Динитрофторбензол, реакции с белками

Аналогичным образом 2,4-динитрофторбензол взаимодействует с пептидами и белками эта реакция используется для анализа на концевые аминогруппы в аминокислотах, входящих в состав полн-пептидных цепей (см. разд. 20-6,А). [c.245]

Аналогичные превращения протекают в реакциях свободных аминогрупп концевых аминокислот в пептидах и белках, например, с 2,4-динитрофторбензолом при гидролизе пептидных связей 8] образующиеся динитрофениловые кислоты можно идентифицировать. О методах определения концевых групп см. раздел 2.3.2.2. [c.239]

Перед проведением реакции, приводящей к распаду макроцепи, часто концевые группы метят каким-либо специфич. реагентом (напр., в случае белков — фенил-изоцианатом и др.), что дает возможность выявить не только химич. природу элементарных звеньев, но и порядок расположения их в макроцепи. Так, при установлении структуры инсулина концевые аминогруппы были помечены обработкой 2,4-динитрофторбензолом (метод ДНФ-метки) и белок был подвергнут частичному и полному гидролизу (на схеме — частичный) [c.67]

Аналогичным образом 2,4-динитрофторбензол взаимодействует с пептидами и белками эта реакция используется для анализа на концевые аминогруппы [c.181]

Полимераналогичные реакции, протекающие по концевым и инородным группам, имеют особенно большое значение для белков. Сюда же относится и взаимодействие карбоксильных групп с диазометаном [705, 706] и аминогрупп с динитрофторбензолом [707]. [c.110]

Одной из важнейших вех в химии белков было введение Зангером [52, 200] 2,4-динитрофторбензола (ДНФБ) как реагента для определения и идентификации свободных аминогрупп в белках и пептидах. Рассматриваемая реакция заключается в нуклеофильном замещении атома фтора в ДНФБ аминогруппой белка, в результате чего образуется динитро-фенильное (ДНФ) производное белка условия проведения этой реакции таковы, что пептидные свяди белка не изменяются. Последующий гидролиз ДНФ-белка или ДНФ-пептида приводит к выделению свободных аминокислот и ДНф-нроизводных К-концевых аминокислот. ДНФ-производ-ные аминокислот представляют собой соединения ярко-желтого цвета, которые могут быть экстрагированы подходящими органическими растворителями, фракционированы хроматографически и определены колориметрически. Последовательность реакций может быть изображена следующей схемой [c.374]

Для выяснения строения аминокислот, находящихся на концах молекул белка, проводили реакцию конденсации белка с 2,4-динитрофторбензолом. Затем полученный продукт гидролизовали и колориметрическим методом определяли количество концевых аминокислот, вступивших Б реакцию конденсации. Этот метод применялся также для определения аминогрупп в полиамидах [25]. [c.80]

Инсулин сильно агрегирован в 0,9%-ном растворе лрн pH = 7, но в очень разбавленных растворах при pH =2—3 он полностью диссоциирован. Молекулярный вес инсулина, определенный различнымифизически ми методами, равен 1,2 000, однако определение, проведенное химическим методом, показало ошибочность этой цифры. Харфенист и Крейг фракционировали инсулин методом противоточного распределения и показали, что кривая распределения соответствует идеальной для однородного вещества. В дальнейшем (1952) они подобрали условия частичной реакции белка с динитрофторбензолом, разделили продукты реакции распределительной хроматографией и, исходя из коэффициента экстинкции при 350 ммк (для монодинитрофенильного производного) и из кривой распределения, нашли значение молекулярного веса, равное 6500. [c.698]

Для обнаружения белков после электрофореза можнО также применять хорошо известную реакцию белков с 2,4-динитро-фторбензолом [200, 1154]. Гели погружали в 2,5%-ный раствор . 2,4-динитрофторбензола, выдерживали их в течение 16 ч в темноте и затем многократно промывали эфиром, подкисленным НС1. Чувствительность обнаружения БСА этим методом была почти такой же, как и при использовании амидового черного 10 В. Окрашенные 2,4-динитрофторбензолом белки, присутствующие в вырезанных зонах, можно прямо подвергать гидролизу для определения N-концевой аминокислоты, что позволяет получить представление о чистоте разделенных белков. [c.275]

При исследовании структуры белков используются эти и другие методы расщепления. Предложен ряд технических приемов для идентификации конечных аминокислот. Один из них широко применяется для идентификации аминокислот, содержащих концевую аминогруппу. Согласно этому методу, проводят реакцию полипептида с 2,4-динитрофторбензолом, при этом свободная аминогруппа превращается в 2,4-динитрофенил-производное (разд. 4.2.2). Последовательный гидролиз полипептидов дает обычные аминокислоты, за исключением конечной N-apилaмииoки лoты, которую можно отделить и идентифицировать хроматографически. [c.297]

В основе метода динитрофенилирования лежит реакция свободных ЫНг-групп белка или пептида с 2,4-динитрофторбензолом (ДНФБ) в щелочной среде, при которой образуются соответствующие динитрофенильные производные (ДНФ-производные). В реакцию с ДНФБ, кроме свободных а-ЫНг-групп, вступают также е-ННг-группа лизина, 5Н-группа цистеина, ОН-группы оксиаминокислот и имидазольный гетероцикл гистидина. ДНФ-производное белка или пептида подвергают полному кислотному гидролизу. Ы-концевые ДНФ-амино-кислоты экстрагируют из гидролизатов эфиром, отделяя их от свободных аминокислот и ДНФ-производных по другим функциональным группам аминокислот, которые растворимы в воде. Идентификацию [c.145]

Одни из первых методов определения N-концевых аминокислотных остатков был предложен Ф. Сенгером в 1945 г. При реакции а-аминогруппы пептида или белка с 2, 4-динитрофторбензолом получается динитрофенильное (ДНФ) производное, окрашенное в желтый цвет. Последующий кислотный гидролиз (5,7 н. H l) приводит к разрыву пептидных связей и образованию ДНФ-производ-ного N-кониевой аминокислоты. ДНФ-Аминокислота экстрагируется эфиром и идентифицируется методом тонкослойной хроматографии в присутствии стандартов. [c.37]

ДО полного изменения в расположении пептидных цепей. Развертывание пептидных цепей при денатурации подтверждается тем, что денатурированные белки дают более интенсивные цветные реакции, чем нативные белки. Это было впервые установлено для реакций на сульфгидрильные группы цистеина и на дисульфидные группы цистина [136]. Реакция с нитропуссидом, титрование железосинеродистым калием [39], ацетилирование [137] и полярография [138] — все эти методы определения сульфгидрильных и дисульфидных групп показали, что число этих групп в денатурированных белках больше, чем в тех же белках, находящихся в нативном состоянии. Денатурированные белки дают также более интенсивные цветные реакции на тирозин с фосфорномолибденовой кислотой [139, 140] и с диазореактивом [141], а на аргинин с реактивом Сакагуши [142] и присоединяют большие количества иода [143]. В то время как в нативном лакто-глобулине только 12 -аминогрупп лизина реагируют с динитрофторбензолом, в денатурированном лактоглобулине эту реакцию дает 31 е-аминогруппа, т. е. все содержащиеся в нем е-аминогруппы [144]. Таким образом, все приведенные данные подтверждают ту точку зрения, что при денатурации в связи с развертыванием пептидных цепей становятся доступными те активные группы, которые в нативных белках недоступны для соответствующих реактивов. Подобным же образом можно объяснить меньшую устойчивость ряда денатурированных белков по отношению к действию трипсина. Как известно, многие денатурированные белки гораздо легче расщепляются трипсином, чем те же самые белки в нативном состоянии. Это можно рассматривать как следствие того, что при денатурации разрываются связи, тесно удерживающие пептидные цепи друг около друга, и обнажаются те пункты, на которые может воздействовать фермент [146, 147]. Можно полагать, что трипсин, гидролизуя (хотя и медленно) нативные белки, гидролизует, в сущности, содержащиеся в них следы денатурированных белков. При этом процессе должно происходить непрерывное нарушение равновесия в системе нативный белок—денатурированный белок и смещение этого равновесия в правую сторону. [c.149]

На протяжении всего изложенного выше обсуждения внимание читателя обращалось на инактивирование ферментов, гормонов, токсинов и вирусов путем химического их изменения. Определение тех свободных функциональных групп в аминокислотных. остатках, которые имеют важное значение для проявления биологической активности, представляет собой одну из главных целей химической модификации белков и является одним из основных достижений в этой области исследования. В каждом из разделов этой статьи, посвященных различным химическим реакциям, приводятся отдельные классические примеры. Полная сводка их имеется в последующих томах настоящего сборника. Однако необходимо еще раз подчеркнуть, что параллелизм между удалением какой-либо функциональной группы белка и потерей активности вовсе не является необходимым следствием существенной связи между ними или ее доказательством. Упоминавшееся выше инактивирование вируса табачной мозаики формальдегидом является только одним из большого числа примеров, доказывающих, что лишь небольшая часть определенных функциональных групп белка связана с его биологической активностью. Кроме того, исследование реакций этого вируса с иодом, кетеном, фенилизоцианатом, карбобензоксихлоридом, п-хлорбензоилхлори-дом, бензосульфохлоридом и динитрофторбензолом показало, что его активность обусловлена не только аминогруппами, но также некоторыми фенольными и индольными группами. Однако Найт [106] отмечает, что, несмотря на эти интенсивные исследования, ни в одном из случаев не удалось найти такую функциональную группу, которая специфически или преобладающим образом определяла бы активность указанного вируса. В самом деле, в случае таких нуклеопротеидов, как вирус табачной мозаики, ролью нуклеиновой кислоты, входящей в их состав, почти полностью пренебрегают. [c.351]

Здесь в реакцию вступает своей аминогруппой остаток аминокислоты, находящийся с краю полипептидной цепи. Если с конца молекулы белка (или полипептида) будет находиться диаминомонокарбоновая кислота, например лшшн, то к ней присоединятся две молекулы динитробензола. Связь аминогруппы аминокислоты с 2,4-динитробензолом оказывается более стабильной, чем обычная кислотоамидная (пептидная) связь. Поэтому при гидролизе, после разрушения пептидных связей, остается нерасщепленным производное — 2,4-динитробензол-аминокислота. Соединение это выделяется, и затем устанавливается химическая природа входящей в его состав аминокислоты. Для выяснения размещения аминокислот внутри полипептидной цепи последнюю путем постепенного гидролиза расщепляют с образованием низкомолекулярных полипептидов, их отделяют друг от друга и в каждом из них определяют с помощью 2,4-динитрофторбензола концевой аминокислотный остаток. Так шаг за шагом выясняют последовательность расположения аминокислотных остатков в полипептидных цепях белковых молекул. Существуют также методы, позволяющие определить аминокислотный остаток, находящийся с краю молекулы и имеющий свободную карбоксильную группу. К ним относится гидразиновый метод , основанный на том, что гидразин (НзЫ—ННз) реагирует со всеми аминокислотами, связанными друг с другом пептидной связью. Концевая же аминокислота (со свободным карбоксилом), не прореагировавшая с гидразином, остается в свободном виде и ее идентифицируют. [c.32]

Важно отметить, что скорости всех этих реакций зависят от pH (р,Н8—9), и для того, чтобы реакция нуклеофильного замещения в ароматическом кольце протекала достаточно быстро, необходимо наличие по крайней мере двух групп НОг (в орто- или пара-положении). Вместо сульфогруппы (—50зН) в реакциях нуклеофильного замещения (1) аналогичным образом может участвовать атом фтора или хлора (например, в случае присоединения к белку 2,4-динитрофторбензола или пикрилхлорида). [c.150]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология