Интенсивность длинноволновой флуоресценции

В методе флуориметрии измеряют не поглощение света веществом, а интенсивность длинноволновой эмиссии. Поэтому в отличие от АСР в этом методе с увеличением интенсивности облучения увеличивается чувствительность, что приводит также к значительному снижению предела обнаружения. В этом случае увеличивается также селективность. Метод модифицируют, меняя растворитель, pH и реагенты, а также длины волн флуоресценции и возбуждающего света. [c.415]

ИНТЕНСИВНОСТЬ ДЛИННОВОЛНОВОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ [c.239]

Фосфоресценция, как правило, происходит после заселения уровня Г) посредством безызлучательного синглет-триплетного перехода с уровня 5], который в свою очередь возбуждается в результате поглощения света. Состояние 1 обычно имеет меньшую энергию, чем состояние 5ь поэтому долгоживущее излучение (фосфоресценция) является более длинноволновым, чем короткоживущее излучение (флуоресценция). Относительная интенсивность флуоресценции и фосфоресценции зависит от скорости излучения и интеркомбинационной конверсии с 5 абсолютный квантовый выход зависит также от меж- и внутримолекулярных процессов переноса энергии, фосфоресценция конкурирует не только со столкновительным тущением Ти но и с интеркомбинационным переходом на 5о. Разница между общей скоростью образования триплетов из 51 и скоростью фосфоресценции может быть использована для определения эффективности процесса 7 1 5о в условиях, когда процессами бимолекулярного тушения можно пренебречь. [c.101]

Малая интенсивность длинноволновой полосы поглощения фенилацетилена (рис. 29) свидетельствует о частичной запрещенности по симметрии 51 — ц-перехода. Наложение колебания с частотой 520 см (в спектре флуоресценции) и 485 см (в спектре поглощения) на электронный переход приводит, как и в случае бензола, к снятию запрета. Это колебание, по-видимому, соответствует бензольному колебанию с V = 606 см . [c.114]

Массовый коэффициент ослабления играет очень важную роль в количественном анализе. Как возбуждающее первичное излучение, так и флуоресцентное излучение ослабляются в пробе. Для того чтобы связать наблюдаемую интенсивность флуоресценции с концентрацией, необходимо учитьшать это ослабление. Поскольку массовый коэффициент ослабления очень велик для рентгеновского излучения малой энергии (длинноволнового), точное определение легких элементов представляет большую сложность в РФС. В табл. 8.3-4 указаны массовые коэффициенты ослабления для некоторых элементов при различной энергии рентгеновского излучения, соответствующей характеристическим рентгеновским линиям. Обозначение К-Ьз,2, используемое в табл. 8.3-4, относится к линии Ка (см. с. 65). [c.63]

Время затухания флуоресценции пигментов мало зависит от растворителя. Оно приблизительно в 2 раза меньше для хлорофилла Ь по сравнению с а в соответствии с его меньшим квантовым выходом флуоресценции [5]. Для фталоцианинов длительность жизни несколько больше, чем для феофитинов соответствующих металлов. Более длительным временем затухания обладает гематопорфирин, интенсивность длинноволновой полосы поглощения которого заметно меньше, чем у хлорофилла и фталоцианинов. Интересно, что введение в пигмент вместо Мд атома Хп при- [c.415]

Фурокумарины флуоресцируют в более длинноволновой области спектра, чем кумарины, с более слабой интенсивностью. Минимальная концентрация для измерения флуоресценции наиболее сильно флуоресцирующих соединений — 0,01 мкг/мл (5-метоксипсорален). [c.76]

При подборе флуорогенного субстрата следует учитывать несколько важных факторов. Субстрат должен быть достаточно стабилен и легко доступен в чистом виде. Сам по себе он не должен проявлять заметной флуоресценции в условиях определения продукта и не должен подвергаться существенной неферментативной деградации с образованием флуоресцирующих продуктов. Естественно, он должен быть хорошим субстратом для используемого индикаторного фермента. Продукт ферментативного превращения этого субстрата должен быть стабильным и сильно флуоресцирующим. Регистрация флуоресценции облегчается при наличии большого стоксова смещения, т. е. тогда, когда различие между длинами волн максимумов возбуждения и испускания достаточно велико. Выгодно работать с веществами, имеющими достаточно длинноволновый максимум возбуждения, поскольку в этом случае наблюдается гораздо менее интенсивная фоновая флуоресценция благодаря понижению энергии возбуждения. [c.286]

Фильтры и монохроматоры. Светофильтры, используемые для выделения необходимой спектральной области источника света, так называемые первичные фильтры, не должны пропускать свет в области, где измеряется люминесценция, и, наоборот, пропускать как можно больше света в области поглощения объекта. Длинноволновая граница пропускания светофильтров должна быть несколько смещена в коротковолновую сторону по сравнению с самым длинноволновым максимумом поглощения. Фильтры, использующиеся для выделения флуоресценции, так называемые вторичные фильтры, должны отсекать весь рассеянный возбуждающий свет и пропускать весь свет флуоресценции. В качестве первичных и вторичных фильтров используются стеклянные фильтры из цветного стекла. В качестве вторичных фильтров могут использоваться клееные стеклянные фильтры и интерференционные-фильтры. Первые состоят из двух стеклянных пластинок и заключенного между ними слоя желатины, окрашенной органическими красителями. Под действием интенсивного облучения эти фильтры со временем портятся. Интерференционный фильтр представляет собой стеклянную пластинку, на которую нанесены две (или более) полупрозрачные металлические пленки, разделенные слоем прозрачного вещества. Для защиты металлического слоя на него наклеивается еще одна стеклянная пластинка. Расстояние между металлическими пленками определяет длину волны света, проходящего сквозь фильтр. Свет, половина длины волны которого равна расстоянию между пленками, пройдет через фильтр, а свет с любой другой длиной волны отразится. Интерференционные фильтры также разрушаются от интенсивного облучения. [c.65]

Это явление, а также фосфоресценция органических веществ возникают в жестких средах и наиболее интенсивны в замороженных растворах. При низких температурах, в замороженных растворах, фосфоресценция характеризуется большой длительностью и ее спектр сильно смещен относительно спектра флуоресценции в длинноволновую сторону. Возникновение этого длительного свечения свидетельствует [16, 17] о существовании метаста-бильного уровня (триплетный уровень Г), расположенного между нормальным и нижним возбужденным электронными уровнями (синглетные уровни 5о и 51). [c.80]

Между онектрами люминесценции и поглощения существует определенная зависимость. Спектры люминесценции всегда сдвинуты в более длинноволновую область по сравнению со спектрами поглощения. В связи с тем, что методы УФ-спектро-окаиии наиболее эффективны ири анализе ароматических веществ, люминесцентные методы также используются для исследования этих соединений в нефтяных молекулярных растворах. Эталонные спектры ароматических соединений, встречающихся в нефтях и нефтепродуктах, представлены в работе [99]. Так, в спектре свечения нафталина выделяется набор полос различной интенсивности в интервале 320—340 нм. Фенантрен обладает характерными полосами в области 345—375 им, а антрацен — 370—430 нм. Следует отметить, что достаточно узкие полосы флуоресценции (короткоживущей люминесценции) могут быть получены лишь при низких темшературах е помощью эффекта Шпольско го [15]. В растворах происходит ущирение полос, и спектр флуоресценции обычно представляет широкую бесструктурную полосу. [c.57]

Известно, что у дифенила бензольные ядра расположены не в одной плоскости, а под некоторым углом друг к другу. Увеличение копланарности молекулы путем фиксаций бензольных колец дополнительным пятичленным циклом приводит к тому, что спектры становятся более структурными, суживаются и смещаются в длинноволновую область. Интенсивность поглощения возрастает [15]. Увеличение, жесткости системы ведет одновременно к уменьшению стоксова сдвига и смещению спектра флуоресценции в длинноволновую область. Резко возрастает и интенсивность флуоресценции, увеличиваясь в ряду дифенил < карбазол < дибензофуран<<флуо-рен [16]. В работе [17] приведены квантовомеханические расчеты молекул карбазола, дибензофурана и флуорена. Показано, что самую низкую энергию синглет-синглетного перехода имеет карбазол. Дибензофуран занимает промежуточное положение. Наиболее высокая энергия у флуорена. [c.78]

В спектрах 2,3-дизамещенных, у которых, в отличие от 1,4-ди-замещенных, возможны ВВС, полосы флуоресценции сильно смещены в длинноволновую область и в щелочных растворах исчезают вследствие разрушения ВВС. Вместо них появляются более коротковолновые полосы флуоресценции, интенсивность которых зависит от pH раствора. [c.164]

Итак, по закону Стокса спектр флуоресценции лежит с длинноволновой стороны от самой длинноволновой полосы поглощения, а относительная интенсивность его колебательных компонент определяется принципом Франка — Кондона. В данном разделе мы дадим объяснение уже упоминавшемуся несовпадению 0-0-переходов при поглощении и при испускании. Как в основном, так и в электронно-возбужденном состоянии молекула соль-ватирована за счет диполь-дипольного взаимодействия с молекулами растворителя. Степень сольватации определяется в конечном итоге распределением электронной плотности в молекулах, от которого зависит величина дипольного момента — либо постоянного (для полярных молекул), либо наведенного (для неполярных молекул). В возбужденном состоянии молекула имеет иное распределение электронной плотности, чем в основном состоянии. Поэтому при возбуждении изменится постоянный дипольный момент и (или) поляризуемость, от которой зависит наведенный дипольный момент следовательно, должна измениться и степень сольватации. Однако поглощение света происходит так быстро, что в жидкости при комнатной температуре молекула не успевает изменить ориентации и сразу после возбуждения оказывается в неравновесном состоянии сольватации, имеющем большую энергию, чем равновесное (переход аЬ на рис. 4). Время жизни в возбужденном состоянии достаточно велико, и еще до испускания света происходит релаксация в равновесное состояние с с меньшей энергией. Аналогично при йену- [c.22]

Отношение интенсивностей полос замедленной флуоресценции типа Е (коротковолновые полосы на рис. 30) и фосфоресценции (длинноволновые полосы на рис. 30) не должно, следовательно, зависеть от фг и процессов тушения триплетных состояний. [c.100]

Возбужденная молекула 2-нафтола является более сильной кислотой, чем невозбужденная, потому диссоциация возбужденной молекулы успещно конкурирует с флуоресценцией и безызлучательными процессами деградации энергии электронного возбуж-деиия. Это приводит к тому, что в спектре флуоресценции 2- аф-тола даже в кислых растворах отчетливо видны две полосы. Более коротковолновая полоса соответствует флуоресценции недиосо-циированного 2-нафтола, более длинноволновая — флуоресценции 2-нафтолят-аниона, образовавшегося при диссоциации возбужден-иой молекулы 2-нафтола. Увеличение концентрации ионов водорода в растворе подавляет диссоциацию возбужденного 2-нафтола. В спектрах флуоресценции это проявляется как увеличение интенсивности флуоресценции недиссоциированного 2-иафтола и уменьшении интенсивности флуоресценции 2-нафтолят-аниона. Количественная обработка таких спектров при различных концентрациях иона водорода в растворе позволяет вычислить константу равновесия протолитической диссоциации возбужденного [c.77]

Впервые эксимеры были открыты при изучении влияния возрастания концентрации некоторых растворов на флуоресценцию. Интенсивность нормальной флуоресценции уменьшается, в то время как в длинноволновой области появляется новая полоса, интенсивность которой возрастает с увеличением концентрации. Особенно отчетливо такой характер проявляется у некоторых ароматических углеводородов типа пирена. В разбавленном растворе пирен имеет фиолетовую флуоресценцию. При высоких концентрациях вместо флуоресценции наблюдается быстроструктурное голубое излучение. Это излучает эксимер, образованный возбужденным синглетным пиреном и пиреном в основном состоянии. Если пирен обозначить как Р, то схема возбуждения выглядит так [c.132]

В принципе явление гашения флуоресценции можно использовать при фотол[етрическо.м определении пятен веществ, поглощающих в УФ-области. Для этого измеряют интенсивность длинноволнового флуоресцентного излучения, прошедшего через подложку и слой сорбента. Однако, как это следует из рис. 8.9 (III), в описываемом способе наблюдается ухудшение соотношения полезного сигнала к интенсивности фоновых помех. [c.190]

Авторы работы изучили спектры трех изомеров ди-стирилбензола и спектры транс-томеров арилпроизюдных дивипилбензола, приведенных в табл. 5, в зависимости от строения молекул. В работе содержатся данные по спектрам поглощения и флуоресценции производных ди-винилбензола и рассмотрено влияние пространственных затруднений в молекулах на спектры. Обнаружено, что спектры поглощения диарилпроизводных этилена и 1,4-дивинилбензола имеют одинаковое число полос. Так, стильбен имеет интенсивную длинноволновую полосу с максимумом при 290 ммк и вторую в области 240—210 ллк у 1,4-дистирилбензола есть интенсивная длинноволновая полоса при 360 ммк и вторая — в области 245—220 ммк. [c.109]

Авторы исследовали спектры поглощения и люминесценции ряда производных у-пиридона и показали, что линейное анеллирование бензольных ядер к пиридиновому циклу приводит к такому же уменьшению частоты 5яп — 5о-перехода, как и в ряду аценов. Интенсивная длинноволновая полоса в спектре 2,3-бензакридона = = 20 400 смещена к меньшим частотам на 4600 см по сравнению с полосой в спектре акридона и примерно на 9000 см по сравнению с полосой 1,4-дигидро-7-метил-2,3-бензакридона. Раствор 2,3-бензакридона обладает яркой зеленой флуоресценцией, спектр которой состоит из 7 полос интервал между интенсивными максимумами равен 1400 см . [c.176]

HaoS. значение в химии имеет фотолюминесценция. Ее характеризуют спектрами поглощения и люминесценции, поляризацией Л., энергетич. выходом (отношение энергии, излучаемой телом в виде Л., к поглощенной энергии), квантовым выходом (отношение числа излученных квантов к числу поглощенных), кинетикой. Максимум спектра фотолюминесценции обычно сдвинут в длинноволновую область по отношению к максимуму спектра поглощения (закон Стокса). Спектры поглощения и флуоресценции приблизительно зеркально симметричны, если они изображены в шкале частот (прави-чо зеркальной симметрии). Квантовый выход фотолюминесценции постоянен, если длина волны возбуждающего света Хе меньше длины волны Л. Хф, и резко уменьшается при X. > X (закон Вавилова). Зависимость интенсивности фотолюминесценции I от времени t для свечения дискретных центров имеет вид /(i) = = 7оехр(—i/x), где/о — интенсивность возбуждающего света, г — время жизни частиц на возбужд. уровне. Для рекомбинац. Л. I(t) = /о/(1 -(- pi) , где р — константа, 1 < а < 2. При повышении т-ры, увеличении концентраций в-ва, изменении pH, наличии примесей (в т. ч. Оз) наблюдается уменьшение выхода Л.— тушение. Различают тушение без уменьшения и с уменьшением г — соотв. статическое и динамическое, или тушение 1-го и 2-го рода (см. Штерна — Фольмера уравнение). [c.306]

Исследование спектров испускания (флуоресценции и фосфоресценции)— намного более чувствительный и специфичный метод, чем исследование спектров поглощения, и поэтому особенно полезно при микроанализе. в биологии и медицине [8, 9]. Спектр флуоресцепцни вещества во многих случаях представляет собой зеркальное отражение полосы поглощения с наименьшеп энергией н обычно располагается рядом с этой олосой с ее длинноволновой стороны. После удаления источника возбуждения интенсивность флуоресценции убывает по закону первого порядка [c.235]

При анализе следов меди в биологических объектах наблюдаемая интенсивность в основном обусловлена вкладом флуоресценции за счет непрерывного излучения. Следовательно, при анализе малых количеств тяжелых элементов в легких матрицах необходимо выбирать в качестве аналитической линии по возможности наиболее длинноволновую линию характеристического рентгеновского излучения. Если возникает необходимость использовать жесткое рентгеновское излучение, например Си с в биологической матрице, эталон должен содержать разбавленный раствор меди в подобной легкой матрице, например в ли-тиево-боратном стекле. [c.28]

Длинноволновой полосе поглощения изоиндолов отвечает интенсивная флуоресценция (см. табл. 1.7). У 2-метилизоиндола 8 % энергии возбуждения излучается в виде фосфоресценции со временем жизни [c.54]

Визуальное определерше с помощью цветных реагентов— не единственный метод, имеющийся в распоряжении аналитика. Используя определеную технику опрыскивания, получают пятна, которые флуоресцируют, если их испытывать с применением длинноволнового ультрафиолетового источника. В этом случае также можно оценить интенсивность флуоресценции соображения, высказывавшиеся для цветных пятен, справедливы и здесь. [c.146]

Длинноволновая полоса поглощения фенилацетилена в изонен-тане при 77 К разрешается на 18 полос, в спектре флуоресценции содержится 20 полос, причем 0—0-полосы поглощения и флуоресценции мало интенсивны. [c.54]

Жесткая фиксация этиленового мостика приводит к уменьшению вероятности безызлучательной траты поглощенной энергии. Это проявляется в резком возрастании 1Ш-тенсивности флуоресценции рассматриваемых систем по сравнению со стильбеном. Исключение составляет 2-фенилбензотиофен, на свойствах которого сильно сказывается влияние электронного строения серы. Снижение интенсивности поглощения длинноволновой полосы у этого соединения указывает на то, что после поглощения кванта света его молекула дольше пребывает в возбужденном состоянии. Это облегчает многочисленные столкновения с невозбужденными молекулами и способствует безызлучательной дезактивации. Локализация неподеленной пары электронов серы при окислении 2-фенилбензотиофена в 2-фенилбензотнофендиоксид вызывает резкое увеличение интенсивности флуоресценции (табл. 4) [8, 9]. [c.76]

При введении в орто-положенпе фенильного радикала 2-фенил-бензазола гидрокси- или тозиламиногруппы возникает ВВС. Эффект от ее образования выражается в появлении длинноволновой полосы поглощения ( макс 340—360 нм) и аномально большом стоксовом сдвиге спектра флуоресценции. Авторы работы [148], детально изучившие влияние ВВС на флуоресцентные свойства 2-(2-тозиламинофенил)бензоксазолов, считают, что причина аномально большого стоксова сдвига заключается в частичной трате энергии возбуждения на перенос протона и упрочнение ВВС в возбужденном состоянии. Чем прочнее водородная связь в основном состоянии, тем меньше энергии тратится на ее упрочнение в возбужденном состоянии, тем меньше стоксов сдвиг и выше интенсивность [c.107]

Сопоставление флуоресцентных свойств 2-фенилбензтриазола и 2-фенилбензимидазола позволяет отметить у триазольпого производного не только более длинноволновое расположение максимума (Ч-26 нм), по и больший по величине стоксов сдвиг. Возможно, это связано с хиноидной структурой триазольного производного. В то же время интенсивность флуоресценции у обоих соединений практически одинакова [8]. [c.112]

Измерение интенсивности флуоресценции обычно достигается облучением раствора пробы монохроматическим светом и наблюдением испускаемого излучения под прямым углом по отношению к падающему лучу. Как было показано выше, вещества поглощают свет избирательно, и флуоресценция имеет сдвиг в более длинноволновую область. Фактически кривые ноглощепия 1 и флуоресценции 2 имеют общую форму, показанную на рис. 81, и наибольшая эффективность достигается в том случае, если падающий свет имеет длину волны, соответствующую максимуму поглощения А. Флуоресценция возбуждается, хотя излучение при некоторых длинах волн перекрывается поглощением. [c.253]

В ВИДИМОЙ И ультрафиолетовой областях, монохроматора для выделения требуемой длины волны возбуждения, держателя образца и второго монохроматора с фотоумножителем для анализа света флуоресценции. С помощью такого прибора можно выделять узкую полосу длин волн возбуждающего света и измерять спектр флуоресценции образца, можно также устанавливать монохроматор флуоресценции на длину волны полосы флуоресценции вещества и наблюдать изменение ее интенсивности в зависимости от длины волны возбуждающего света. В принципе это просто, но на практике при такой конструкции очень трудно достигнуть высокой чувствительности, так как много света теряется. Свет источника распространяется во всех направлениях, и только небольшая доля его попадает в первый монохроматор. Из этой доли лищь узкая полоса длин волн направляется на образец, который чаще всего поглощает не более 1% света, остальная же часть пропускается и не используется вовсе. Свет флуоресценции тоже распространяется во всех направлениях, и только небольшая его часть собирается вторым монохроматором. Этот свет снова диспергируется, и опять выделяется узкая полоса длин волн, так что окончательная интенсивность света, падающего на детектор, составляет очень малую долю от света, испускаемого источником. Такие потери света уменьшают несколькими способами. Очевидно, лучше использовать наиболее мощную лампу, наиболее чувствительный детектор и по возможности большие монохроматоры. Но даже с очень большими и дорогими монохроматорами чувствительность будет оставаться довольно низкой, если измерения проводить при очень узких щелях на обоих монохроматорах. К счастью, чувствительность можно увеличить также использованием широких щелей на том или другом монохроматоре. Например, Паркер [73] получил хорошо разрешенные спектры возбуждения антрацена при концентрации менее 10 вес. ч. с помощью прибора, имеющего монохроматоры с малой светосилой, но с широкой щелью у монохроматора флуоресценции. Аналогичные чувствительность и разрешение можно получить при измерении спектра флуоресценции при широких щелях монохроматора возбуждения. Иногда вместо двух монохроматоров можно использовать фильтры либо на возбуждении, либо на флуоресценции. Со ртутной лампой и фильтрами в канале возбуждения света можно получить гораздо большую интенсивность, чем при выделении света с помощью большого монохроматора. Как будет показано далее, наиболее серьезны трудности, связанные с ограниченной интенсивностью возбуждающего света в области длин волн короче 300 нм. Эта область является самой важной, так как большинство простых органических соединений не поглощает свет в длинноволновой области и для получения адекватной чувствительности прихо- [c.130]