Флуоресценция Флуориметрия

Принципиальная схема типового флуориметра показана на рис. 1.34. Излучение источника 1, выделенное первичным светофильтром 2, попадает на кювету с пробой 3. Возникающее излучение флуоресценции Уф через вторичный светофильтр 4 попадает на фотоэлемент или фотоумножитель 5, где оно преобразуется в электрический сигнал, пропорциональный интенсивности флуоресценции, который усиливается электронным усилителем 6 и измеряется миллиамперметром. При использовании линейного участка градуировочного графика воспроизводимость флуориметрических определений составляет приблизительно 5%. Метод применяют для чувствительного определения очень малых количеств элементов при анализе органических веществ, при определении малых количеств витаминов, гормонов, антибиотиков, канцерогенных соединений, нефтепродуктов и др. [c.97]

При облучении образца УФ-светом возможна флуоресценция молекул, дающая свет с большей длиной волны, который может попадать на детектор и приводить к ошибкам. Наличие флуоресценции у вещества может быть проверено на флуориметре. Чтобы уменьшить количество излучения от флуоресценции образца, можно или поставить фильтр, поглощающий данное излучение, или отнести кювету на максимальное расстояние от детектора. [c.22]

По спектрам поглощения и флуоресценции выбрать подходящие первичный и вторичный светофильтры для измерения флуоресценции на флуориметре. [c.94]

Измеряют интенсивность флуоресценции приготовленных растворов на флуориметре. По полученным данным строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс концентрацию с родамина (мкг), по оси ординат — интенсивность флуоресценции If. [c.94]

Интенсивность флуоресценции, возникающей при облучении некоторых веществ, используют в методе флуориметрии. [c.361]

В методе флуориметрии измеряют не поглощение света веществом, а интенсивность длинноволновой эмиссии. Поэтому в отличие от АСР в этом методе с увеличением интенсивности облучения увеличивается чувствительность, что приводит также к значительному снижению предела обнаружения. В этом случае увеличивается также селективность. Метод модифицируют, меняя растворитель, pH и реагенты, а также длины волн флуоресценции и возбуждающего света. [c.415]

Выполнение работы. Построение градуировочного графика. В 6 мерных колб вместимостью 100 мл вводят пипеткой О (раствор фона), 2, 4, 6, 8, 10 мл рабочего раствора нитрата уранила и мерным цилиндром по 5 мл раствора фосфорной кислоты. Объемы растворов доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Кювету флуориметра ополаскивают соответствующим эталонным раствором, затем наливают его в кювету и измеряют интенсивность флуоресценции 3— 5 раз. В качестве первичного используют светофильтр ФК-1, в качестве вторичного—В-2 (1 = 400—580 нм). По средним значениям интенсивностей строят градуировочный график в координатах интенсивность флуоресценции /ф — концентрация урана с [c.98]

Кислородосодержащие растворители гасят флуоресценцию, и их так же как и элюенты, поглощающие свет в области возбужденного излучения, нельзя применять. Галогенсодержащие растворители (хлороформ и метиленхлорид) должны быть использованы с осторожностью, так как имеют тенденцию ослаблять флуоресценцию. Если в растворителе нет флуоресцирующих веществ, флуориметр может работать в градиентном режиме. Флуориметр меньше, чем другие детекторы, зависит от изменений температуры или давления. Однако уменьшение температуры или увеличение вязкости некоторых растворителей затрудняет флуоресценцию. [c.156]

Флуориметрия (люминесцентный анализ) — определение концентрации вещества по интенсивности флуоресценции, возникающей при облучении вещества ультрафиолетовыми лучами. [c.143]

Фотометрические методы анализа — группа аналитических методов, основанных на поглощении, рассеянии световой энергии определяемым веществом нли же на флуоресценции при облучении УФ-лучами. Различают следующие виды Ф. м. а. Спектрофотометрия, фотоколориметрия, колориметрия, турбидиметрия, флуориметрия. [c.145]

Доступным для использования во внутриаптечном контроле является метод флуориметрии. По характеру флуоресценции кристаллов или растворов можно, например, осуществить идентификацию препаратов некоторых алкалоидов, витаминов и др. Для возбуждения флуоресценции на растворы испытуемых веществ воздействуют ультрафиолетовым излучением с длиной волны 365—366 нм. Некоторые лекарственные вещества сами не флуоресцируют, но при взаимодействии с рядом реактивов образуют флуоресцирующие продукты. [c.249]

Флуориметрия — метод люминесцентного анализа, основанный на измерении спектров флуоресценции. Пределы обнаружения веществ флуориметрическим методом составляют 10 -10%. [c.514]

Метод флуориметрии применяется для определения 8т, Ей, Ос1, ТЬ, Е)у, и, Т1, 8п, РЬ в водных растворах по их собственной флуоресценции. Низкотемпературную флуоресценцию галогенидных комплексов В1(1П), 8Ь(1П), А8(Ш), 8е(1У), Те(1У) используют для высокочувствительного и селективного определения этих элементов. Непереходные элементы, а также лантаноиды определяют по флуоресценции их комплексов с 8-оксихинолином, Р-дикетонами, основаниями Шиффа, азосоединениями, оксифлавонами, родаминовыми красителями и др. органическими реагентами. Разработаны методы определения порфиринов, витаминов, антибиотиков и других органических веществ по их собственной флуоресценции. [c.515]

Флуориметрия — люминесцентный (флуоресцентный) анализ, основанный на флуоресценции веществ, облученных ультрафиолетовым светом, и измерении интенсивности излучаемого ими видимого света. [c.328]

Люминесцентные методы включают в себя исследования с использованием флуоресценции (флуориметрия) и фосфоресценции (фосфориметрия). Наиболее широко люминесцентные измерения используются как методы анализа и контроля за протеканием химических и биохимических реакций, а также для кинетических исследований быстрых реакций электронно-возбужденных молекул. [c.49]

Дальнейшим развитием флуориметрии стал метод спектро-флуориметрии. Взаимосвязь этих методов такая же, как методов колориметрии и абсорбционной спектрофотометрии. В методе спектрофлуориметрии используют более сложное оборудование, что дает возможность регистрировать спектр флуоресценции. Кроме того, можно селективно выбрать определенную длину волны флуоресценции. [c.368]

Выполнение работы. 1. Приготовление стандартных растворов и построение градуировочного графика. В мерные колбы вместимостью 50 мл с помощью пипетки вносят определенные объемы - от I до 5 мл стандартного раствора 2-нафтол-6,7-дисульфокислоты, добавляют по 2 мл раствора NaOH и доводят растворы до метки водой. Перемещивают содержимое колб и поочередно наливают растворы в кювету прибора, ополоснув ее каждый раз тем раствором, который в ней будет находиться. Измеряют интенсивность флуоресценции стандартных растворов 1 , а также холостой пробы /хол в соответствии с порядком работы на флуориметре. Холостую пробу готовят, помещая в мерную колбу 2 мл раствора NaOH и доводя до метки водой. Строят градуировочный график в координатах д/ - с , мкг/мл, где Д/ = / - Лол. а Ск - концентрация кислоты в стандартном растворе. [c.218]

Относительно гасящего действия посторонних элементов на интенсивность свечения плавов нами приводятся данные, взятые из работ Гримальди, Мея и др. [560]. Гасящее действие примесей на свечение урана ими определялось в 2 г флюса (состава 45,5 г Na2 Oз 45,5 г К2СО3 и 9 г NaP) измерения проводились при помощи чувствительного флуориметра. Сильными гасителями считаются те элементы, которые в количествах от 1 до 10 мкг гасят урановую флуоресценцию на 10% и более. Это — Мп, Сг, Со, N1, Ьа, Р1 [513], Аи, РЬ, Се, Рг, N(1 и Н . Средние тушители — Ре, Си, 2п, 8п и ТЬ при их содержании от 10 до 50 мкг интенсивность свечения урана уменьшается на 10%. Слабые тушители — Т1 и присутствие их в количествах от 50 до 1000 J iкг уменьшает интенсивность свечения на 10%. Остальные элементы не являются заметными гасителями. Влияние железа начинает быть заметным, когда на [c.152]

Измерение интенсивности флуоресценции можно провестй с помощью простого флуорометра с фильтрами (иногда прибор называют флуориметром). Такой прибор состоит из источника излучения, первичного фильтра, камеры для вещества, вторичного фильтра и системы обнаружения флуоресценции. В большинстве таких флуорометров детектор располагается под углом 90° к падающему лучу, что позволяет падающему излучению проходить через испытуемый раствор без загрязнения выходного сигнала, получаемого детектором флуоресценции. Однако на детектор неизбежно попадает некоторое количество падающего излучения в результате внутреннего рассеивания — свойства, присущего самим растворам таким же образом влияет присутствие пыли или других твердых веществ. Для удаления этого остаточного рассеивания используют фильтры. Первичный фильтр отбирает коротковолновое излучение, способное вызывать возбуждение испытуемого вещества, в то время как вторичный фильтр, обычно строго отсекающего типа, пропускает флуоресценцию при большей длине волны, но блокирует рассеянное возбуждающее излучение. [c.53]

Для титрования комплекса кадмия (а также Mg и 2п) с 8-оксихинолин-5-сульфокислотой, флуоресцирующего при 495— 515 предложен метод, сочетающий фотолиз с флуориметрией. Он основан на фотохимической генерации ионов Со (из Со2(С204)з), вытесняющих кадмий из его комплекса с образованием нефлуоресцирующего соединения. Для фотолиза и возбуждения флуоресценции использован один и тот же источник ультрафиолетового излучения [491], [c.82]

Приборы для измерения молекулярной флуоресценции можно разделить на флуориметры (флуорометры) и спектрофлуориметры. У флуориметров селекция монохроматических лучистых потоков осуществляется с помощью простейших анализаторов излучения — светофильтров. Использование светофильтров обеспечивает высокий уровень возбуждающего излучения и эффективную регистрацию флуоресценции. При флуориметрических измерениях существенное значение имеет выбор светофильтров. Первичный светофильтр должен пропускать поглощаемое образцом излучение и не пропускать излучение флуоресценции. Вторичный светофильтр должен пропускать излучение флуоресценции, но возбуждающее излучение должно им полностью поглощаться. Подбирая такую пару светофильтров, следует добиваться их хорошей скрещен-ности сложенные вместе, они вообще не должны пропускать электромагнетное излучение. Источниками возбуждения у флуориметров являются ртутные лампы низкого давления. [c.512]

Удовлетворительные результаты анализа смесей люминофоров удается получить, используя метод синхронной флуориметрии. Суть этого метода заключается в следующем. Если при регистрации спектра флуоресценции смеси люминофоров синхронно с изменением длины волны флуоресценции Хр менять длину волны возбуждения флуоресценции Х , поддерживая постоянной небольшую разность между ними АХ = Хр - Х , то можно получить спектр, состоящий из отдельных пиков — синхронный спектр флуоресценции. Пики появляются в той области длин волн, где спектры возбуждения и флуоресценции перекрываются. Интенсивность пика пропорциональна как интенсивности в спектре флуоресценции при длине волны ее регистрации Хр, так и интенсивности в спектре возбуждения при длине волны Xs. Оптимальное соотношение между шириной регистрируемого пика и его интенсивностью достигается в том случае, когда величина Дл соответствует разности между максимумами флуоресценции и возбуждения. Интенсивность пика в синхронном спектре флуоресценции пропорциональна концентрации соотвеет-ствующего компонента. Применяя при анализе смесей люминофоров метод синхронной флуориметрии, удается добиться хорошего разрешения сигналов отдельных компонентов. На рис. 14.4.87, а представлен спектр флуоресценции смеси пяти ароматических углеводородов, а на рис. 14.4.87, 6 — синхронный спектр флуоресценции этой смеси. Из рис. 14.4.87, б видно, что пики, отвечающие отдельным компонентам, хорошо разрешены. Метод синхронной флуориметрии позволяет получить хорошие результаты лишь в тех случаях, когда полосы в спектрах имеют отчетливо выраженную колебательную структуру. [c.515]

После отделения хлороформных экстрактов сравнивают в ультрафиолетовом свете интенсивность флуоресценции анализируемого образца со шкалой эталонных растворов визуально или с помощью флуориметра Вместо метода стандартных серий можно пользоваться методом колоримет рическо-го титрования. Чувствительность реакции — 0,1 мкг Оа мл хлороформа [c.109]

Возможно использование и других типов физических ответов. Например, для реакций, сопровождающихся образованием или расходованием О2, могут быть сконструированы оптические биосенсоры. В качестве примера такого сенсора может служить концевая часть оптического волокна, покрытая двойной пленкой, состоящей из флуоресцирующего порфиринового красителя, заплавленного в полистирол, и соответствующей оксидазы, например глюкозооксидазы. По оптическому волокну к исследуемому образцу, в который погружен биосенсор, подвсн дится возбуждающее излучение и по нему же отводится к флуориметру испускаемое излучение. Интенсивность флуоресценции порфирина понижается в присутст ВИИ О2, и таким образом, может быть соотнесена с концентрацией О2 в слое, находящемся в непосредственном контакте с биосенсором. Расход О2, обусловленный присутствием окисляемого соединения, приводит к уменьшению концентрации О2 в слое, прилегающем к пленке, содержащей порфирин, воздействуя таким образом на интенсивность флуоресценций. [c.256]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология