Элюент очистка

I — ныход элюента из колонки 2 — камера испарения растворителя . 1 — термостат детектора 4 уплотнения 5 — камера пиролиза 6 — камера очистки 7, в — катушки Э — пламенно-ионизационный детектор [c.94]

Чаще всего об этом приходится заботиться при очистке или фракционировании ферментов. Нередко их хроматографию приходится вести на холоду, хотя для целей самого хроматографического процесса это и невыгодно — увеличивается вязкость элюента, ухудшается разрешение пиков (низкомолекулярные вещества хроматографируют при комнатной, а иногда и при повышенной, до 50—60°, температуре в этом случае особое внимание должно быть уделено деаэрации обменника н элюента и опасности смены температур из-за возможности появления пузырей газа, как было подробно сказано в гл. 3). [c.292]

Если форма пятен оказывается не круглой, то это указывает иа неполную отмывку солей из препарата. Флюоресценция фона пластинки пли переднего фронта элюента указывает на необходимость дополнительной очистки растворителей и промывки пластинки элюентом. Флюоресценция иа старте может наблюдаться в связи с неполным перевариванием белка. [c.487]

Примечание. Если соединение не кристаллизуется, необходима предварительная хроматографическая очистка его на силикагеле (0,06-0,20 мм элюент эфир-петролейный эфир 3 1 Rj 0,7). [c.381]

В работе [369] описан метод очистки Pu(IV), Pu(VI) и U(VI) от осколочных элементов (Zr —Nb ) с использованием в качестве элюента азотнокислого раствора метилизобутилкетона. Цирконий и ниобий задерживаются силикагелем, но выходящий из колонки продукт оказывается загрязненным рутением. [c.376]

Гель-хроматография. В препаративных целях, особенно при очистке белков от примесей, щироко используют метод молекулярных сит, или гель-хроматографию. При обработке эпихлоргидрином полисахарида дек-страна образуются различной степени выраженности поперечные связи, приводящие к формированию крупных гидрофильных зерен, нерастворимых в воде и называемых сефадексами. Благодаря большому сродству к воде зерна сильно набухают в водной среде с образованием геля, которым заполняют хроматографическую колонку. Разделение веществ этим методом основано на том, что большие молекулы не проникают во внутреннюю водную фазу геля, являющуюся стационарной, и остаются снаружи, двигаясь вместе с подвижной фазой вниз вдоль колонки небольшие молекулы, напротив, свободно диффундируют внутрь зерен, образуя равновесную систему между подвижной и стационарной фазами, и соответственно с меньшей скоростью двигаются вдоль колонки (рис. 1.5). Обычно момент появления веществ в вытекающем из колонки с сефадексом элюенте выражают формулой [c.30]

Необратимое связывание растворимых, более сильно удерживаемых компонентов образца на насадке при условиях элюирования. Эти вещества могут вымываться или не вымываться из насадки более сильными элюентами (см. ниже разд. 1.6.2.1.2 в связи с понятием элюирующая сила ). Такие вещества лучше всего удалить на стадии предварительной адсорбционной очистки до проведения препаративного ЖХ-разделения. [c.78]

Гидрирование проводят в установке, показанной на рис. 1.3. Подготовительные операции аналогичны описанным при получении гидрокоричной кислоты. В реакционную колбу помещают раствор 4,4 г (0,03 моль) неочищенного 5,8-дигидро-1-нафтола (получение см. 3.8) в 20 мл этилацетата и 0,3 г катализатора. После поглощения рассчитанного количества водорода катализатор отфильтровывают, растворитель удаляют в вакууме. Остаток быстро затвердевает. Перекристаллизацией его из петролейного эфира (т. КИП- 40-60 °С) получают 3,7 г (84 %) почти бесцветных кристаллов т. пл. 68-69 °С. При необходимости может быть проведена их дополнительная очистка методом вакуумной сублимации при температуре 100 °С и давлении 4 мм рт. ст. Хроматография элюент - хлороформ 0,5. Спектральные характеристики приведены на рис. 1.5. [c.84]

Работу проводят в токе аргона в установке, изображенной на рис. 4.4. К 1,3 М эфирному раствору, содержащему 0,06 моль фениллития, добавляют 9,3 г (0,05 моль) 4-бромоанизола. В процессе прибавления реакционная смесь слабо разогревается. Ее выдерживают в течение 24 ч при комнатной температуре. По истечении этого срока прибавляют по каплям 7,3 г (0,04 моль) бензофе-нона, растворенного в 30 мл сухого эфира. Для завершения реакции смесь нагревают 1 ч, затем охлаждают и осторожно разлагают водой. Эфирный слой отделяют, из водного продукт экстрагируют эфиром. Объединенные эфирные растворы промывают водой до нейтральной реакции, сушат. Эфир удаляют. Остаток при охлаждении затвердевает. После кристаллизации из этанола получают 11,1 г (75 %) бесцветных кристаллов т. пл. 127-128 °С. Возможна дополнительная очистка сублимацией при температуре 150 °С и давлении 5 мм рт. ст. Хроматография элюент - хлороформ и петролейный эфир, 2 1 К/ 0,6. Спектральные характеристики даны на рис. 4.7. [c.264]

Препаративную очистку полисом из 3—5 мл лизата Е. соИ, обработанного ДНКазой, проводили на колонке сефарозы 4В (2,5 X 33 см F = 165 мл). В элюенте присутствовало 10% глицерина, и скорость элюции была снижена до 4 — 5 мл/см -ч. Иа рис. 74 представлен профиль элюции. В заштрихованной области выходят очищенные полисомы, во фракции 63 — рибосомы, а в промежутке между ними обнаруживаются в различных пропорциях смеси чистых рибосом с комплексами, содержащими 2 — 3 рибосомы [Tai, Davis, 1979]. [c.142]

Из этих данных видно, что совокупности двух упомянутых требований лучше всего отвечают ацетонитрил и метанол. Ацетонитрил особенно популярен в ЖХВД, так как имеет не только меньшую вязкость, но и более низкую, чем у метанола, упругость паров, что уменьшает опасность кавитации в насосах при быстром всасывании в них элюента. С другой стороны, хорошо очищенный ацетонитрил для ЖХВД дорог, а очистка его в лабораторных условиях затруднительна. [c.191]

Необходимо проверить его полную растворимость в смеси орга нических растворителей с водой или буфером для всех пропорций этой смеси, образующих градиент элюцип. Исходный раствор препарата следует отфильтровать через фильтр с отверстиями размером не более 0,5 мкм. Препарат должен быть по возможности растворен в исходном элюенте, которым уравновешена колонка, поэтому па предшествующих этапах очистки препарата желательно х спользо-вать летучие буферы и удалять их лиофилизацией. Если в препарате содержатся нелетучие соли, их следует убрать диализом или гель-фильтрацией. Моя<но использовать предколонку для защиты основной колонки. [c.193]

Из общих рекомендаций, относящихся к хроматографии на ок-сианатите как белков, так и НК, отметим предпочтительность использования для очистки биополимеров широких и коротких колонок. Это связано, в частности, с невысокими гидродинамическими характеристиками сорбента. Колонки с оксианатитом отличаются относительно медленным течением элюента и довольно легко забиваются при измельчении его хрупких кристаллов. С другой стороны, они обнаруживают склонность к образованию каналов для элюента, поэтому иногда имеет смысл осторожно (чтобы не разрушить кристаллы) перемешивать сорбент, что трудно сделать в узкой и длинной колонке. Верхний слой оксиапатита особенно легко засоряется — его нужно время от времени удалять. [c.231]

Для очистки мембранной D-лактатдегидрогеназы Е. соИ хроматографией на оксиапатите [Pratt et al., 1979] был использован пологий линейный градиент концентрации (0—0,2 М) К-фосфатного буфера, pH 7,2 (500 мл для колонки размером 2,6 X 20 см). Растворимость белка обеспечивали включением в состав буфера детергентов (1% Тритона Х-100 и 0,1% ДДС-Na). Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из ме.мбрин с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. На всех хроматографических этапах очистки в составе элюентов тоже присутствовали детергенты. [c.234]

Метод 1 [Myers et al., 1980]. После предварительной очистки препарат вносили на короткую колонку (1x5 см) DEAE-целлюлозы элюцию вели 0,3 М К-фосфатным буфером (pH 7,2), содержавшим 2 мМ ДТТ, 10% глицерина и 0,2% NP-40 (вероятно, статический вариант хроматографии). На втором этапе очистку проводили в режиме динамической хроматографии с помощью точно такого же элюента, но на колонке СМ-сефарозы L-6B длиной 59 см. [c.308]

Аффинный сорбент с групповой специфичностью пмеет явное преимущество в том случае, когда ставится задача не только очистки, но и разделения нескольких веществ, наделенных сродством к одному и тому же лиганду. Если степень этого сродства не одинакова для разных веществ группы или если удается подобрать для них различные (специфические) конкурентные элюенты, то разделение веществ люжет быть осуществлено хроматографически, в ходе пх поочередной элюции с сорбента, что не удалось бы сделать в случае лиганда, обладающего сугубо индивидуальной специфичностью. С позиций очистки одного вещества это же положение дел можно сформулировать следующим образом снижение избирательности сорбции ири использовании сорбентов с групповой специфичностью часто удается компенсировать за счет избирательности аффинной конкурентной элюции. [c.363]

Элюцию вещества с лиганда осуществляют также путем восстановления S—S-свя.зи, пропуская в качестве элюента через колонку раствор цистеина (5—20 мМ в буфере с pH 8), меркаптоэтанола или ДТТ. Примеры режимов элюцпи приведены ниже отметим только, что при очистке белка концентрация восстанавливающего агента в элюенте должна быть минимально необходимой, чтобы избежать восстановления и разрыва внутримолекулярных S—S-связей белка. [c.396]

Приемы, используемые в аффинной хроматографии, в основном те же, что и в других рассмотренных выше методах, поэтому достаточно будет остановиться лишь на некоторых отличительных особенностях. Уже упомина.лось, что в большинстве случаев решается задача аффинной очистки одного вещества, сила связывания которого на сорбенте намного превосходит силы неспецифической сорбции других компонентов исходной смеси. Это позволяет эффективно использовать аффинную хроматографию и на ранних стадиях очистки вещества. Нередко на этой стадии в препарате могут содержаться выпавшие в осадок белки или липопротеиды, способные забивать колонку. В таком случае следует элюцию вести в свободном объеме, промывая сорбент на фильтре (с периодическим перемешиванием). Заметим, что промывку сорбента в объеме выгоднее вести несколько раз небольшими пори иями элюента, чем сразу большим его объемом. Аффинная хроматография в свободном объеме удобнее, чем колоночная, и в том случае, когда нужный белок очень мало представлен в неочищенном экстракте, но хорошо связывается сорбентом. Хроматография в объеме позволяет использовать такую концентрацию суммарного белка в экстракте, с которой из-за вязкости было бы трудно работать на колонке. Аффинная сорбция в объеме широко ис1ю.1гьзуется в радио-иммунных методах исследования. [c.409]

Готовят суспензию 19.9 г (114 ммоль) дикалийгидрофосфата, 4,14 г (30,0 ммоль) дигидрофосфата калия и 1,20 г (11,4 ммоль) бромида натрия в растворе 16,1 г (99,5 ммоль) аллилхлорида Ж-156 в 120 мл безводного диметилсульфоксида, нагревают до 80 С (температура бани) и перемещивают 24 ч при этой температуре (вытяжной шкаф, запах диметилсульфида ). После охлаждения реакционную смесь выливают в смесь 400 мл Н2О и 200 мл ССЦ (осторожно ) и после разделения фаз водную фазу экстрагируют 100 мл ССЦ. Органическую фазу высущивают над Ыа280д, растворитель отгоняют под вакуумом и желтый остаток фракционируют при 2 мм рт. ст. При 66-72 С получают 11,2 г (80%) альдегида в виде бесцветного масла, по 1,4647. [При небольших загрузках рекомендуется проводить очистку продукта хроматографией на колонке (силикагель, размер частиц 0,06-0,2 мм, элюент -гексан-эфир 9 1)]. [c.134]

Раствор азулена пропускают через колонку с AljOj (30 х 4 см, 200 г AljOj в основной форме, степень активности II, элюент н-гексан), а затем упаривают элюат при небольшом разряжении, в результате чего получают 9,10 г (36%) азулена в виде темно-синих пластинок с т. пл. 97-98 С. Дальнейшую очистку проводят сублимацией в вакууме водоструйного насоса (температура бани 90 "С), получая большие синие пластинки с т. пл. 99-100 С. [c.329]

О °С Осадок дитозилата отфильтровывают, промывают водой и водным раствором NaH Og, потом высушивают в вакууме Продукт перекристаллизовывают из метанола Выход дитозилатов 79—89 % Маслообразные дитозилаты выделяют другим методом После выливания реакционной смеси в НС раствор дважды экстрагируют бензолом Экстракт промывают двумя порциями воды, разбавленным водным раствором NaH Og и снова водой, высушивают над безводным a lj и упаривают бензол. Дитозилат получают в виде масла, очистка которого хроматографическим методом (колонка с силикагелем, хлористый метилен в качестве элюента) дает продукт с выходом 81—83 %. Данные для дитозилатов олигоэтиленгликолей, полученных описываемым методом, приведены в таблице [c.191]

Некоторое время считалось, что анализ ионных или ионогенных соединений следует проводить методом ион-париой хроматографии с обращенными фазами. Однако в настоящее время исследователи останавливают свой выбор либо на традиционном варианте ионообменной хроматографии, либо на хроматографии с применением немодифициро-ванного силикагеля или оксида алюминия. В последнем случае применяют водные растворители и буферы. Хроматография на немодифицированном силикагеле или оксиде алюминия имеет существенные преимущества по сравнению с ОФ-вариаитом. Во-первых, свойства сорбента не меняются от партии к партии, во-вторых, сорбенты в меньщей степени подвержены гидролизу и, наконец, при анализе таких проб, как сыворотка, не требуется предвар1ггельная очистка [275]. Оксид алюминия ие изменяет своих свойств при использовании водных элюентов с pH от 2 до 12. Силикагель растворим в воде при рН>8, однако этот недостаток может быть преодолен при насыщении растворителя силикагелем в фор-колонке. При использовании ТСХ описанные преимущества реализуются наилучшим образом (см. разд. 1П, Б, 2). Учитывая взаимное влияние буфера, растворенного вещества, рК, состава элюента и pH, можно варьировать условия и тем самым оптимизировать процесс разделения. Разработанные [c.399]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология