Электрофорез моносахаридов

Идентификацию М. осуществляют по характеру моносахаридов, входящих в М., подвижности при электрофорезе и по спектрам ЯМР. Важную роль в анализе играет способность М. расщепляться специфич. ферментами, к-рые могут катализировать гидролиз отдельных гликозидных связей (гидролазы), элиминирование заместителя из положения [c.148]

В настоящее время разработаны более совершенные методы анализа. Наиболее широкое распространение из них получили следующие распределительная хроматография на бумаге или на колонках с целлюлозой, углем и другими адсорбентами хроматография в тонком слое адсорбента газожидкостная хроматография производных моносахаридов электрофорез на бумаге. [c.70]

Электрофорез на бумаге. Моносахариды, имеющие соседние гидроксильные группы в положении цис, образуют с борной кислотой эфиры, в результате чего возникают отрицательно заряженные комплексы типа [94] [c.86]

После предварительной оценки на основании данных хроматографии, электрофореза и качественных цветных реакций следующим этапом в установлении строения аминосахаров является превращение в нейтральные моносахариды или аминокислоты известного строения. Однако для решения этого сложного вопроса стандартные подходы отсутствуют, и в каждом случае в зависимости от положения, числа и характера аминогрупп он решается индивидуально. [c.281]

Результаты, сходные с хроматографией на бумаге, при разделении моносахаридов дает метод электрофореза на бумаге . Хотя проведение электрофореза по сравнению с хроматографией требует более сложного -оборудования, разделение веществ с помощью электрофореза происходит быстрее. Известно много случаев успешного применения электрофореза для исследования смесей, которые с трудом поддаются разделению путем хроматографии на бумаге. Поэтому электрофорез является ценным методом анализа моносахаридов, дополняющим метод хроматографии на бумаге . [c.411]

Электрофорез особенно успешно применяется для обнаружения моносахаридов, в молекуле которых имеются основные (как в аминосахарах) или кислые (как в альдоновых, уроновых, сахарных кислотах, фосфатах и сульфатах сахаров) группировки (см., например, ). В тех случаях, когда необходимо разделить нейтральные моносахариды, используют их способность образовывать отрицательно заряженные комплексы с борной кислотой или ее солями , с молибдатами , вольфраматами, германа-тами и рядом других неорганических анионов разные анионы предъявляют часто различные требования к стереохимии моносахарида, необходимой для образования устойчивых комплексов. Естественно поэтому, что выбор комплексообразователя и условий проведения электрофореза, в первую очередь pH растворов, весьма существенно влияет на результат разделения (см. ). Для обнаружения зон веществ на электрофореграммах применяется большинство реагентов, используемых при хроматографии на бумаге. [c.411]

Идентификация олигосахаридов вследствие их огромного разнообразия представляет значительно более сложную задачу, чем в случае моносахаридов. Приемы, применяемые для этой цели, аналогичны тем, которые используются в химии моносахаридов (см. гл. 14), однако необходимо отметить, что хроматографическая идентификация в этом случае оказывается гораздо менее надежной. Тем не менее для выбора между ограниченным числом олигосахаридов бумажная хроматография или электрофорез с успехом могут быть использованы. Так, например, все р-/ -глюкопиранозил-/ -глюкозы хорошо разделяются на хроматограммах в подходящих системах растворителей. [c.426]

Индивидуальность полученных препаратов гликопротеинов контролируется чаще всего аналитическим ультрацентрифугированием (см., например, ), электрофорезом с подвижной границей или на носителях, хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе. Как и в случае полисахаридов, критерием однородности выделенного гликопротеина может служить неизменность его мономерного состава (моносахаридов и аминокислот) и физико-химических свойств при применении нескольких способов очистки. Для определения нативности выделенных веществ особое значение имеет контроль их биологической активности, в первую очередь иммунологических свойств. [c.567]

Удобным методом разделения и качественного и количественного анализа метилированных моносахаридов является электрофорез на бумаге в присутствии боратного буфера [62]. [c.331]

После разделения моносахаридов ленты снимают, просушивают и проявляют анилинфталатом. Количественно моносахариды могут быть определены по площадям пиков, полученным при записи проявленных электрофорегра15(1м на денситометре. Ниже приведены значения подвижности некоторых моносахаридов при электрофорезе в боратном буфере с pH 9,2 [95] [c.86]

Электрофорез не заменяет хроматографию, но дает очень ценную дополнительную информацию, так как разделение при электрофорезе основано на других свойствах молекул (заряд, размер, форма). Высоковольтный электрофорез на бумаге применен для разделения не только моно-, но и олигосахаридов. Этот метод может быть использован не только для производных углеводов, содержащих заряженную группу (как, например, гексуроновые кислоты, аминомоносахариды, сульфаты и фосфаты моносахаридов), но и для нейтральных соединений, способных образовывать заряженные комплексы с такими электролитами, как борат, арсе-нит или молибдат натрия. Относительные подвижности углеводов зависят от природы комплексообразователя [57]. Правильный выбор электролита часто позволяет идентифицировать углевод. Разделение кислых полисахаридов [58] проводят с помощью высоковольтного электрофореза на бумаге, нейтральные полисахариды предварительно превращают в боратные производные [59]. [c.226]

Эфиры борной кислоты и ее производных. При взаимодействии моносахаридов и их производных, содержащих г<ис-а-гликольные группировки, с борной кислотой или ее солями образуются устойчивые отрицательно заряженные комплексы. Это свойство нашло широкое применение для разделения сахаров методом распределительной хроматографии и электрофореза на бумаге а также методом ионообменной хроматографии на смолах и угле Борные эфиры сахаров были в свое время успешно использованы для установления конфигурации аномерного центра (см. стр. 34). Несмотря на то что комплексы сахаров с борат-анионом известны давно, строение их было выяснено только недавно Было показано, что существуют два типа боратных комплексов монокомплекс XXVII и дикомплекс XXVIII [c.148]

Тейхоевые кислоты являются одним из двух высокомолекулярных веществ, составляющих основу клеточных стенок грамположительных бактерий, где они соединены со вторым, биополимером — мукопептидом клеточной стенки. Тейхоевые кислоты — особый тип биополимера. Они содержат кроме углеводов и аланина многоатомные спирты — рибит или глицерин и остатки фосфорной кислоты. Тейхоевые кислоты выделяют из клеточной стенки, где их содержание составляет 20—50%, экстракцией 5%-ной водной трихлоруксусной кислотой . Полученные этим методом образцы тейхоевых кислот имеют молекулярный вес 4000— 5000 показано, что в этих условиях выделяется уже деградированный биополимер. Если предварительно выделенные стенки бактерий подвергнуть обработке ферментом, разрывающим связь тейхоевых кислот с другим ингредиентом стенки — мукопептидом, то с помощью электрофореза можно выделить тейхоевую кислоту с молекулярным весом около 2 ООО ООО,, которая, вероятно, является нативным биополимером. Из данных кислотного, ш,елочного и ферментативного гидролиза следует, что тейхоевые кислоты содержат остатки фосфорной кислоты, аланина, многоатомных спиртов — рибита или глицерина и одного из моносахаридов — глюко- [c.584]

Определение моносахаридного состава проводится анализом продуктов кислотного гидролиза или. чаще, мета-нолиза сахарида. Состав продуктов кислотного гидролизата анализируется с помощью хроматографии или электрофореза на бумаге. Нередко используется коммерческий углеводный анализатор, разделение осуществляется на ионообменных смолах методом распределительной хроматографии в водно-спиртовой смеси или в виде боратных комплексов сахаров. Скорость гидролиза гликозидных связей, образованных остатками нейтральных, амино- и дезокси-сахаров, различна. Легче всего отщепляются остатки сиаловых (N-ацетилнейраминовой, N-гликолилнейраминовой) кислот, труднее всего расщепляются свяэи, образованные остатками амино-сахаров и уроновых кислот. Фуранозиды гидролизуются значительно быстрее пиранозидов. В итоге при гидролизе олигосахарида может иметь место неполное расщепление связей или кислотная деструкция образующихся моносахаридов, что искажает результаты анализа. Лучшие результаты дает метанолиз в присутствии газообразного хлористого водорода (1.7 н. H l, 80 С, 18 ч) — в этом случае образуются метилгликозиды, устойчивые к кислотной деструкции. Качественный и количественный состав продуктов метанолиза определяется методом газожидкостной хроматографии в виде триметилсилильных или трифторацетильных производных. [c.463]

Плазматические мембраны лимфоцитов (содержащие 20 мг общего белка) экстрагировали 5 мл 1%-ного дезоксихолата, после чего растворимую фракцию (содержащую 85% мембранного белка) фильтровали через колонку с аффинным сорбентом. При элюировании 1 % -ным раствором дезоксихолата до нулевой базовой линии (при 280 нм) отмывали примерно 75% сорбированного белка. Рецепторные гликопротеины (составляющие 5% от фракции мембранных белков) элюировали раствором метил-а-D-глюкоииранозида (20 мг/мл) в 1%-ном дезоксихолате. Элюат подкисляли 2%-ной уксусной кислотой (добавляя 0,1 объема элюата), выпавший осадок промывали тремя порциями по 10 мл 95%-ного этанола для удаления моносахарида и дезоксихолата, а затем высушивали в токе воздуха. По данным электрофореза в акрил амидном геле (в присутствии 0,1%-ного додецилсуль-фата натрия) полученный препарат содержал пять компонентов. [c.454]

В литературе имеются многочисленные примеры разделения витаминов, поли- и моносахаридов (в виде комплексов с боратом), органических кислот, аминов, красителей, ионов металлов и т. п. Здесь нет возможности даже кратко рассмотреть все возможные применения электрофореза. Много сведений можно найти в книге Рибейро с сотрудниками [20], а также в работах [36, 37]. Электрофорез сыворотки крови подробно описан Г. В. Троицким [6]. [c.106]

Электрофорез на бумаге. Этот метод позволяет разделять моносахариды, которые не удается разделить на бумажной хроматограмме, например а- и р-глюкопиранозиды. При разделении нейтральных мо-носахаридо1В часто используют их способность образовывать комплек- [c.39]