Элюент вязкость

На эффективность разделения компонентов в хроматографическом процессе влияет очень много факторов. Сорбент (твердый или жидкий) должен обладать определенной селективностью. Элюент должен быть инертным по отношению к компонентам и сорбенту, обладать малой вязкостью, обеспечивать высокую чувствительность детектора. При хроматографировании растворов часто применяют комплексообразующие вещества, которые способствуют разделению компонентов (разное вымывание компонентов с сорбента — изменяются константы Генри). Уменьшение скорости элюирования приближает процесс к равновесному и улучшает разделение компонентов. Если с увеличением длины колонки растет степень разделения, то увеличение ее диаметра приводит, как правило, к ухудшению разделения вследствие конвекционного перемешивания разделяемой смеси. [c.182]

Все это привело к некоторому компромиссному решению при создании жидкостных хроматографов, которое было достигнуто путем сохранения достаточно высокой удельной поверхности адсорбента при уменьшении размеров его гранул до 2—10 мкм. Уменьшение размера гранул, сокращая пути диффузии, влечет за собой, однако, уменьшение проницаемости колонны, В результате этого увеличиваются времена удерживания, а следовательно, усиливается размывание пиков. Для сокращения времен удерживания в набитых такими адсорбентами колоннах применяют значительное повышение давления у входа в колонну. В зависимости от вязкости элюента это давление составляет обычно от единиц до немногих десятков мегапаскалей, обеспечивая достаточную для аналитических целей скорость потока элюента через колонну. Так как жидкий элюент можно считать практически несжимаемым, то при постоянной скорости потока ш удерживаемые объемы получаются умножением соответствующих исправленных времен удерживания на ш. [c.284]

Колонны с неполярным адсорбентом при применении полярных элюентов имеют, однако, меньшую эффективность по сравнению с аналогичными по размерам колоннами с полярным адсорбентом с такими же размерами зерен, удельной поверхностью и пористостью, так как вязкость полярных элюентов (в частности, водно-спиртовых смесей) значительно выше, чем таких неполярных элюентов, как гексан. Это увеличивает размывание пиков. [c.308]

Чаще всего об этом приходится заботиться при очистке или фракционировании ферментов. Нередко их хроматографию приходится вести на холоду, хотя для целей самого хроматографического процесса это и невыгодно — увеличивается вязкость элюента, ухудшается разрешение пиков (низкомолекулярные вещества хроматографируют при комнатной, а иногда и при повышенной, до 50—60°, температуре в этом случае особое внимание должно быть уделено деаэрации обменника н элюента и опасности смены температур из-за возможности появления пузырей газа, как было подробно сказано в гл. 3). [c.292]

При разделении макромолекул основной вклад в размывание полосы определяется затрудненной массопередачей. К сожалению, многие из применяемых элюентов имеют высокую вязкость. Для снижения вязкости (а также для улучшения растворимости) эксклюзионную хроматографию часто проводят при повышенных температурах, что существенно улучшает эффективность хроматографической системы. [c.48]

Кислородосодержащие растворители гасят флуоресценцию, и их так же как и элюенты, поглощающие свет в области возбужденного излучения, нельзя применять. Галогенсодержащие растворители (хлороформ и метиленхлорид) должны быть использованы с осторожностью, так как имеют тенденцию ослаблять флуоресценцию. Если в растворителе нет флуоресцирующих веществ, флуориметр может работать в градиентном режиме. Флуориметр меньше, чем другие детекторы, зависит от изменений температуры или давления. Однако уменьшение температуры или увеличение вязкости некоторых растворителей затрудняет флуоресценцию. [c.156]

Дтя колонок меньшего диаметра также соблюдайте пропорциональное снижение расходов. В связи с меньшей вязкостью нормально-фазовых элюентов требования к низкому расходу растворителя менее жестко. [c.497]

В течение некоторого времени в центре внимания хроматографистов находилась сверхкритическая флюидная хроматография (СФХ) ввиду тех преимуществ, которые присущи этому методу [22]. Поскольку свойства жидкости в сверхкритическом состоянии являются промежуточными между свойствами жидкости и газа, она представляет интерес в качестве подвижной фазы в ЖХ, и СФХ часто рассматривают как гибрид ЖХ и ГХ. Вязкость жидкости в сверхкритическом состоянии намного ниже обычной, что делает возможной быструю диффузию сорбатов в подвижной фазе. Это в свою очередь влияет на скорость потока элюента, что может использоваться для достижения заданного разрешения. Другое очевидное преимущество СФХ — быстрое испарение подвижной фазы при атмосферном давлении. Следовательно, основные достоинства СФХ — это возможность проведения быстрых хроматографических разделений без потери разрешения, легкость соединения колонок для СФХ с масс-спектрометром и [c.242]

Степень разделения веществ в колонке определяется расстоянием между максимумами двух соседних пиков и шириной хроматографической полосы. Расстояние между максимумами зависит от селективности адсорбента по отношению к разделяемым веществам, а ширина полосы — от эффективности колонки, которая определяется характером упаковки частиц адсорбента, вязкостью элюента, размыванием в соединительных узлах и детекторе. Высокоэффективная колонка способна разделять вещества и при малой селективности адсорбента. [c.112]

Перед тем как рассматривать методику расчета положения фронта элюента, необходимо подробнее остановиться на функции потока в круговой ТСХ. Общеизвестно, что скорость подвижной фазы в обычной линейной ТСХ зависит от многих факторов, в том числе от специфических свойств слоя сорбента, обусловливающих объемную скорость элюента, величины поверхностного натяжения, смачиваемости сорбента, вязкости подвижной фазы, температуры и т. д. При контролируемом пото- [c.21]

Химические и физические свойства элюента относительно мало влияют на объемную скорость потока подвижной фазы в круговой ТСХ. Почти для всех жидкостей, применяемых в качестве подвижных фаз, за исключением воды и жидкостей с вязкостью, близкой к вязкости бутанола, объемная скорость элюента изменяется в пределах от [c.23]

Для работы на современных аналитических колонках длиной 50—250 мм и внутренним диаметром 2—10 мм, заполненных сорбентом с диаметром частиц 5—15 мкм, при применении растворителей средней вязкости и при комнатной температуре требуется давление элюента от 0,5 до 30 МПа. При использовании сорбентов с диаметром частиц менее 3 мкм и колонок длиной более 00 мм может потребоваться создание более высоких давлений, например до 50—70 МПа. Применение высоких давлений в жидкостной хроматографии обусловливает повышенные требования к конструкциям и характеристикам насосов, клапанов, сальников, двигателей, дозаторов, колонок и соединительных линий. [c.256]

Схема пневмогидравлического насоса приведена на рис. П1.12. Давление жидкости, создаваемое плунжером 10, пропорционально давлению газа на поршень 11 и зависит от отношения сечений поршня и плунжера. Предел отклонения расхода элюента от среднего значения составляет 5%. Расход элюента зависит от заданного входного давления воздуха и сопротивления колонки, которое в свою очередь зависит от размера частиц сорбента, степени их уплотнения и вязкости элюента. Объем элюента в рабочей камере насоса в среднем составляет от 20 до 60 см (60 см для хроматографа Цвет-304 ). Регулировка потока достаточно проста. Поток можно мгновенно остановить. При повторном пуске давление быстро восстанавливается. [c.258]

В большинстве случаев перед хроматографическим процессом стоит задача надежного разделенпя двух илп более заранее известных компонентов исходной смеси. Еслп хроматографическая система j e определена, то в распоряжении экспериментатора етце остается возможность выбора целого ряда физических параметров процесса с целью оптимизации условий разрешения зон (пиков) в этой снстеме. Краткое знакомство с основами теории хроматографии имело целью дать обоснования для такого выбора. Теперь можно подвести итоги. Последовательно рассмотрим следующий ряд параметров геометрия колонки, размер гранул, набивка колонки, скорость элюции, физические свойства элюента (вязкость, температура) и, наконец, загрузка колонки. Рассмотрение будем вести с позиции улучшенпя разрешения и одновременно уменьшения продолжительности хроматографического процесса. Но сначала надо привести еще одну зависимость — скорости ЭоЛюции и от разности давлений иа входе и выходе колонкп Д/ ( перепад давления ) и от размера гранул. Ее описывает уравнение Дарси [c.36]

Вязкость обычных жидкостей много больше вязкости газов, поэтому в жидкостной хроматографии процессы внешней (между зернами адсорбента) и внутренней (в их порах) диффузии играют особенно важную роль, приводя к сильному размыванию пиков. Это влечет за собой, как известно, уменьшение числа теоретических тарелок N и соответствующий рост Я — высоты, эквивалентной теоретической тарелке, т. е. к падению эффективности хроматографической колонны. В результате часто оказывается невозможным реализовать селективность, присущую данной системе адсорбент — дозируемые вещества — элюент, которая определяется прйродой этой системы. Эти проблемы имеют место и в газовой хроматографии, однако, как было показано ранее, в газовой хроматографии, как правило, можно пренебречь конкурирующей адсорбцией элюента, снижающей адсорбцию дозируемых веществ. Поэтому в газовой хроматографии можно использовать непористые или широкопористые адсорбенты со сравнительно малой удельной поверхностью. Поверхность таких адсорбентов обычно более однородна и доступна. В жидкостной же хроматографии не очень больших молекул приходится применять адсорбенты с гораздо более высокой удельной поверхностью, а следовательно, более [c.283]

Реакция протекает вправо при избытке кислоты. Ионит в колонке отмывают водой от избытка кислоты, после чего ионит готов к применению. Пробу пропускают через колонку, колонку промывают водой или элюентом. Собирают элюат целиком или по фракциям. Перед каждым последующим применением необходимо проводить регенерацию ионита в колонке, так как в колонке содержатся различные ионы (например, Х , Хг). Происходящий при этом химический процесс аналогичен описанному уравнением (7.4.5). Процесс замены ионов Х+ ионами Хь Ха. .. называют регенерацией ионита, чтобы подчеркнуть, что ионит при этом возвращается в свое исходное состояние. Для сдвига равновесия вправо необходимо подобрать нужную концентрацию кислоты. Концентрированные растворы повышают скорость ионного обмена, но из-за высокой вязкости раствора снижается диффузия ионов. Поскольку процесс ионного обмена протекает сте-хиометрически, можно рассчитать полную обменную емкость колонки, зная количество ионита. Но рассчитанную обменную емкость не всегда можно полностью использовать (разд. 7.3.1.1). Пусть в колонке имеется ионит в Н -форме. Требуется провести ионный обмен с ионами К" . В месте подачи анализируемой пробы в колонку происходит полный обмен ионов Н+ на ионы При дальнейшем пропускании раствора, содержащего ионы К (фронтальная техника проведения ионного обмена), происходит смещение зоны, заполненной ионами К" , вниз. При этом колонку можно разделить на три слоя (рис. 7.17). В первом слое находится ионит только в К" -форме, во втором слое — ионит, содержащий оба иона, в третьем слое — ионит, содержащий ионы Н" . Распределение концентраций происходит по 8-образной кривой (ср. с формой полос элюентной хроматографии). При дальнейшем пропускании раствора КС происходит зарядка второго слоя ионами до проскока. Число ионов К" , которые могут быть количественно поглощены колонкой до проскока ионов, называют емкостью колонки до проскока. Эта емкость меньше величины полной емкости колонки, так как проскок К" -ионов наблюдается в тот момент, когда в колонке еще содержатся Н+-ионы. [c.378]

Адсорбенты представляют собой частицы шаровидной или неправильной формы приблизительно одинакового размера. Использ. силикагель с уд. пов-стью 20—600 м г и дгм-метром пор 4—100 нм, а также АЬОз. Часто примен. модифицированный силикагель, напр, с привитыми углеводородными rpynna -iH. Пов-сть таких адсорбентов становится гидрофобной, и с их помощью разделяют в-ва в водных р-рах при этом можно повысить т-ру колонки до 60—70 °С, что приводит к увеличению эффективности разделения в неск. раэ благодаря снижению вязкости элюента. [c.204]

Изменение температуры дает сложный эффект. С ее новышением снижается вязкость элюента, но, что более существенно, может изменяться и характер взаимодействия вещества с неиодвпжной фазой, т. е. величина К (как правило, она уменьшается). Иногда это используют для управления элюцией (градиент температуры), [c.39]

Из этих данных видно, что совокупности двух упомянутых требований лучше всего отвечают ацетонитрил и метанол. Ацетонитрил особенно популярен в ЖХВД, так как имеет не только меньшую вязкость, но и более низкую, чем у метанола, упругость паров, что уменьшает опасность кавитации в насосах при быстром всасывании в них элюента. С другой стороны, хорошо очищенный ацетонитрил для ЖХВД дорог, а очистка его в лабораторных условиях затруднительна. [c.191]

Итак, при выборе режима хроматографии или при анализе результатов описанного в литературе хроматографического эксперимента следует оценить роль следующих параметров элюента природы, концентрации, pH и емкости буфера, в частности близости выбранного значения pH к границе нормального диапазона эффективной буферной емкости природы ь концентрации ионов соли температуры, вязкости п диэлектрической проницаемости растворителя (с ее уменьшением ослабляется ионизация обменника) наличия в элюенте добавок, обеспечивающих нативность биологического препарата (глицерин, р-меркаптоэтанол или ДТТ, ионы Mg и др.), улучшающих его растворимость или препятствующих агрегации его молекул (детергенты, мочевина, органические растворители), блокирующих негиецифическую сорбцию вещества на материале матрицы (мочевина, детергенты и др.). [c.256]

Приемы, используемые в аффинной хроматографии, в основном те же, что и в других рассмотренных выше методах, поэтому достаточно будет остановиться лишь на некоторых отличительных особенностях. Уже упомина.лось, что в большинстве случаев решается задача аффинной очистки одного вещества, сила связывания которого на сорбенте намного превосходит силы неспецифической сорбции других компонентов исходной смеси. Это позволяет эффективно использовать аффинную хроматографию и на ранних стадиях очистки вещества. Нередко на этой стадии в препарате могут содержаться выпавшие в осадок белки или липопротеиды, способные забивать колонку. В таком случае следует элюцию вести в свободном объеме, промывая сорбент на фильтре (с периодическим перемешиванием). Заметим, что промывку сорбента в объеме выгоднее вести несколько раз небольшими пори иями элюента, чем сразу большим его объемом. Аффинная хроматография в свободном объеме удобнее, чем колоночная, и в том случае, когда нужный белок очень мало представлен в неочищенном экстракте, но хорошо связывается сорбентом. Хроматография в объеме позволяет использовать такую концентрацию суммарного белка в экстракте, с которой из-за вязкости было бы трудно работать на колонке. Аффинная сорбция в объеме широко ис1ю.1гьзуется в радио-иммунных методах исследования. [c.409]

Какие же алкильные группы можно химически привить указанными способами к поверхности силикагеля Наиболее применимы длинные алкильные цепи, обычно Се и i8, но в последнее время растет популярность привитых более коротких алкилов Сл и Сз, особенно на силикагелях с широкими порами для анализа биологически важных больших молекул. Чаще всего применяют привитой октадецилсилан. Он наиболее сильно удерживает анализируемые вещества и позволяет работать с элюентами, содержащими мало воды. Это целесообразно, так как анализируемые вещества, как правило, лучше растворяются в метаноле или ацетонитриле, чем в воде. Кроме того, аномально высокая вязкость смесей метанола и воды существенно снижается при большом содержании метанола, что позволяет работать при сравнительно низком давлении на колонке с боль-Вой эффективностью за счет повышения скорости диффузии при снижении вязкости. [c.97]

Эффективность колонки зависит от размера частиц и структуры пор адсорбента, от равномерности набивки колонки, вязкости элюента и скорости массообмена Удлинение колонки не всегда приводит к > пучшению разделения, т к возрастает сопротивление колонки, увеличивается давление элюента на входе и время проведения опыта, снижается чувствительность и точность анализа из-за уширения пика анализируемого компонента [c.153]

Элюенты должны элюировать анализируемые соед с оптим значениями к, обладать низкой вязкостью, обеспечивать необходимый уровень сетективности, быть дешевыми, нетоксичными, инертными, совместимыми с методами детектирования (напр, с УФ летектором нельзя использовать в качестве элюента бензо т) [c.153]

В справочтюй литературе, как уже отмечено выше, свойства смешанных растворителей отнесены к составам, вьфаженным в молярных или в массовых величинах. Для того чтобы разобрать по имеющимся дашагм влияние об-ьемной доли модификатора на вязкость бинарных элюентов, необходимо пересчитать молярную или массовую долю в объемную по уравнениям (6.1), (6.2) и (6.3). [c.365]

Протонный вискозиметт обычно используют в качестве специального детектора для высокомолекул5фных веществ. При этом измеряется фоновая вязкость элюента. При прохождении через детектор определяемого высокомолекулярного соединения вязкость возрастает и результирующий сигнал регистрируется в виде пика. [c.291]

Скорость протекания потока элюепта регулируют путем подбора внутреннего диаметра трубки. Максимальная скорость определяется дисперсностью частиц, распределением частиц в слое по размеру и вязкостью элюента. Определенное уменьшение скорости вызывает уменьшение внутреннего диаметра тефлоновой трубки от обычно применяемых размеров, равных 1—1,6 мм, до 0,7—0,8 мм. В некоторых случаях уменьшение скорости приводит к улучшению разделения, в особенности на слоях сорбента с крупными частицами (соотношение Н и ). В этом случае очень важно, чтобы камера была плотно закрыта. При работе со слоями сорбента, содержащего окись индия, максимальный диаметр тефлоновой трубки составляет 0,7 мм, а оптимальная величина диаметра в соответствии с нашим пока еще ограниченным опытом — 0,5 мм. ТСХ-нластинки на основе [c.65]

В сэндвич-камере величины К должны быть постоянными независимо от длины пути разделения, что было подтверждено в случае бензола и нропанола-1. Сильное возрастание величины К в случае применения ацетона для значений 2/, не превышающих 100 мм, предполагает предварительное насыщение сорбента из газовой фазы благодаря высокому давлению паров ацетона. Это происходит даже в сэндвич-камере с расстоянием между поверхностью сорбента и крышкой 1 мм. Уменьшение К для гексана при 2/ >70 мм и для четыреххлористого углерода при 2 > 60 мм можно объяснить только эффектами испарения. Степень предварительного заполнения пор сорбента из газовой фазы в зависимости от 2/ можно рассчитать по величине К, которая различна для К-камеры и 1-миллиметровой сэндвич-камеры. Соответствующие данные приведены в нижней правой части рис. 6.7. Было показано, что, например, в К-камере с насыщенной атмосферой при использовании бензола с 100 мм поры слоя сорбента заполнены растворителем в среднем более чем на 30%. На основании полученных данных пришли к выводу, что при выборе растворителя или системы растворителей в качестве элюента (табл. 6.9) необходимо учитывать такие характеристики, как удельная масса, температура кипения, давление паров и теплота испарения. Такой подход тем более важен в случае использования смесей растворителей. В соответствии с нашими собственными исследованиями поверхностное натяжение растворителей пе играет сколько-нибудь заметной роли в хроматографическом разделении. В присутствии сорбента величина 7, очевидно, изменяется в значительной степени. Однако вязкость растворителя является очень важным фактором, влияющим на величину К и, следовательно, на I. Уменьшение вязкости при повышении температуры оказывает положительное влияние на величину К. Параметры, харак- [c.131]

Наиболее широко используют метод ТСХ под давлением (ТСХД), разработанный Тихаком с сотр., для реализации которого сконструированы приборы Хромпрес-10 и -25 , выпускаемые фирмой Лабор МИМ (ВНР). В этих камерах можно проводить сэндвич-, круговую, треугольную, антикруговую, двумерную, линейную в одном и двух направлениях, а также аналитическую и препаративную одномерную ТСХ при низком, среднем и высоком давлении на пластинах разного размера на разных подложках, покрытых сорбентом с малым диаметром частиц (<5 мкм). При этом можно применять элюенты с высокой вязкостью. [c.362]

В тех случаях, когда разделению подлежат ионы, сродстЁо которых к смоле различается значительно, элюирование производится раствором кислоты. Установлено, что минимальный расход элюента достигается при некоторой оптимальной концентрации кислоты. При высоких скоростях протекания оптимум выражен более четко. С повышением концентрации кислоты скорость элюирования возрастает вследствие смещения ионо- обменного равновесия. С другой стороны, высокая концентрация кислоты вызывает усадку ионита, что ведет к уменьшению коэффициентов диффузии ионов в матрице ионита и снижает скорость элюирования. Так же действует и увеличение вязкости раствора с ростом концентрации кислоты. [c.160]