Нуклеотиды кислотный гидролиз

Метод основан на реакции между дифениламином и дезоксирибо-зой, отщепляющейся от пуриновых нуклеотидов в результате кислотного гидролиза. М-гликозидная связь в пиримидиновых нуклеотидах при этом не разрушается и вследствие этого определяется лишь около половины углевода, входящего в состав ДНК поэтому рекомендуется в качестве стандарта использовать гидролизат ДНК, концентрацию которого предварительно определяют спектрофотометрическим методом. [c.163]

Продукты кислотного гидролиза нуклеозид-2, З -циклофосфатов— 2 - и З -нуклеотиды — образуются в количествах, близких к эквимольному 30, что является следствием почти равновероятного раскрытия циклофосфатов по обоим кислородам остатка рибозы. [c.549]

Полиамидный характер цианокобаламина установлен по выделению 6 мол. аммиака при кислотном гидролизе. При кислотном гидролизе витамина В12 горячим раствором соляной кислоты обнаружен красный аморфный осадок, содержащий кобальт, представляющий собой смесь кислот, содержащих от одной до семи карбоксильных групп, разделенных электрофорезом. То обстоятельство, что отщепление -1-аминопропанола-2 происходит после отщепления нуклеотида (I), а также отсутствие основных групп в красном кобальтосодержащем продукте гидролиза позволило заключить, что аминопропиловый спирт этерифицирован фосфорной кислотой и соединен амидной связью с остальной молекулой. [c.682]

Измельченную на холоде навеску ткани (100—200 мг) помещают в центрифужную пробирку с 5—10 мл охлажденного 0,2 н. раствора хлорной кислоты. Содержимое пробирки тщательно перемешивают И осадок отделяют центрифугированием на холоде (3000 g, 10 мин). Центрифугат отбрасывают и осадок повторно отмывают хлорной кислотой. Такая предварительная обработка материала необходима для удаления кислоторастворимых нуклеотидов. После удаления центрифугата к осадку добавляют 5—10 мл 0,5 и. раствора H IO4 и, закрыв пробирки пробками с воздушным холодильником, нагревают их в кипящей водяной бане в течение 30 мин. Эта процедура обеспечивает количественную экстракцию Нуклеиновых кислот из исследуемого материала и их кислотный гидролиз до растворимых фрагментов. Гидролизаты охлаждают и центрифугируют. Осадок подвергают повторной экстракции 0,5 н. H IO4. Гидролизаты объединяют и определяют поглощение на спектрофотометре при 270 и 290 нм против контрольного раствора — 0,5 н. раствора H IO4. При необходимости гидролизаты разводят тем же раствором. [c.162]

Д е 3 о кси р и б о 3 а. Выделение и идентификация дезоксирибозы как компонента ДНК были значительно более трудной задачей, ввиду большой неустойчивости этого моносахарида, которая характерна вообще для всех 2-дезоксисахаров. При первоначальных попытках выделить Моносахарид из ДНК посредством гидролиза получали только левули-човую кислоту, в которую превращалась дезоксирибоза. Лишь в 1930 г. Левину удалось, подвергая индивидуальные нуклеотиды, выделенные из ДНК, кислотному гидролизу в очень мягких условиях (0,01 N кислота в течение 10 мин.), выделить кристаллическую дезоксирибозу. Позднее она была получена также в виде дибензилмеркапталя при меркаптолизе ДНК действием дибензилмеркаптана. [c.187]

В то время как дезоксицитидин-3 - и -5 -фосфаты могут быть получены аналогичным образом [21], хорошо известная лабильность гликозидной связи пуринов при кислотном гидролизе создает сложности при синтезе пуриновых нуклеотидов. Они были преодолены тщательным разделением смеси 3 - и 5 -моноацетатов дезоксиаденозина, полученной в результате частичного дезацети-лирования 3, 5 -ди-0-ацетилдезоксиаденозина (20) [20], Структура этих моноацетатов была подтверждена тем, что в результате мягкого кислотного гидролиза первого из них образуется известная 3-0-ацетилдезоксирибоза (21). Изомерные моноацетаты были раздельно подвергнуты фосфорилированию, и после удаления защитных групп получены дезоксиаденозин-З -фосфат (22) и -5 -фос-фат (8) схема (5) . Аналогичная процедура была использована для синтеза дезоксигуанозин-З -фосфата и -5 -фосфата (9) [22]. [c.38]

Нуклеотиды — мономерные звенья нуклеиновьгх кислот — представляют собой монофосфорные эфиры нуклеозидов. Кислотный гидролиз мононуклеотидов, приводящий к образованию гетероциклических оснований и фосфатов углеводов, свидетельствует о том, что остаток фосфорной кислоты присоединен к углеводу. [c.174]

Возможность отщепления гетероциклического основания от углевода в условиях мягкого кислотного гидролиза позволяла предположить, что нуклеозиды представляют собой N-гликoзиды, причем в образовании гликозидной связи участвует один из гетероциклических атомов. С помощью спектральных и химических методов анализа было установлено, что основание соединено с углеводом своим N-9 атомом в случае пуринов и N-1 в случае пиримидинов. В состав нуклеотидов входят только два остатка сахара — О-рибо-за и 2-дезокси-0-рибоза, С помощью периодатного окисления было показано, что оба углевода находятся в форме фуранозы. Наличие в циклической форме углевода асимметрического (С-1 ) атома углерода обусловливает возможность ее существовании в виде двух различных стереоизомеров, В соответствии с принятий номенклатурой стереоизомеры, отличающиеся только конфигураии-ей гликозидного центра, называются аномерами. Тот из аномеров, [c.306]

Это соединение было объектом обширных исследований, проведенных Левиным и обобщенных в 1934 г. Левин предложил общую структуру этой сложной молекулы. Позднее Тодд н другие исследователи выяснили детали строения. тpyкfypa, предложенная для четырехзвеньевого участка цепи, предполагает одну из возможных последовательностей. Основу цепи составляют рибозные остатки, связанные фосфатными группами З -кислородный атом одного остатка с 5 -кислород-ным атомом другого Т -р-гликозидной связью присоединены либо пурины—аденин и гуанин, либо пиримидины—урацил и цитозин. Возможные таутомерные формы азотистых оснований приведены в следующем разделе, где описаны свойства и строение дезоксирибонуклеиновой кислоты. Так как 5 -гидроксильная группа — первичная, а З -гидроксильная группа — вторичная, то кислотный гидролиз РНК приводит к расщеплению в первую очередь 5 -эфирной связи с образованием четырех глико-зидов рибозид-З -фосфата, известных как нуклеотиды. Нуклеотид, содержащий аденин, называется адениловой кислотой. Щелочной гидролиз в жестких условиях приводит к отщеплению З -фосфатной группы и дает нуклеозид аденозин, точнее 9-р-Л-рибофуранозиладенин. [c.718]

При обработке диазометаном суспензии РНК в эфире с последующим кислотным гидролизом в качестве метилированных продуктов были выделены З-Ы-метилурацил (в основном) и 1-Ы-ме-тилгуанин(в меньшем количестве). Побочной реакцией при метилировании РНК и ДНК является расщепление полинуклеотидной цепи, которое в случае РНК происходит, по-видимому, за счет распада фосфотриэфиров (продуктов метилирования по фосфатной группе), а в случае ДНК — в основном за счет легкого отщепления 7-Ы-метилгуанииа и З-Н-метиладенина и последующей -элиминации (см. гл. 8 и 10). Таким образом, метилирование диазометаном, по-видимому, непригодно для препаративного получения метилированных полинуклеотидов, но может быть с успехом применено при синтезе метилированных нуклеозидов и нуклеотидов. [c.364]

ДНК не содержит оснований, достаточно реакционноспособных по отношению к гидроксиламину (при pH 10), однако реакцию все же удается провести после дезаминирования ДНК, осуществляемого, например, азотистой кислотой, в результате чего цитозиновые остатки превращаются в урацильные. Это дает возможность специфического расщепления ДНК на олигонуклеотидные блоки по месту нахождения в исходной цепи дезоксицитидиновых звеньев, что особенно ценно, поскольку пока не известны ферменты, гидролизующие ДНК достаточно специфично по отношению к какому-либо определенному нуклеотиду. Такое сочетание двух методов химической модификации (обработки азотистой кислотой и гидроксиламином) с последующим кислотным гидролизом было применено для изучения распределения в ДНК тимидина [c.472]

Более специфичен, чем перманганат калия, другой агент — четырехокись осмия, окисляющая только пиримидиновые основания и не затрагивающая пуриновые Выше (см. стр. 333) уже рассматривалась реакция четырехокиси осмия с пиримидиновыми нуклеозидами и нуклеотидами, приводящая к насыщению двойной связи С-5—С-6 с образованием 5,6-диокси-5,6-дигидропи-римидинов. После окисления (см. стр. 333) образующиеся диолы могут быть превращены обработкой щелочью в уреидогликозиды ЬХХУП 131 остатки мочевины далее могут быть удалены кислотным гидролизом 31 или действием гидразина, как описано ранее. В случае тимидина протекающая реакция может быть представлена следующей схемой 131 [c.476]

Заместители в углеводном остатке. Данные, позволившие бы оценить влияние различного пространственного расположения гидроксильных групп в сахарных остатках на прочность Ы-гликозид-ных связей, практически отсутствуют. Скорости гидролиза Ы-гли-козидных связей в пуриновых нуклеотидах и соответствующих нуклеозидах различаются незначительно особенно в ряду производных аденина 3 (см. табл. 8.3). Фосфорилирование 7-Ы-заме-щенных дезоксигуанозина заметно стабилизует Ы-гликозидную связь, скорость кислотного гидролиза которой падает в ряду нуклеозид > нуклеозидмонофосфат > нуклеотидное звено в цепи [c.499]

При переходе от нуклеозидов и нуклеотидов к олиго- и полинуклеотидам основные закономерности, связывающие лабильность N-гликозидных связей по отношению к кислотному гидролизу со строением нуклеозидных звеньев, сохраняются (о влиянии фосфо-рилирования гидроксильных групп остатков сахаров см. стр. 495 и 499). Однако кислотный гидролиз N-гликозидных связей в полинуклеотидах сопровождается расщеплением фосфодиэфирных связей , причем в полнрибонуклеотидах эти два процесса могут протекать независимо, а в полидезоксирибонуклеотидах расщепление фосфодиэфирных связей под действием кислот протекает после отщепления основания от соответствующего нуклеотидного звена (подробнее — см. стр. 572). [c.500]

Кислотный гидролиз РНК до пуриновых оснований и пиримидиновых нуклеотидов, очень широко применявшийся в более ранних исследованиях (особенно до развития современных методов хромотографического анализа, см. обзоры ), используется для анализа нуклеотидного состава РНК и в настоящее время. С этой целью РНК нагревают при 100° С с 1 н. соляной кислотой в течение 1 ч реже применяется гидролиз 0,4 н. серной кислотой при 100° С в течение 1 Побочными процессами, протекающими в этих условиях, являются расщепление гликозидной связи в производных дигидроурацила (см. гл. 8), частичное дезаминирование производных цитозина (на 2—4%) возможна также частичная деградация 1-метиладенина (см. стр. 442). [c.567]

П. о. получают из нуклеиновых к-т, нуклеотидов и нуклеозидов при их кислотном гидролизе в 1 н. H2SO4 или в 12 н. H IO4 при 100° в течение часа. Более длительный гидролиз в этих условиях приводит к заметным потерям аденина. [c.206]

При обработке тимидин-3, 5 -циклофосфата водным раствором едкого натра в жестких условиях образуется смесь тимидин-3 -(—80 о) и тимидин-5 -фосфатов ( 20 о). Гидролиз под действием диэстеразы змеиного яда протекает довольно медленно, но и в этом случае образуются оба изомерных нуклеотида. В противоположность тимидин-5 -фосфату гликозидная связь в тимидин-3, 5 -цик-лофосфате легко разрывается при кислотном гидролизе. Был также обнаружен гипсохромный сдвиг максимума в ультрафиолетовом спектре поглощения [77]. [c.136]

Для фосфорилирования производных нуклеозидов дибензилхлорфосфат более удобен вследствие того, что бензильные группы легко удаляются рядом методов, включая гидрогенолиз, кислотный и щелочной гидролиз и анионное расщепление [97]. При обработке 2, 3 -0-изопропилиденаденозина дибензилхлорфосфатом образуется 5 -дибензилфосфат, из которого каталитическим гидрогенолизом удаляются бензильные группы. При действии разбавленной кислоты отщепляется изопропилиденовый остаток и образуется с хорошим выходом аденозин-5 -фосфат [98]. В другом случае использовали кислотный гидролиз 2, 3 -0-изопропилиденаденозин-5 -дибензил-фосфата в мягких условиях, в результате которого образовывался аденозин-5 -бензилфосфат, из которого гидрогенолизом получали свободный нуклеотид [98]. [c.141]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология