Условия электрофореза

Помимо явлений электрофоретического запаздывания и электрической релаксации на скорость электрофореза может влиять и агрегатное состояние дисперсной фазы. Так, скорость электрофоретического переноса жидких частиц при всех прочих одинаковых условиях электрофореза равна подвижности твердых частиц лишь в частном случае, когда в результате адсорбции поверхностноактивных веществ поверхность капли становится неподвижной, что делает жидкую частицу похожей на твердую. В общем же случае жидкие частицы, обладающие достаточно высокой проводимостью, движутся при электрофорезе значительно быстрее, чем твердые. Это объясняется следующими причинами. Во-первых, трение о поверхность жидкой частицы всегда меньше, чем трение о поверхность твердого шарика таких же размеров, так как капли жидкости могут деформироваться при движении среды. Во-вторых, двойной электрический слой [c.206]

В зависимости от природы жидкости, материала твердой фазы и других условий электрофорез (или электроосмос) может идти в направлении катода и в направлении анода. Направление [c.228]

В лабораторных условиях электрофорез применяют для определения знака заряда коллоидных частиц, наблюдая в различных приборах перемещение золя (суспензии) к тому или иному электроду. [c.78]

Знак заряда фазы зависит от природы жидкости и материала твердого вещества. Другие условия электрофореза (или электроосмоса), например присутствие при- [c.247]

В сыворотке крови здорового человека при электрофорезе на бумаге можно обнаружить 5 фракций альбумины, О -, а,-, 3-, у-глобулины. Методом электрофореза в агаровом геле в сыворотке крови выделяют 7— 8 фракций, а при электрофорезе в крахмальном или полиакриламидном геле—до 16—17 фракций. Следует помнить, что терминология белковых фракций, получаемых при различных видах электрофореза, еще окончательно не установилась. При изменении условий электрофореза, а также при электрофорезе в различных средах (например, в крахмальном или полиакриламидном геле) скорость миграции и, следовательно, порядок белковых зон могут меняться. [c.569]

Парадоксально и то, что ранее [7 интерес к поляризации ДС частиц условиях электрофореза был проявлен лишь постольку, поскольку этот эффект являлся помехой при определении -потенциала. [c.100]

В связи с тем, что в зависимости от строения молекулы могут преобладать либо кислотные свойства карбоксила, либо основные свойства аминогруппы, в водных растворах аминокислот pH среды отличается от 7. Но на кривой титрования аминокислоты имеется значение pH, при котором количество групп ЫНз оказывается точно равным количеству групп — СОО". Следовательно, при этом pH аминокислота существует только в виде биполярного иона и в условиях электрофореза переноса ионов происходить не будет. Такое значение pH называют изоэлектрической точкой (см. табл. 36). [c.374]

В прошлом редко предпринимались попытки вычисления трансляционных коэффициентов трения из электрофоретических измерений, так как, хотя теоретически это всегда осуществимо, трудно определить заряд макромолекулы в условиях электрофореза. Более того, нет оснований считать, что в условиях электрофореза макромолекулы гидродинамически ведут себя так же, как при седиментации и диффузии. [c.97]

Размер пор в геле определяется концентрацией крахмала 720, 1201] и степенью его гидролиза [884]. Было показано 1201], что пройденное белком расстояние т) при одних и тех же условиях электрофореза линейно зависит от обратной величины концентрации крахмала (5) [c.68]

Несмотря на высокую разрешающую способность, электро форез в гелях со свойствами молекулярного сита не нашел ши рокого применения в повседневной клинической практике. Он более трудоемок, чем электрофорез на ацетате целлюлозы или в агарозном геле. К тому же электрофорез в крахмальном или полиакриламидном геле труднее проводить в стандартных условиях. Проблемы стандартизации условий электрофореза в полиакриламидном геле подробно обсуждаются Маурером и Алленом [841]. Разумеется, необходимо сопоставлять стоимость метода с ценностью получаемой с его помощью информации. Основная причина того, что в повседневной практике до сих пор широко используются электрофоретические методы, обладающие ограниченной разрешающей способностью, заключается в следующем пока известна физиологическая роль лишь небольшого числа белков плазмы и те фракции, которые нельзя обнаружить простыми методами, дают мало полезной информации для диагноза. Методы электрофореза с высокой разрешающей способностью имеют исключительно важное значение в исследованиях белков плазмы, и после установления природы и физиологической роли остальных белковых компонентов эти методы, несомненно, займут свое место в клинической практике. [c.333]

Выбору оптимальных условий электрофореза в ПААГ посвящена работа [33]. Имеется компьютерная распечатка 5000 буферных систем для электрофоретического разделения катионов и анионов в диапазоне pH 2,5—11 [35]. На практике используются лишь немногие из этих систем с наиболее типичными pH [119]. Далее описана система, предложенная Девисом [43], несколько модифицированная путем введения 8 М мочевины. [c.44]

Аналогичны процессы разделения в условиях электрофореза. В растворе NH4 I комплекс [Со(ЫНз)б] + за 6 ч продвинулся в конкретных условиях одного из таких экспериментов к катоду на 12,95 см, комплекс [Со(ЫНз)5С1] +— на 9,30 см, а комплекс тpaи -[ o(NHз)4(N02)2]+— на 4,55 см. [c.417]

При электрофорезе в кислой среде на крахмальном или полиакриламидном геле глиадины делятся по подвижности на а-, -, у- и СО-группы, каждая яз к-рых включает неск. белков. Гордеины делятся на С и В группы. Причем малоподвижные белки группы В-это S-бедные П. Глютенины при обычных условиях электрофореза остаются на старте. При двухмерном электрофорезе глиадинов выделено более 50 компонентов, причем разные сорта пшеницы существенно различаются по составу белков, относящихся к П. [c.100]

Для разделения смеси полисахаридов, а также установления их однородности можно использовать электрофорез в боратном буфере на хроматографической бумаге. Поскольку полисахариды в значительной степени отличаются по химическому составу, способности образовывать комплексы с боратами, величине молекулярного веса и растворимости, подвижность их в электрическом поле не одинакова и условия электрофореза для разделения различных смесей не являются стандартными. Например, скорость миграции глюкоманнанов в боратном буфере при pH 9,3 значительно выше, чем глюкуроноксиланов. Эти полисахариды легко разделяются в течение 4—6 ч при напряжении 20—25 в/см. Смесь, состоящая из 4-0-метилглюкуроноарабоксилана, галактуроноарабогалак-тана и арабана, вследствие близких значений подвижности разделяется с большим трудом в этом случае электрофорез занимает [c.50]

Условия электрофореза напряжение 850—700 в, сила тока 8—12 ма, время фракционирования 5—6 ч. После прекращения подачи разделяемой смеси и снятия напряжения протекание буферного раствора по бумаге не прекращалось, в течение суток производили вымывание фракций, сдвинутых под влиянием электрического поля. Как и при хроматографическом разделении, для характеристики фракций применяли спектрофотометрический метод анализа. Результаты псследовачий приведены на рис. 23, е. Они описываются семейством монотонно убывающих кривых приведенных оптических плотностей с удалением пробы от вертикальной линии ввода исследуемой смеси они приближаются к абсциссе в длинноволновой области спектра. Крутизна спада спектральных кривых поглощения света, определяемая величиной отношения 48о/ 56о, для отдельных фракций следующая проба V — 3,2 проба VII — 3,4 проба X — 6,0. Таким образом, отклонение движения потока жидкости от вертикального при электрофорезе увеличивается с переходом от гуминовых кислот к фульвокислотам в связи с большей подвижностью последних в электрическом поле постоянного тока. [c.61]

Это объясняется облегчением условий электрофореза ионов фосфата при наличии макроэлементов по сравнению с условиями переноса ионов фосфата током микрогальваннческих элементов. В неподвижной воде при плотном прилегании друг к другу разнородных металлов эффект действия фосфатов также невелик (ток проходит через малый объем раствора). Циркуляция или перемешивание воды являются важными факторами, так как определяют скорость поступления фосфатов к поверхности металла, а следовательно, и скорость образования защитной пленки. [c.143]

В средах, свободных от воздействия силы тяжести (например, в космосе) вследствие тепловых конвекционных потоков не происходит интенсивного перемешивания разделяемых макромолекул. В реальных условиях электрофорез следует проводить в открытоячеистой матрице для предотвращения конвекции. [c.88]

Более надежным в практическом использовании является метод непрерывного электрофореза, предложенный одновременно и независимо Стрейном [135], Свенс-соном и Браттстеном [54], Грассманом и Ханнигом [136]. По данному методу с целью стабилизации условии электрофореза движение электролита происходит, как правило, в среде пористого наполнителя фильтровальной бумаги, стеклянного порошка, кварцевого песка и т. д. Движение жидкости осуществляется либо благодаря гидростатическому давлению, либо принудительно, с помощью различного рода насосов. [c.70]

Сыворотка крови при pH 8,6 в веронал-мединаловом буфере, при электрофорезе делилась на альбумины, а-глобулины, р-глобулины и у-глобулины. В этих условиях белки заряжены отрицательно и перемещаются к аноду. В тех же условиях электрофореза антибиотики-основания перемещаются к катоду, их положительный заряд обусловлен аминными или гуанидогруппами. При движении к катоду они пересекают все белковые фракции и вызывают деформацию только тех белков, с которыми образуют комплексы. [c.402]

Полученные данные говорят о том, что жидкофазная двуокись кремния непригодна для формовки особо чистых изделий методом электроотливки. Пригодной является лишь парофазная двуокись кремния, из которой получены отливки с объемным весом 1,700 г/см3 и коэффициентом упаковки Si02 выше 8. Оптимальные условия электрофореза были следующие концентрация Si02 в суспензии 69%, рН 6,8—7,0, градиент напряженности электрического поля 10—12 в/см. [c.402]

Зонный электрофорез на бумаге может служить в качестве полезного дополнения хроматографии на бумаге при исследовании углеводов и родственных соединений. Для электрофореза незаряженных соединений используют растворы электролитов, которые образуют с углеводами заряженные комплексы, в частности обратные буферы [461], однако электрофорез проводят также в буферах, содержащих другие анионы арсенит [462], фенилборат [463], германат [464], молибдат [465—467], воль-фрамат [467, 468] и станнат [467], которые дают анионные комплексы с полигидроксильными соединениями. Описано также использование в качестве комплексообразующего агента основного тетраацетата свинца [462], который дает катионный комплекс с углеводами. Результаты изучения условий электрофореза изложены в подробных обзорах Фостера [461, 469] и Вайгеля [467], которые также содержат данные о подвижности большого числа соединений, включая альдозы, кетозы, дисахариды и продукты их восстановления, полиолы, циклиты, метилгликозиды и метилированные производные. [c.74]

Двумерный электрофорез в полиакриламидном геле может быть также использован для локализации участков ДНК, отвечающих 5 - и З -концевым последовательностям и точкам внут-)имолекулярного переплетения ядерной или вирусной РНК 116]. С этой целью продукт гибридизации РНК и ДНК обрабатывают эндонуклеазой S1, специфичной по отношению к одноцепочечным нуклеиновым кислотам, и полученные гибриды комплементарных фрагментов ДНК и РНК разделяют в соответствии с их размерами с помощью гель-электрофореза. Затем в денатурирующих условиях проводят электрофорез во втором направлении, с тем чтобы определить размер образующихся одноцепочечных фрагментов ДНК. Специфические последовательности обнаруживают с помощью блоттинга по Саузерну и последующей молекулярной гибридизации [116]. Одноцепочечные фрагменты ДНК можно легко разделить с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в щелочной среде. Денатурированные образцы подвергают гель-электрофорезу в буфере, содержащем 30 мМ NaOH и 2 мМ ЭДТА [117]. По своему поведению в этих условиях электрофореза такие фрагменты похожи на одноцепочечные фрагменты РНК (разд. 10.5.2). [c.187]

По.местите гель в прибор для электрофореза. Проведите префорез в течение 30 мин или дольше в условиях электрофореза (см. пункт 6). [c.32]

В ранних стадиях исследования было обнаружено, что хотя бы один из двух белков Р ассоциирован с рибонуклеопротеидным комплексом вирионов [25, 58, 257, 259]. По мере совершенствования условий электрофореза в ПААГ стало ясно, что вирион содержит три дискретных белка Р [112, 133, 200], которые обозначили Р1, Р2, РЗ по порядку уменьшения их электрофоретической подвижности в ПААГ (выявленная м. м. 95 000—82 000). На основе анализа рекомбинантов штаммов A/PR/8/34 и А/НК/68 определили, что 1-й сегмент РНК кодирует белок РЗ, 2-й сегмент РНК — белок Р1 и 3-й сегмент РНК — белок Р2 [194, 217], но у штамма A/FPV/Rosto k/34 кодируемые назначения сегментов РНК отличались [242]. Поскольку обозначение Р1—РЗ, согласно номенклатуре, основано на подвижности в геле, а не на функция , белок Р2 одного штамма может быть функционально эквивалентен белку РЗ другого штамма [7]. [c.42]

Для окрашивания белков часто применяют кислотно-основный индикатор бромфеноловый синий. Так как в условиях электрофореза этот краситель непрочно связывается с белками, его часто используют в качестве окрашенного маркера при электрофорезе в полиакриламидном геле в щелочных системах. Кун-кель и Тнзелиус [728] применяли для окрашивания белков после электрофореза на бумаге водный раствор, содержавший 1% хлористой ртути, 0,05% бромфенолового синего и 2% уксусной кислоты. [c.271]

При механической желтухе в плазме больных обнаруживается особый липопротеид (Lp-X), который по своей плотности принадлежит к ЛНП и обладает характерным липидным и белковым составом. Выявление Lp-X на электрофореграмме основано на его миграции к катоду при обычных условиях электрофореза в агаровом геле. Для увеличения катодной подвижности Lp-X пластины агарового геля необходимо выдерживать перед электрофорезом не менее 6 ч [990, 1166]. Надежная локализация этого белка стала возможной благодаря применению специфических антисывороток [1164]. Петек и др. [990] сравнили три различных способа проведения иммунопреципитации. При первом способе антисыворотку помещают в канавки, подобно тому как это делается при иммуноэлектрофорезе по методу Шайдеггера. Во втором способе после электрофореза в геле вырезают круглые лунки для антител на расстоянии 4 мм от лунок для антигена. В обоих случаях время, необходимое для диффузии, составляет 12—16 ч. Второй способ является более экономным с точки зрения расходования антисыворотки. При использовании третьего способа (иммунофиксация) антисыворотку прямо наносят на поверхность геля на расстоянии [c.355]

Зоны, представляющие интерес, вырезают и белок выделяют экстракцией [49, 64] или элюированием в условиях электрофореза [2, 175]. При определении аминокислотного состава приготовленных таким способом образцов обязательно вводят необходимые поправки, учитывающие присутствие акриламид-ного геля [26]. Согласно другому варианту, белки разделяют электрофорезом в блоке акриламидного геля, при этом под действием электрического поля белковые фракции попадают в проточную камеру, откуда и вымываются раздельно потоком элюэнта. Ход элюирования регистрируют с помощью проточного денситометра, элюат собирают на фракционном коллекторе. Недавно разработана методика элюирования белков из системы ПААГ —ДСН в промежуточный гель с использованием восходящего электрофореза [121]. Выход достигается высокий, однако образец может содержать примеси компонентов акриламидного геля и буферной системы. Гели для препаративного электрофореза могут иметь форму столбиков (LKB) или пластин (блоков) (Biorad). Для разделений по описанной методике 1 сп()льзуют различную аппаратуру, выпускаемую фирмами. [c.39]

Оптимальные условия электрофореза для геля, используемого при геномной дактилоскопии, определяются требованиями к информативности получаемых отпечатков ДНК. Если данные необходимы для подтверждения структуры родословной или для окончательного уточнения картины в случае неудачно прошедшей гибридизации, или для сравнения образцов ДНК из разных тканей индивида, то желательно получить информацию о возможно большем числе полос, поддающихся разрешению. Для этих случаев наиболее удобно использовать 1%-ный агарозный гель и вести форез при 2 В/см в течение 48 ч с двумя сменами форезного буфера. Такие условия обеспечивают разрешение полос в диапазоне 2—25 т.п.н. Для сегрегационного йнализа более важно достичь хорошего разделения наиболее высокомолекулярных гиперполиморфных фрагментов. В этом случае следует вести форез в 0,8%-ном геле при 1,5 В/см в течение 72 ч с [c.200]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология