГРАФИИ НА БУМАГЕ В МИКРОПРЕПАРАТИВНОМ МАСШТАБЕ [c.474]

Проведение хроматографии на бумаге в микропрепаративном масштабе 477 [c.477]

ЛИЧНЫХ конструкций простейшими из них являются полые стеклянные и-образные трубки. На рис. 9.9 изобра-жена стеклянная ловушка, применяемая в препаративном хроматографе [304]. Для микропрепаративной хроматографии эффективно использование капиллярных колонок. На К)рупных установках применяют многоступенчатое улавливание с последующей доочисткой газа-носителя и его циркуляцией. [c.261]

Микропрепаративная хроматография. Подлежащий фракционированию материал наносят на бумагу Ватман 3 или Ватман 3 ММ вдоль стартовой линии, длина которой не должна превышать 20 см. Максимально можно наносить 3—4 мг на 10 см. По окончании хроматографии хроматограмму высушивают, отрезают с обеих сторон полоски бумаги шириной 0,5 см и окрашивают их для того, чтобы установить положение зон, которые должны быть элюированы (см. фиг. 17) затем вырезают эти зоны и элюируют фракции. [c.191]

Использование сравнительно небольшого диаметра колонки и значительной длины (до 20 м и более) является характерным для микропрепаративной хроматографии. Известно применение для этой цели и капиллярных колонок длиной 50—60 м [219]. [c.255]

Рис. П1.8. Микропрепаративное улавливание отдельных фрак> ций элюата в охлаждаемом жнд> КИМ азотом стеклянном капнлля> ре и осуществление направленных химических превращений сконденсированных веществ а — сочленение стеклянного капилляра до 1,5 мм) с обогреваемым штуцером выходной линии хроматографа б —г — введение в капилляр раствора реагента, образование и извлечение реакционной смеси

Стоимость спектрометра, приспособленного для работы в он-лайновом режиме, как правило, примерно в десять раз превыщает стоимость предназначенного для этой цели газового хроматографа. Кроме того, для надежной эксплуатации системы хроматограф/спектрометр/компьютер требуется несравненно более высокая квалификация обслуживающего персонала, чем при использовании отдельных хроматографов. Все это препятствует распространению в ближайшем будущем он-лайновых систем подобного рода. Поэтому, несмотря на все преимущества он-лайновых систем и дальнейшее техническое совершенствование приборов, использование измерительной техники в офф-лайновом режиме нельзя, по-видимому, считать утратившим актуальность. Сочетание микропрепаративной техники с соответствующими методами подготовки образцов, как и прежде, остается актуальным, а зачастую и просто необходимым, в особенности когда требуется идентифицировать всего лишь несколько пиков в сложной смеси или провести надежную идентификацию и выполнить структурное исследование анализируемых соединений с одновременным привлечением нескольких спектральных методов с целью получения наиболее полной информации. Так, масс-спектрометрия дает возможность сделать выводы о молекулярной массе и структурных элементах исследуемого соединения с помощью ИК-спектроскопии осуществляют отнесение функциональных групп УФ-спектроскопия предоставляет информацию о я-электронной системе в молекуле, а методы ядерного магнитного резонанса позволяют получить сведения о строении молекул и их стереохи-мических характеристиках. [c.248]

Микропрепаративную хроматографию на колоннах диаметром 5—15 мм широко применяют для разделения сложных природных и промышленных смесей для идентификации компонентов и изучения их свойств. [c.199]

В микропрепаративных методах ввод жидких проб аналогичен таковому в аналитической хроматографии и производится шприцем в поток газа-носителя вблизи входа в колонку. [c.48]

Идентификацию соединений проводили методами. масс-спектро-метрии. ЯМР- и ИК-спектроскопии в сочетании с хроматографическими методами. Из продуктов реакции были выделены ди.мер (перегонкой в вакууме) и тример (микропрепаративным фракционированием на гель-хроматографе). Спектральными методами бы- [c.39]

Как и при разделении производных нуклеиновых кислот с помощью колоночной ионообменной хроматографии [10], анализируемые растворы должны быть весьма разбавленными если концентрация индивидуальных веществ превышает 0,01—0,02 М, то ионообменник в точке нанесения может оказаться перегруженным . В результате пятна после разделения окажутся вытянутыми. Для аналитической работы лучше всего использовать концентрации от 0,0005 до 0,005 М. Для микропрепаративных исследований (с несколькими миллиграммами вещества) рекомендуются концентрации от 0,005 до 0,02 М. Растворы наносят на пластинку в виде полоски или нескольких пятен (близко друг к другу). Простое приспособление [19] позволяет наносить образцы в виде одинаковых полосок, не повреждая поверхности слоя. Перед хроматографией зону нанесения образца высушивают током воздуха без подогрева. [c.38]

Методы переноса вещества с пластинки на бумагу и непосредственной экстракции можно использовать для элюирования микропрепаративных количеств нуклеотидов. Во многих случаях желательно выделить нуклеотиды в обессоленном виде. Для этой цели используют летучие буферные растворы или же разбавленные кислоты и аммиак, если нуклеотид устойчив к действию кислоты или щелочи. Большинство нуклеотидов можно количественно элюировать 0,5 М карбонатом аммония с pH 8,6. Концентрация используемого для элюирования буфера зависит от прочности связывания нуклеотидов с НЭИ-целлюлозой. Нуклеотиды можно элюировать при О—4°. При экстракции веществ методом переноса [6] элюирование производят в направлении, перпендикулярном направлению хроматографии. Пластинки в ходе элюирования можно высушивать и, просматривая в УФ-свете, следить за перемещением вещества. Для ускорения процесса часть слоя, на которой уже нет вещества, удаляют, выскребая его лезвием безопасной бритвы, и продолжают элюировать оставшуюся более короткую часть слоя. [c.41]

Микропрепаративное разделение (до 0,1—0,2 см жидкой смеси за цикл) можно осуществить и на обычном аналитическом хроматографе практически без особых переделок. В термостат хроматографа помещают хроматографическую колонну диаметром около 12—15 мм. У выхода из колонны устанавливают делитель потока, который делит выходящий из колонны поток газа на две части одна из них, как и прежде, подается иа детектор, а другая направляется к распределителю фракций. В качестве распределителя можно использовать обогреваемый многоходовой кран. В простейшем случае можно обойтись и совсем без распределителя, надевая на выходное отверстие в нужный момент (согласно показаниям детектора) ловушку для сбора соответствующего компонента. [c.375]

Устройство для микропрепаративного выделения веществ, разделенных на аналитическом газовом хроматографе. [c.73]

Лунский М.Х., Шляхов А.Ф. - Зав. лаб., 1976, 42. № 9, 1044-1050. Эффективность улавливания фракций в микропрепаративной газовой хроматографии. [c.48]

Если электрофорез и хроматографию на бумаге можно отнести к микропрепаративным методам, то метод разделения смеси пептидов с помощью ионообменной хроматографии следует, пожалуй, считать макропрепаративным. Его главное преимущество заключается в том, что он позволяет обрабатывать большие количества материала и получать несомненно большие выходы фракций. Применение при ионообменной хроматографии летучих буферов дает возможность избежать трудоемкой процедуры обессоливания, которая осложняла ранее предложенные методики [49, 92]. Большим достижением в области ионообменной хроматографии является введение сферических смол. Их применение способствует увеличению скорости потока фракционируемых веществ через колонку и значительно сокращает продолжительность препаративного разделения. Сферические смолы в автоматических аминокислотных анализаторах обеспечивают воспроизводимую сравнительную хроматографию пептидов с высокой разрешающей способностью, т. е. позволяют автоматически проводить анализ методом отпечатков пальцев . [c.38]

Принципиальными отличиями эксклюзионной хроматографии от других вариантов являются заранее известная продолжительность анализа в конкретной используемой системе, возможность предсказания порядка элюирования компонентов по размеру их молекул, примерно одинаковая ширина пиков во всем диапазоне селективного разделения и уверенность в выходе всех компонентов пробы за достаточно короткий промежуток времени, соответствующий объему У . Хотя данный метод применяют, главным образом, для исследования ММР полимеров и анализа макромолекул биологического происхождения (белки, нуклеиновые кислоты и т.д.), указанные особенности делают его чрезвычайно перспективным для анализа низкомолекулярных примесей в полимерах и предварительного разделения проб неизвестного состава. Получаемая при этом информация существенно облетает выбор наилучшего варианта ВЭЖХ для анализа данной пробы. Кроме того, микропрепаративное эксклюзионное разделение часто используют в качестве первого этапа при разделении сложных смесей путем комбинации различных видов ВЭЖХ. [c.42]

ВОДЯТ, приближая раскаленную проволоку к краю пластинки. Отдельные адсорбционные зоны в случае закрепленного слоя вырезают шпателем, а в случае незакрепленного слоя отсасывают при помош,и водоструйного насоса и специальной трубки, изображенной на рис. 340. Вещества элюируют подходящим растворителем. Фракции, полученные при микропрепара-тивной тонкослойной хроматографии, бывают, как правило, относительно более чистыми, чем при микропрепаративном разделении веществ на бумаге, так как в последнем случае они часто загрязняются веществами, которые экстрагируются из самой бумаги. [c.369]

Хроматографическое поведение различных продуктов расш епления нуклеиновых кислот в данном растворителе можно предсказать с некоторой точностью из физических данных. Рандерат [73] считает это суш ественным преимуш еством аналитической ионообменной хроматографии в тонком слое по сравнению с распределительной и адсорбционной хроматографией. Рандерат [73] указал на то, что метод ХТС на модифицированной целлюлозе можно также использовать для микропрепаративного разделения. [c.447]

Метод микропрепаративной газовой хроматографии в сочетании с УФ-спектроскоппей [15] позволил отнести большинство неидентифицированных углеводородов к тому или иному структурному типу и подтвердить данные хроматографии на капиллярной колонке. Микропрепаративпую хроматографию ароматических углеводородов проводили на приборе Цвет-4 . Использовали колонку длиной 2 м и диаметром 3 мм с 20% жидкой фазы SE-30 на хроматоне при линейном программировании температуры со скоростью 5° С/мип от 100 до 250° С. Раствор пробы в бензоле объемом 10 мкл вводили в испаритель, а элюируемые из колонки фракции углеводородов улавливали в металлических трубках диаметром 2,5 мм. Углеводороды затем вымывали изооктаном и исследовали па УФ-спектрофотометре. [c.161]

В области разделения малых молекул с помощью аналитической ЖХ градиентное элюирование стало ценным средством при исследовании сложных смесей или групп соединений с неизмеримой хроматографической полярностью. Успехи приборостроения, в частности создание систем подачи растворителя и систем смешения, совершенствование конструкции детекторов, а также контроль работы приборов на основе микропроцессоров сделали возможным высокий уровень воспроизводимости в схемах разделения с непрерывным градиентом. Микропрепаративное ЖХ-разделение, выполняемое на аналитическом оборудовании, может реализовать эти возможности. Однако при переходе в область препаративной и макропрепаративной хроматографии значительно уменьшаются возможности создания сложных градиентов и контрольных устройств, пригодных для работы с большими объемами и высокими скоростями подвижной фазы, которые бы воспроизводили точно градиенты, характерные при работе с аналитическими приборами. В таких ситуациях обычно рекомендуют использовать подходящую последовательность изокра-тического и ступенчатого градиентного элюирования, если оно вообще возможно (см. разд. 1.6.2.2.5). Выгоды такого подхода [c.67]

В настоящее время хроматографические методы в значительной степени вытеснили все другие методы фракционирования липидов в аналитическом и микропрепаративном масштабе. Для разделения сложных смесей липидов на отдельные классы соединений использовали адсорбционную и распределительную хроматографию на колонках с силикагелем, на целлюлозных фильтрах, импрегнированных силикагелем, и на бумаге из стекловолокна. Распределительная хроматография с обращенными фазами использовалась для разделения членов винилогомологического ряда на гидрофобизованной колонке или на гидрофобизованной бумаге. Газовую хроматографию использовали в виде распределительно-хроматографического варианта в первую очередь для разделения метиловых эфиров жирных кислот. Разделение смеси липидов по степени ненасыщенности можно осуществить путем хроматографического разделения на силикагеле комплексных ртутноацетатных соединений ненасыщенных липидов. Для выделения кислот и для фракционирования сильно полярных липидов была использована ионообменная колоночная и ионообменная бумажная хроматография. Методом хроматографии на колонках с мочевиной или на бумаге, пропитанной мочевиной, можно отделить жирные кислоты с прямой цепью от кислот с разветвленной цепью. Эффект разделения основан на образовании соединений включения неразветвлеиных жирных кислот с мочевиной. Разли шые хроматографические методы разделения липидов описаны в многочисленных обзорах [23, 86, 96, 100]. [c.144]

При синтезе сложных полимерных систем, таких как блоксополимеры, привитые сополимеры, разветвленные гомополимеры, наряду с основным продуктом, который характеризуется полидисперсностью по молекулярной массе и составу (типу ветвлений), получаются и соответствующие линейные гомополимеры. До настоящего времени исследование таких полидисперсных систем представляет чрезвычайно сложную и трудоемкую задачу и часто, вообще не может быть выполнено с использованием классических методов анализа полимеров. Существенные результаты в этой области могут быть достигнуты путем комбинированного использования хроматографических методов анализа полимеров ГПХ для микропрепаративного фракционирования полимеров с определением гидродинамического радиуса полученных фракций, ТСХ для качественного и количественного анализа структурной и химической гетерогенности фракций (см. гл. И1), пиролитической газовой хроматографии (ПГХ) для определения их брутто-состава. При этом метод ГПХ не имеет себе равных по чувствительности анализа (для него требуютс] >1икрограмА10Е].10 1хОлп-чества вещества) и точности определения состава сополимеров, с соотношением компонентов менее 1/20—1/50 [И]. [c.247]

Микропрепаративная или полупрепаративная хроматография используется при однократной дозе менее 1 мл. Разделение проводится на колонках диаметром до 10—15 мм, размещаемых в термостате аналитического хроматографа. Многие из [c.253]

Препаративная хроматография может быть разделена на микронрепаративную и лабораторную препаративную [290,292]. Микропрепаративная хроматография осуществляется на колонках с внутренним диаметром до 10—12 мм и, следовательно, может быть проведена на обычном хроматографе, оснащеннолг дополнительными блоками. Размер пробы измеряется миллиграммами. [c.251]

Важным фактором, влияющим на четкость разделения, является размер частиц сорбента. Уменьшение раз-мера зерен, способствуя повышению эффективности, влечет за собой рост гидравлического сопротивления потоку, поэтому з зависимости от конкретной задачи, а также размеров колонкн используют сорбенты различного зернения. В микропрепаративной хроматографии размеры частиц отвечают применяемым з аналитической хроматографии, при использовании более широких колонок обычным является зернение 0,5—1 мм и 1—2 мм. Как видно из рис. 9.6 [289], при увеличении пробы влияние зернения твердого носктеля на эффективность колонки диаметром 9,6 мм (10% 5Е-30 на стерхамоле) становится менее заметным. [c.255]

Преимущество спектроскопии ЯМР состоит прежде всего в возможности предоставлять точную и надежную информацию о тонких структурных различиях, таких, как конформационная изомерия, эндо-экзо- или цис-транс-тоиерш. Наряду с классическими методами сочетания, какими являются ИК-спектро-скопия и масс-спектрометрия, спектры ЯМР предоставляют важную дополнительную информацию для надежной идентификации газохроматографических фракций. Недостаток метода ЯМР состоит в основном в том, что для измерения одного спектра требуется относительно большое количество пробы (50—100 мг), так что для выделения вещества необходимы уже многократные операции микропрепаративной газовой хроматографии. Поэтому к настоящему времени возможности для комбинации спектроскопии ЯМР и газовой хроматографии в он-лайновом режиме представляются маловероятными. [c.272]

Микропрепаративная техника улавливания газохроматографических фракций в растворителе для последующих измерений их УФ- или ЯМР-спектров показана на рис. XI.15. Обогреваемый вывод из хроматографа снабжен конусом для подсоединения к инжекционной игле, которая использовалась в качестве впускного капилляра в приемнике на выходе хроматографа. Иглы могут легко заменяться при отборе любой фракции, что позволяет исключить загрязнение при затяжном элюировании вещества. Подобные меры предосторожности особенно важны при приготовлении образцов для измерения УФ-спектров, поскольку здесь даже следы примесей, поглощающих в УФ-об-ласти, могут в существенной мере снизить информативность спектров. На рис. XI. 16 в качестве примера представлены УФ- [c.273]

В большинстве случаев разделение, достигаемое посредством аналитической ТСХ, можно перевести на микро- или полу-микропрепаративный уровень. Препаративное разделение на тонких слоях чаще всего проводят методами адсорбционной и распределительной хроматографии, тогда как препаративное разделение методом ионообменной или колоночной хроматографии проводится только на колонках. Помимо препаративной тех существуют и другие методы препаративного разделения (например, классическая жидкостная хроматография и особенно высокоэффективная жидкостная хроматография, или хроматография при высоком давлении, см. гл. 4), которые в ряде случаев могут оказаться более эффективными. Методом сухой колоночной хроматографии (СКХ) можно проводить препаративное разделение в таких же условиях, которые применяются при разделении методом ТСХ [36]. Поэтому рекомендуется прежде всего проанализировать достоинства и недостатки различных типов и методов хроматографии и оценить целесообразность их применения для разделения конкретных соединений (устойчивых или неустойчивых, с близкими или значительно различающимися величинами Rf). Выбор метода зависит также от того, какие количества соединений и как быстро необходимо получить. [c.121]

Устройства для нанесения полосок используют прежде вс.его для очистки образцов в микропрепаративном масштабе. Существуют два способа нанесения полосок нанесение слитной цепочки пятен и непрерывное нанесение вещества вдоль движущейся пластинки. Вайденхью-вель [7] описал полуавтоматическое устройство, которое позволяет получить достаточно чистые материалы для последующего анализа либо методом инфракрасной спектроскопии, либо с помощью газовой хроматографии. Чтобы получить четкое разделение, отдельные пятна должны содержать не более 1 мкг вещества. Нанесение пятен через определенные интервалы вдоль стартовой линии обеспечивает высококачественное разделение и позволяет увеличить объем материала при микропрепаративном разделении. Для успешной работы важно, чтобы исходная плотность пробы на стартовой линии была низкой. При разделении На пластинке должна получиться серия четко разделенных полос, однако неравномерное шнесение пятен, ке влияя на разделение, приводит к появлению искаженных полос, которые трудно индивидуально удалить с пластинки. [c.275]